楊麗玲 陳俊 張翔珍

瘦素是一種脂肪細(xì)胞衍生蛋白，其主要生理功能是調(diào)節(jié)食物的攝取和能量的消耗［1］。有研究表明瘦素在炎癥、血管再生以及生殖功能等生理進(jìn)程中起到了重要的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用［2］。子宮內(nèi)膜異位癥是指在子宮肌層或者子宮腔被覆內(nèi)膜以外部位生長(zhǎng)的子宮內(nèi)膜組織，經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)浸潤(rùn)后可出現(xiàn)出血、結(jié)節(jié)以及腹腔包塊等，常導(dǎo)致患者不孕不育，從而造成常人難以忍受的疼痛［3］。本資料選取子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組以及同期行輸卵管結(jié)扎術(shù)的婦女作為對(duì)照組，通過(guò)比較兩組間相關(guān)組織內(nèi)瘦素及瘦素受體的表達(dá)情況，探討瘦素在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014年8月至2016年12月在本院診治的32例子宮內(nèi)膜異位癥患者作為內(nèi)異組，并選取同期因子宮肌瘤行子宮切除術(shù)的32例患者作為對(duì)照組。內(nèi)異組年齡23～51歲，平均年齡（30.6±1.5）歲。身體質(zhì)量指數(shù)（BMI）20～30kg/m2，平均（21.6±1.5）kg/m2。對(duì)照組年齡 21～49歲，平均年齡（30.2±1.8）歲。BMI 20～30kg/m2，平均（20.9±1.3）kg/m2。兩組年齡、BMI等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。內(nèi)異組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）正在準(zhǔn)備開(kāi)腹手術(shù)或腹腔鏡手術(shù)患者。（2）卵巢單側(cè)或者雙側(cè)子宮內(nèi)膜異位囊腫。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）正在準(zhǔn)備小型開(kāi)腹或者腹腔鏡輸卵管結(jié)扎術(shù)。（2）無(wú)任何子宮內(nèi)膜異位癥并且無(wú)卵巢病變。本項(xiàng)目獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)和患者知情同意。

1.2 樣本的準(zhǔn)備 兩組患者在麻醉前經(jīng)靜脈抽取5ml血液于抗凝管中，靜置30min后，離心，分離血清保存。并在手術(shù)開(kāi)始時(shí)吸取盆腔子宮直腸陷凹處的腹腔液（PF）。對(duì)照組患者切取正常子宮組織。內(nèi)異組患者需吸取子宮內(nèi)膜異位囊腫液（EF）、切除子宮內(nèi)膜異位囊腫以及腹膜活檢組織（PI）。所有樣品在取用后立即-70℃保存，以備后用。

1.3 Western blot測(cè)定組織瘦素及瘦素受體 將大約400mg卵巢或PI樣本加入至400μl 1% NP-40裂解液中（上海江萊生物科技有限公司）混勻，加入一定量的蛋白酶抑制劑后于4℃，10000r/min離心5min，測(cè)定上清液中的蛋白濃度。量取含蛋白20μg的上清液，加入至8%SDS聚丙烯酰胺凝膠中進(jìn)行垂直電泳測(cè)定，然后轉(zhuǎn)移至硝化纖維素膜上進(jìn)行轉(zhuǎn)印。硝化纖維素膜分別與一抗為鼠抗人瘦素多克隆抗體（BS-0109R）和兔抗人Ob-R單克隆抗體（BS-0108M）（武漢博奧森公司）于4℃下過(guò)夜孵育（1∶200）。蛋白表達(dá)采用β-actin作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，所有條帶經(jīng)化學(xué)發(fā)光分析儀可視化后記錄。

1.4 瘦素水平的測(cè)定 采用人瘦素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）測(cè)定血清、PF以及子宮內(nèi)膜異位EF中的瘦素水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；兩變量間相關(guān)關(guān)系的分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢組織與PI瘦素與瘦素受體的表達(dá) 見(jiàn)表1和圖1。典型電泳條帶見(jiàn)圖2。

表1 卵巢與PI瘦素及瘦素受體表達(dá)水平的比較（Western blot灰度值）

2.2 各樣本之間瘦素水平的比較 見(jiàn)圖3。

2.3 內(nèi)異組患者組織間瘦素與瘦素及瘦素與瘦素受體的相關(guān)性分析 內(nèi)異組瘦素與瘦素表達(dá)水平的相關(guān)性：分別對(duì)內(nèi)異組患者的OE與EF、PI與PF、OE與PF瘦素間的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，顯示子宮內(nèi)膜異位癥患者的OE與EF、PI與PF的瘦素表達(dá)水平呈現(xiàn)強(qiáng)相關(guān)性（P＜0.05），而OE與PF間無(wú)明顯相關(guān)性（P＞0.05）。內(nèi)異組瘦素與瘦素受體表達(dá)水平的相關(guān)性：分別對(duì)內(nèi)異組患者OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體、PF瘦素與PI瘦素受體以及PF瘦素與OE瘦素受體的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，顯示OE中瘦素與瘦素受體、EF瘦素與OE瘦素受體、PI中瘦素與瘦素受體及PF瘦素與PI瘦素受體的表達(dá)水平均呈強(qiáng)相關(guān)性（P＜0.05）。

圖 1 卵巢組織與PI瘦素及瘦素受體表達(dá)水平（★P＜0．05）

圖 2 卵巢組織與PI瘦素及瘦素免疫印跡結(jié)果

圖3 兩組患者血清與PF中瘦素水平比較（A）。內(nèi)異組患者血清、PF以及子宮內(nèi)膜異位EF中瘦素水平的比較（B）

3 討論

近年來(lái)子宮內(nèi)膜異位癥患者有明顯的上升趨勢(shì)，約10%～15%的育齡婦女患有此?。?］。有研究表明，瘦素受體引導(dǎo)瘦素通過(guò)JAK2/STAT3和ERK信號(hào)通路刺激子宮內(nèi)膜異位上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，從而誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥［5］。瘦素與炎癥、血管再生之間的關(guān)系，加上其有可能在中樞和性腺水平上影響生殖功能，因此其與子宮內(nèi)膜異位癥之間的關(guān)系得到廣泛的研究。近期有研究發(fā)現(xiàn)，在子宮內(nèi)膜異位癥患者子宮內(nèi)膜中瘦素與瘦素受體的表達(dá)水平顯著高于正常的子宮內(nèi)膜，同時(shí)該項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)用瘦素治療子宮內(nèi)膜異位癥時(shí)，能夠促進(jìn)瘦素受體轉(zhuǎn)錄RNA的表達(dá)，表明在子宮內(nèi)膜異位癥患者瘦素系統(tǒng)中涉及到自分泌和旁分泌兩種模式［6］。說(shuō)明子宮內(nèi)膜異位癥所屬組織可能既是瘦素的來(lái)源，又是瘦素潛在的靶點(diǎn)。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果作者推測(cè)，子宮內(nèi)膜異位癥患者卵巢組織較正常卵巢組織更為敏感，而且其生產(chǎn)瘦素的能力可能遠(yuǎn)強(qiáng)于正常的卵巢組織。本資料結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥患者卵巢組織中瘦素的表達(dá)水平略低于對(duì)照組（P=0.16）。但是瘦素受體在正常卵巢組織中與子宮內(nèi)膜異位癥患者卵巢組織中的表達(dá)差異明顯（P=0.003）。

很多研究人員報(bào)道了子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平，但是結(jié)果卻存在著一定的矛盾性，有些學(xué)者認(rèn)為與健康人員對(duì)照子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與PF中的瘦素水平并無(wú)顯著變化［7-8］，但有些結(jié)果卻認(rèn)為比健康人員的瘦素水平要高［9-10］。此外，關(guān)于PF瘦素水平與子宮內(nèi)膜異位癥嚴(yán)重程度之間關(guān)聯(lián)性也存有爭(zhēng)議，一些研究結(jié)果為正相關(guān)，但另一些結(jié)果卻表明呈負(fù)相關(guān)性。本資料中，酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定結(jié)果顯示兩組人員血清以及PF中的瘦素水平無(wú)明顯差異，但是子宮內(nèi)膜異位EF中的瘦素水平明顯高于血清以及PF中的水平，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。表明子宮內(nèi)膜異位癥患者嚴(yán)重程度是有關(guān)聯(lián)的，可能與瘦素水平是呈正相關(guān)的。

內(nèi)異組患者子宮內(nèi)膜異位OE和PI中瘦素與瘦素受體表達(dá)水平具有較強(qiáng)的相關(guān)性。PF中瘦素水平與PI中瘦素以及瘦素受體表達(dá)之間具有強(qiáng)烈的相關(guān)性。子宮內(nèi)膜異位EF中瘦素水平與子宮內(nèi)膜異位OE中瘦素以及瘦素受體表達(dá)之間具有強(qiáng)烈的相關(guān)性。這些顯著性相關(guān)的結(jié)果表明，瘦素受體在子宮內(nèi)膜異位OE或者PI中的表達(dá)可能是子宮內(nèi)膜異位EF和PF中瘦素水平所引導(dǎo)的。

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