呂永磊 焦修鳳

(河南省紅十字血液中心 河南 鄭州 450012)

為提升血液檢測質(zhì)量，血站一般通過提高檢測試劑的靈敏度、設(shè)置灰區(qū)等一系列手段提高輸血傳染性標(biāo)志物的檢出率，假反應(yīng)性檢測結(jié)果在一定程度上是無法回避的現(xiàn)實。從血液安全角度考慮，血站的常規(guī)做法是將輸血傳染病血清學(xué)標(biāo)志物篩查呈反應(yīng)性的獻(xiàn)血者采取永久延期或屏蔽[1]。血站每年都有許多無償獻(xiàn)血者，特別是熱衷于無償獻(xiàn)血事業(yè)的固定獻(xiàn)血者由于假反應(yīng)性而不能再次獻(xiàn)血[2]，不僅影響獻(xiàn)血者身心健康、家庭和諧，而且導(dǎo)致血液浪費和血源緊張。在參考中國輸血協(xié)會質(zhì)量管理工作委員會發(fā)布的《反應(yīng)性獻(xiàn)血者屏蔽與歸隊指南》的同時，綜合國外的假反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊指引，作者分析鄭州地區(qū)2 a來無償獻(xiàn)血者ELISA單側(cè)反應(yīng)性歸隊的情況，在確保血液安全的同時召回有再次獻(xiàn)血意愿的無償獻(xiàn)血者，增加血源，緩解血液緊張，為國家制定相關(guān)法律法規(guī)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1調(diào)查材料選取2015—2016年河南省紅十字血液中心HBsAg、抗-HCV、HIV 3項ELISA單側(cè)有反應(yīng)性的獻(xiàn)血者歸隊檢測標(biāo)本，共計442人。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器 Hamilton Microlab Star全自動加樣儀(瑞士HAMILTON公司)、Hamilton Microlab FAME全自動酶免分析儀(瑞士HAMILTON公司)、酶標(biāo)儀Zenyth 340RT(奧地利安圖斯公司)；Hamilton Microlab Star全自動混樣儀(瑞士HAMILTON公司)、Cobas核酸提取儀、Cobas Taqman Analyzer核酸擴(kuò)增檢測儀(美國羅氏診斷公司)、科華核酸檢測系統(tǒng)(上海科華生物工程股份有限公司)。

1.2.2試劑 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(試劑一北京萬泰；試劑二珠海麗珠)；丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒(試劑一北京萬泰；試劑二上海科華)；人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(北京萬泰)；HIV酶免試劑盒(法國伯樂，四代抗原抗體檢測)；病毒核酸檢測(NAT)：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒(Ⅰ型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光法)(上?？迫A生物工程股份有限公司)；乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒(Ⅰ+Ⅱ型)核酸聯(lián)合檢測試劑(PCR-熒光法)[羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]。

1.3方法

1.3.1離心 酶免標(biāo)本采用3 000 r/min離心10 min，核酸標(biāo)本采用4 ℃、3 000 r/min、離心10 min。

1.3.2ELISA方法 采用兩種不同廠家的ELISA試劑檢測HBsAg、抗-HCV、HIV，按照試劑說明書設(shè)定判定臨界值(Cut-off)，標(biāo)本OD值與臨界值的比值S/CO≥1為結(jié)果有反應(yīng)性，S/CD>1且S/CO≥Cut-off×0.7為灰區(qū)，S/CO

1.3.3NAT方法 兩側(cè)ELISA檢測均無反應(yīng)性標(biāo)本NAT檢測HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA。

1.3.4歸隊程序及判定規(guī)則 兩種ELISA試劑同時有反應(yīng)性時或NAT有反應(yīng)性，獻(xiàn)血狀態(tài)修改為永久屏蔽；任一種ELISA試劑有反應(yīng)性或灰區(qū)時該獻(xiàn)血者進(jìn)入歸隊程序，獻(xiàn)血狀態(tài)修改為暫緩獻(xiàn)血。6個月后，處于暫緩獻(xiàn)血狀態(tài)的獻(xiàn)血者采集標(biāo)本進(jìn)行ELISA檢測和NAT單人份檢測，ELISA和NAT全部無反應(yīng)性時，獻(xiàn)血狀態(tài)修改為歸隊，可以正常獻(xiàn)血；兩種ELISA試劑同時有反應(yīng)性或NAT有反應(yīng)性，獻(xiàn)血狀態(tài)修改為永久屏蔽；NAT無反應(yīng)性而一種ELISA試劑有反應(yīng)性或灰區(qū)時，獻(xiàn)血狀態(tài)不修改，繼續(xù)等待下輪歸隊檢測。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用IBM SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，定性資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者檢測情況HBsAg、抗-HCV、HIV 3個項目歸隊人數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者檢測情況結(jié)果(n)

2.2單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者人口學(xué)特征18～30歲年齡段占所有歸隊獻(xiàn)血者的47.6%，與其他年齡段比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在歸隊者的職業(yè)調(diào)查中，學(xué)生占?xì)w隊的39.2%，與其他職業(yè)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；獻(xiàn)血次數(shù)1次的獻(xiàn)血者占43.2%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。年齡、職業(yè)和獻(xiàn)血次數(shù)是影響獻(xiàn)血者歸隊成功率的重要因素。見表2。

3 討論

血液安全一直是國內(nèi)外輸血界關(guān)注的焦點，世界衛(wèi)生組織已正式將血液安全列為全球7項重點衛(wèi)生工作之一。作為血液安全的重要一環(huán)，血液檢測應(yīng)盡可能提高輸血傳播病毒標(biāo)志物的檢出率，作為提高檢出率的保障途徑之一就是采用高靈敏度的方法和試劑。但是靈敏度和特異性一般來說成反比關(guān)系，靈敏度提高的同時特異性下降帶來假反應(yīng)性也隨之增多。長期以來，國內(nèi)外大多數(shù)血液篩查工作人員和研究人員把注意焦點放在提高檢測靈敏度、減少漏檢上，而對于篩查的假反應(yīng)性問題卻重視不夠[3-4]。近年來國內(nèi)一些研究報道，每年全國至少有數(shù)以萬計的獻(xiàn)血者由于血清學(xué)假反應(yīng)性或NAT潛在假反應(yīng)性結(jié)果而被屏蔽獻(xiàn)血，可能會對獻(xiàn)血者的身心和名譽造成傷害，降低他們參加無償獻(xiàn)血的積極性，其結(jié)果帶來血源的減少，不利于無償獻(xiàn)血事業(yè)的健康發(fā)展；還對其的家庭造成誤會和困擾。受到屏蔽的獻(xiàn)血者可能適合再次捐獻(xiàn)血液或血液成分[5]。大量相關(guān)研究資料顯示，ELISA法單側(cè)檢測為反應(yīng)性時，結(jié)果假陽性率比較高[3-7]。

表2 單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者人口學(xué)特征統(tǒng)計表(n，%)

針對血液篩查假反應(yīng)性問題，在參考國外獻(xiàn)血者歸隊程序的前提下，以我國無償獻(xiàn)血的相關(guān)法律法規(guī)為基礎(chǔ)，建立適合我國的假反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊程序。既能確保血液安全，盡量避免病毒檢測的“窗口期”，又能使因為假反應(yīng)性淘汰的獻(xiàn)血者重新回歸到正常獻(xiàn)血隊伍。相關(guān)資料數(shù)據(jù)顯示6個月的等待期足以涵蓋HBsAg、抗-HCV、HIV這3項感染血清轉(zhuǎn)陽前的窗口期，如果6個月后隨訪沒有出現(xiàn)血清陽轉(zhuǎn)，即可確信陰性結(jié)果，排除這3項病毒感染，所以單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血員的歸隊檢測時間間隔設(shè)置為6個月。

為了解獻(xiàn)血者歸隊程序?qū)ρ喊踩瞳I(xiàn)血者的招募等帶來的影響，本研究統(tǒng)計分析了河南省血液中心2 a來獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV、HIV這3個復(fù)檢項目ELISA單側(cè)淘汰6個月后經(jīng)歸隊程序重新檢測后的情況。表1可見HBsAg、抗-HCV、HIV 3個項目歸隊差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。本研究結(jié)果顯示，有3.33%的標(biāo)本NAT有反應(yīng)性，ELISA假陽性較高，歸隊檢測ELISA和NAT全部陰性總體超過50%以上，這與國內(nèi)報道的國產(chǎn)試劑假陽性率較高一致?？?HCV歸隊率大于HBsAg，與國內(nèi)有關(guān)報道抗-HCV檢測假陽性率高于HBsAg檢測一致，但是HBsAg總數(shù)大于抗-HCV的原因有可能在于血站系統(tǒng)一律采用兩步法檢測HBsAg，方法學(xué)的改變雖然減少了漏檢率，但假陽性率卻比一步法升高。HIV歸隊檢測中4代試劑單側(cè)反應(yīng)性有71人(69.6%)，較高的原因有可能在于4代試劑增加檢測HIV P24抗原，使靈敏度提高和窗口期縮短，同時第4代的特異性低于第3代，造成更多的檢測假陽性[6]。研究分析提示在確保血液安全的前提下，在試劑選擇上，既要關(guān)注試劑的高靈敏度，也要兼并試劑的高特異性，以免出現(xiàn)過多的試劑假陽性。提高歸隊獻(xiàn)血者歸隊成功率是歸隊工作的重點之一。分析影響獻(xiàn)血者歸隊成功率的影響因素，并針對性地制定對策，對歸隊程序的持續(xù)改進(jìn)和發(fā)展具有十分重要的意義。本研究中，表2可見年齡、職業(yè)和獻(xiàn)血次數(shù)是影響獻(xiàn)血者歸隊成功率重要因素。18～30歲年齡段占所有歸隊獻(xiàn)血者的47.6%，與其他年齡段差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可能與該年齡段獻(xiàn)血者處于成年初期，有著強(qiáng)烈的社會責(zé)任感和認(rèn)同感，希望為自己塑造一個社會贊同的形象，容易接受新鮮事物，強(qiáng)調(diào)對法律和權(quán)威的服從，易于接受歸隊程序這一新生事物，會為能夠繼續(xù)獻(xiàn)血奉獻(xiàn)愛心而參加歸隊檢測。在歸隊者的職業(yè)調(diào)查中，學(xué)生占?xì)w隊的39.2%，與其他職業(yè)差異有統(tǒng)計學(xué)意義，有可能與血站在各大學(xué)院校大力開展無償獻(xiàn)血宣傳，學(xué)生參與獻(xiàn)血的積極性高、積極參與歸隊程序有關(guān)。獻(xiàn)血次數(shù)1次的獻(xiàn)血者占43.2%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，有可能與ELISA篩查試劑靈敏度高，單試劑反應(yīng)性多為假陽性有關(guān)[8]。

2 a來需要歸隊識別人數(shù)2 192人次，但是實際參加歸隊的獻(xiàn)血者只有442人次，僅占需要歸隊總?cè)藬?shù)的1/5，一方面可能在于歸隊檢測重要性的宣傳不夠，檢測結(jié)果反饋時沒有明確告知歸隊檢測的意義，造成大量獻(xiàn)血者在得知有反應(yīng)性結(jié)果后不是來血站進(jìn)行歸隊檢測，而是直接去醫(yī)院做疾病判斷檢測，從而造成獻(xiàn)血者質(zhì)疑血站檢測結(jié)果準(zhǔn)確性等；另一方面在當(dāng)今工作繁忙的狀態(tài)下，與獻(xiàn)血員為了一次歸隊檢測而往返血站或者采血點的長時間、手續(xù)繁雜等有關(guān)。建議在以后無償獻(xiàn)血咨詢環(huán)節(jié)，增加歸隊程序的宣傳和解釋工作，加大獻(xiàn)血員對歸隊檢測的重要性認(rèn)識，簡化不利于完成歸隊檢測的流程，提高歸隊完成人數(shù)比例，號召更多的單側(cè)反應(yīng)性獻(xiàn)血者，積極參加獻(xiàn)血者歸隊流程，經(jīng)過檢測證明獻(xiàn)血者符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的相關(guān)條件后，回歸到固定的無償獻(xiàn)血隊伍中。歸隊程序的建立對于無償獻(xiàn)血者和血站來說無疑是雙贏。一方面獻(xiàn)血者大批量的回歸，對于血站來說，更加充分有效地利用有限的資源，樹立積極的形象，消除負(fù)面影響，增加血站可信度，降低發(fā)生法律訴訟的風(fēng)險。另一方面對于減輕獻(xiàn)血者精神壓力，促進(jìn)家庭和社會和諧，使獻(xiàn)血者感受到血站對其服務(wù)不是獻(xiàn)血時一過性的服務(wù)，而是始終在關(guān)注他們的健康，及時、有效地對復(fù)檢淘汰的獻(xiàn)血員提供全方位的咨詢，使其得到可信、滿意的答復(fù)，從而成為無償獻(xiàn)血的積極宣傳者，逐步發(fā)展為長期固定的無償獻(xiàn)血者。

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