劉延豐

（廣東省江門市口腔醫(yī)院 江門 529000）

角質細胞生長因子是一種特異性的高效促上皮細胞增殖的生長因子，在損傷修復的過程中存在重要作用。角質細胞生長因子最初是從人胚胎肺成纖維細胞的培養(yǎng)上清中分離并純化的，是成纖維細胞生長因子家族中的一員[1]。本研究旨在探討角質細胞生長因子對人牙齦上皮細胞遷移中的影響?，F報道如下：

1 資料與方法

1.1 材料收集和分離 選取1例下頜阻生牙拔除患者手術切除的健康牙齦組織，分為9塊重復試驗3次。經磷酸緩沖鹽溶液沖洗后，置于中性蛋白酶（分散酶）中，于4℃壞境下過夜；收集皮片，置入0.25%胰酶與0.02%乙二胺四乙酸（比例為1∶1）混合液中，37℃環(huán)境中放置10～15 min，經吹打、過濾后收集單細胞懸液，并加入SKF上皮細胞培養(yǎng)液中，以10×104/ml的密度接種于培養(yǎng)瓶中；細胞鋪滿80%的培養(yǎng)瓶時，采用0.25%胰酶消化后接種傳代。本研究選擇第2～3代細胞進行試驗。

1.2 細胞培養(yǎng) 于6孔板中接種牙齦上皮細胞，細胞鋪滿后，制備一個80 μm寬的劃痕并標記，作為細胞遷移基點。用磷酸緩沖鹽溶液清洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入培養(yǎng)基，觀察組培養(yǎng)基中加入角質細胞生長因子15 ng/ml，對照組不添加。兩組培養(yǎng)基均置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3 觀察指標 于48 h、96 h、144 h后，每組取10個遷移距離最大的不同點進行測量，以平均值作為牙齦上皮細胞遷移距離。

1.4 統(tǒng)計學分析 數據處理采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 細胞培養(yǎng)結果分析 原代培養(yǎng)人牙齦上皮細胞3～5 d后，可見細胞貼壁生長，細胞展開后為多角形，呈典型鋪路石樣，上皮細胞的培養(yǎng)特征較為明顯。

2.2 兩組人牙齦上皮細胞遷移距離比較 觀察組在48 h、96 h、144 h后的人牙齦上皮細胞遷移距離均大于對照組，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。見表1。

表1 兩組人牙齦上皮細胞遷移距離比較（μm，x±s）

3 討論

劃痕實驗是體外試驗中最常用的一種檢測創(chuàng)傷愈合的模型，能夠有效模擬創(chuàng)傷愈合初期由細胞伸展、增殖、遷移覆蓋創(chuàng)面的過程[2]。因此本研究選擇劃痕實驗觀察角質細胞生長因子對人牙齦上皮細胞遷移中的影響。

角質細胞生長因子具有促進小鼠角質細胞有絲分裂的作用，因此被定名為角質細胞生長因子[3]。此外，角質細胞生長因子具有肝素結合特性，經基因測序證實為成纖維細胞生長因子家族的第七個成員，因此被稱作為FGF-7，其受體主要分布于上皮細胞。研究證實[4～5]，胚胎、新生兒及成人上皮細胞起源的成纖維細胞和來自皮膚、角膜、肺、乳腺、肝、腎、胃腸道、膀胱、卵巢、前列腺等器官的間質細胞以及血管內皮細胞、平滑肌細胞均可表達角質細胞生長因子，但單核細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、黑色素細胞、內皮細胞不表達[5]。楊云[6]研究顯示，角質細胞生長因子可有效促進表皮細胞遷移、增殖，利于皮膚創(chuàng)傷愈合。

本研究結果顯示，原代培養(yǎng)人牙齦上皮細胞3～5 d后，可見細胞貼壁生長，細胞展開后為多角形，呈典型鋪路石樣，上皮細胞的培養(yǎng)特征較為明顯；觀察組在48 h、96 h、144 h后的人牙齦上皮細胞遷移距離均大于對照組（P＜0.05）。綜上所述，角質細胞生長因子可促進人牙齦上皮細胞增殖和生長，但目前對于角質細胞生長因子促進細胞遷移的機制尚未明確，有待進一步研究。

[1]Katsirntaki K,Mauritz C,Olmer R,et al.Bronchoalveolar sublineage specification of pluripotent stem cells:effect of dexamethasone plus cAMP-elevating agents and keratinocyte growth factor[J].Tissue Eng Part A,2015,21(3-4):669-682

[2]白燕青,徐倩,曾通旭,等.攜帶低氧誘導因子-1α及角質細胞生長因子的減毒沙門菌TPHK的構建及其在低氧應激大鼠胃腸組織中的表達[J].中國生物制品學雜志,2017,30(2):137-140

[3]邱其周,程貴輝,熊偉,等.角質細胞生長因子對吸入高體積分數氧新生大鼠肺轉化生長因子β1表達的影響[J].中華實用兒科臨床雜志,2015,30(14):1080-1082

[4]宗憲磊,陸海濱,祁佐良,等.合成角質細胞生長因子活性短肽促進表皮細胞增殖的實驗研究[J].組織工程與重建外科雜志,2016,12(1):1-5

[5]楊婷.KGF-2體外促角膜上皮細胞和角膜基質細胞增殖及遷移作用研究[A].中國生物工程學會2014年學術年會暨全國生物技術大會論文集[C].浙江:中國生物工程學會,2014

[6]楊云.角質細胞生長因子促進表皮細胞遷移研究[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2016,34(13):98-100