張紅楠，張旭輝，吳 頔*

(西南大學(xué) a園藝園林學(xué)院， b資源環(huán)境學(xué)院，重慶 北碚 400716)

生防煙管菌對(duì)植物抗病性相關(guān)酶活性及葉綠素含量的影響

張紅楠a，張旭輝b，吳 頔a*

(西南大學(xué) a園藝園林學(xué)院， b資源環(huán)境學(xué)院，重慶 北碚 400716)

探究生防煙管菌對(duì)植株抗病性相關(guān)酶活性及葉綠素含量的影響，明確煙管菌對(duì)植株抗病性的誘導(dǎo)作用，以期為植物真菌病害的生物防治提供新思路。以油菜和黃瓜為盆栽植物，分別接種油菜核盤(pán)菌和蔓枯病菌，試驗(yàn)共設(shè)4組處理：只接種病原真菌(CK病)、無(wú)菌水處理(CK水)、同時(shí)接種病原真菌和煙管菌菌液(CT1)、接種病原真菌并噴施10 mL 80 μg·mL-1多菌靈(CT2)。處理兩周后收獲植株，采用分光光度法測(cè)定植株抗病性相關(guān)酶活性(SOD、CAT和POD)以及葉綠素含量。結(jié)果表明，生防煙管菌處理病害侵染的植株后，油菜和黃瓜葉片SOD、CAT和POD活性較CK水和CK病均有所提高，其中，油菜植株中CT1的SOD活性達(dá)到64.0 U·g-1，分別是CK水、CK病和CT1的1.8、1.6和1.1倍，黃瓜植株中CT2的SOD活性則分別是CK水、CK病和CT2的1.1、1.1和1.0倍； 而油菜植株中CT1的CAT活性分別高出CK水、CK病和CT2的25.4%、11.9%和 340%，黃瓜植株中則分別為CK水、CK病和CT2的1.0、1.1和0.9倍；油菜植株中CT1 的POD活性最高，但僅為最低活性的CT2的1.1倍，而黃瓜植株中CK病的POD活性則分別是CK水、CT1和CT2的3.7、1.4和1.6倍。CT2處理的油菜葉綠素含量為3.1 mg·g-1，分別為CK病和CT2的1.2和1.1倍，但明顯低于CK水，黃瓜植株中CT1的葉綠素含量達(dá)到2.4 mg·g-1，分別為CK水、CK病和CT1的1.1、2.5和1.3倍。因此，煙管菌作為生防菌能夠誘導(dǎo)植株抗病性相關(guān)酶活性及葉綠素含量提高，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，在生物防治的應(yīng)用中具有廣闊前景。

煙管菌； 生物防治； 防御酶活性； 葉綠素含量； 誘導(dǎo)作用

由核盤(pán)菌(Sclerotiniasclerotiorum)引起的菌核病[1]和由蔓枯病菌(Didymellabryoniae)引起的蔓枯病[2]是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上兩種最普遍的真菌病害，可侵害多種植物，極大地影響作物的產(chǎn)量和品質(zhì)，給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和發(fā)展帶來(lái)了巨大障礙[3-4]。由于目前尚無(wú)理想的商品化抗病品種[5-6]，因此對(duì)這兩種植物病害的防治主要為化學(xué)農(nóng)藥防治[7-9]，但是長(zhǎng)期使用殺菌劑，很容易產(chǎn)生抗藥性，同時(shí)引起的藥物殘留和環(huán)境污染等問(wèn)題已經(jīng)不符合農(nóng)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的要求[10]。生物防治因其高效持久、環(huán)境友好和無(wú)藥物殘留等特點(diǎn)已成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外防治植物病害的研究熱點(diǎn)，并將逐漸成為植物病害防治的主流方向[11]。關(guān)于油菜菌核病和西瓜蔓枯病的生防研究層出不窮。楊蕊等[12]研究發(fā)現(xiàn)，盾殼霉(Coniothyriumminitans)Chy-1對(duì)核盤(pán)菌的抑菌率達(dá)82.5%。而夏龍蓀等[13]報(bào)道球孢白僵菌(Beauveriabassiana)對(duì)油菜核盤(pán)菌同樣具有較好的抑制效果。Martínez等[14]研究表明，哈茨木霉(Trichodermaharzianum)和棘孢木霉(Trichodermaasperellum)都能夠顯著抑制蔓枯病菌，并有田間應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)于生防機(jī)制的研究大多集中在生防菌與病原菌之間的相互作用，而忽視了寄主植物的參與，事實(shí)上一些非生物因子和生物因子都可以誘導(dǎo)植物抗病性的提高。有研究表明生防菌可以誘導(dǎo)植物抗病相關(guān)防御酶產(chǎn)生變化，進(jìn)而增強(qiáng)植物抗病能力[15-16]。超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和過(guò)氧化物酶(POD)是植物體內(nèi)三大防御酶，植物對(duì)病害及逆境的抗性均與之息息相關(guān)[17]，葉綠素則是植物進(jìn)行光合作用而獲得有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物的基礎(chǔ)，但當(dāng)病原菌侵入植物后，往往能夠?qū)е氯~綠體的解體，發(fā)病嚴(yán)重的話會(huì)使葉綠素合成受阻，出現(xiàn)葉片褪綠、黃化或花葉等癥狀。因此，葉綠素含量的高低往往能夠客觀地反映植物抗病性的強(qiáng)弱[18]。近年來(lái)，很多學(xué)者對(duì)施用生防菌后植物某些酶類(lèi)及其代謝產(chǎn)物的變化與植物抗病性關(guān)系進(jìn)行了廣泛的研究。金娜等[19]報(bào)道紅灰鏈霉菌HDZ-9-47可以提高番茄根部SOD和POD活性，進(jìn)而誘導(dǎo)植株產(chǎn)生抗病性。劉朝輝等[20]通過(guò)對(duì)茄子苗期接種哈茨木霉T23和黃萎病菌后，發(fā)現(xiàn)茄子葉片內(nèi)與抗病性相關(guān)的SOD、POD和PPO的活性均有增加，證明了哈茨木霉T23能誘導(dǎo)茄子植株體內(nèi)產(chǎn)生植保素等物質(zhì)參與抵御黃萎病。梁艷瓊等[21]以POD、SOD和CAT等5種防御酶為植物抗病性反應(yīng)指標(biāo)，闡明了生防菌TB2對(duì)甘蔗抗赤腐病的誘導(dǎo)作用。賈瑞蓮等[22]以自主分離的寡雄腐霉(Pythiumoligandrum)為生防菌株，研究其對(duì)番茄抗灰霉病的誘導(dǎo)作用，發(fā)現(xiàn)寡雄腐霉能夠增強(qiáng)番茄葉片抗病性相關(guān)的CAT和POD活性，而且提高了番茄中葉綠素含量，誘導(dǎo)植株產(chǎn)生抗病性反應(yīng)。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于利用煙管菌(Bjerkanderaadusta)進(jìn)行生物防治的研究寥寥無(wú)幾[23-24]。而本課題組在前期所分離、鑒定的煙管菌(B.adusta)已被證明對(duì)多種植物病原真菌引起的病害有較好防治效果，特別是對(duì)西瓜蔓枯病具有明顯抑制效果[25]。但是目前利用煙管菌防治真菌病害的生理變化效果未見(jiàn)報(bào)道，生防煙管菌是否能夠誘導(dǎo)植株產(chǎn)生抗病性而降低病害也尚不清楚。為此，本研究選擇植物內(nèi)SOD、CAT、POD活性和葉綠素含量作為抗病性反應(yīng)指標(biāo)，研究了生防作用下植株抗病相關(guān)生理機(jī)制的變化規(guī)律，以明確煙管菌對(duì)抗病性反應(yīng)的誘導(dǎo)機(jī)制，為合理利用該生防菌進(jìn)行生物防治奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 生防菌株

生防煙管菌(Bjerkanderaadusta)，本課題組于重慶北碚國(guó)家紫色土肥力與肥料效益監(jiān)測(cè)基地(106°24′33″E， 29°48′36″N)分離、篩選得到。

1.1.2 病原真菌

油菜核盤(pán)菌(Sclerotiniasclerotiorum)和西瓜蔓枯病菌(Didymellabryoniae)，均由西南大學(xué)植物生態(tài)病理研究所惠贈(zèng)。

1.1.3 培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基(去皮土豆200 g，葡萄糖20 g，瓊脂15～20 g，蒸餾水1 000 mL，pH自然)；PD培養(yǎng)液(去皮土豆200 g，葡萄糖20 g，蒸餾水1 000 mL，pH自然)；發(fā)酵培養(yǎng)基(麥芽糖2%，NH4Cl 1%，MgSO4·7H2O 0.1%，CaCl20.1%，KH2PO40.2%，pH值 7.4)；生長(zhǎng)培養(yǎng)基(麥芽糖2%，KNO31%，MgSO4·7H2O 0.1%，CaCl20.1%，KH2PO40.2%，瓊脂1.5%，pH 7.0)。

1.1.4 其他材料

油菜(BrassicacampestrisL.)種子品種為德雜油9號(hào)，四川綿陽(yáng)特研種業(yè)有限公司；黃瓜(CucumissativusL.)種子品種為春夏秋王，山東省寧陽(yáng)縣陽(yáng)光種子有限公司；50%多菌靈可濕粉劑，威海韓孚生化藥業(yè)有限公司；植物栽培土為西南大學(xué)二號(hào)試驗(yàn)田紫色土，將其過(guò)篩后高壓蒸汽滅菌2 h。盆栽試驗(yàn)在西南大學(xué)1號(hào)溫室進(jìn)行，溫度為28～40 ℃，相對(duì)濕度為45%～70%。

1.2 方法

1.2.1 菌株活化與培養(yǎng)

將低溫保存的煙管菌菌株轉(zhuǎn)接在生長(zhǎng)培養(yǎng)基上，菌絲面朝下使其緊密接觸培養(yǎng)基，在32 ℃恒溫培養(yǎng)箱中活化，而油菜核盤(pán)菌和西瓜蔓枯病菌轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中活化。然后用直徑5 mm的無(wú)菌打孔器打取活化的煙管菌菌餅5塊于盛有30%(V/V)發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，于30 ℃、180 r·min-1搖床培養(yǎng)7 d，得到煙管菌菌體及其代謝液；以同樣方法將油菜核盤(pán)菌菌餅及西瓜蔓枯病菌餅置于盛有300 mL無(wú)菌PD培養(yǎng)液中，與煙管菌菌株同樣條件下進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)，得到病原菌菌體及其代謝液。

1.2.2 植株育苗及溫室培養(yǎng)

將油菜種子和黃瓜種子先用10%H2O2消毒3～5 min，再用55 ℃左右的溫水浸種10 min，轉(zhuǎn)移至鋪有濕潤(rùn)紗布的無(wú)菌器皿中于30 ℃催芽，待發(fā)芽后播種在裝有121 ℃高壓滅菌栽培土的花盆(直徑19 cm×13 cm)中，然后置于25 ℃，相對(duì)濕度80%的溫室內(nèi)培養(yǎng)至長(zhǎng)出子葉。

1.2.3 煙管菌與病原真菌處理

待1.2.2節(jié)培養(yǎng)的植株緩苗20 d后，選擇長(zhǎng)勢(shì)基本一致的植株進(jìn)行試驗(yàn)處理。采用牙簽接種法[26]在油菜植株和黃瓜植株第3、4片老葉及距根20 cm處的莖部分別進(jìn)行接菌處理，試驗(yàn)設(shè)計(jì)4組處理，CK病，只接病原真菌；CK水，只接無(wú)菌水；CT1，同時(shí)接種病原真菌和煙管菌菌株；CT2，接種病原真菌并噴施10 mL 80 μg·mL-1多菌靈；每個(gè)處理組各15株。

1.2.4 植株樣品粗酶液的制備及酶活性測(cè)定

參照Chen等[15]的方法提取植物組織內(nèi)防御酶酶液。稱(chēng)取同一葉位處的葉片0.5 g，將其剪碎后于預(yù)冷的研缽中，加1 mL預(yù)冷的磷酸緩沖液在冰浴下研磨成漿，再加緩沖液使緩沖液的終體積為5 mL，轉(zhuǎn)移至10 mL離心管后于4 ℃、10 000 r·min-1下離心20 min，上清液即為超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶和過(guò)氧化物酶的粗酶液。超氧化物歧化酶(SOD)的活性測(cè)定參照Sudisha等[27]的方法，過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性測(cè)定參照楊蘭芳等[28]的方法，過(guò)氧化物酶(POD)的活性測(cè)定參照李忠光等[29]的方法。

1.2.5 植株樣品葉綠素含量測(cè)定

葉綠素提取及含量測(cè)定參照昌夢(mèng)雨等[30]的方法。稱(chēng)取剪碎的新鮮樣品0.2 g于干凈研缽中，加入少量石英砂及3 mL 95%乙醇，研磨成漿，再加乙醇10 mL，繼續(xù)研磨至組織變白，靜置3～5 min。將研缽中的提取液過(guò)濾至25 mL棕色容量瓶中，最后用乙醇定容，搖勻。以95%乙醇為空白，在波長(zhǎng)665 nm、649 nm下測(cè)定吸光值，計(jì)算不同樣品葉綠素含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

所有的數(shù)據(jù)采用Excel 2007進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，試驗(yàn)均設(shè)3次重復(fù)。利用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行結(jié)果分析，Duncan’s多重比較進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)(P<0.05)；圖表采用Excel 2007繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)植物SOD活性的影響

由圖1可見(jiàn)，各處理的油菜SOD活性依次增加，但增幅不大，CT2的SOD活性最高，達(dá)到64.0 U·g-1，分別是CK水、CK病和CT1的1.8、1.6和1.1倍，表明油菜受到病害侵染后植株的SOD活性增加，而施用煙管菌和多菌靈進(jìn)行處理又進(jìn)一步增強(qiáng)了SOD活性，從而增強(qiáng)植物的抗病能力。黃瓜SOD活性整體高于油菜植株，其中CT1的SOD活性最高，達(dá)到219 U·g-1，是最低處理CK病的1.1倍，但各處理之間均未達(dá)到顯著差異(P>0.05)。

同一植株不同處理間沒(méi)有相同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。同圖2、圖3、圖4圖1 不同處理對(duì)植物SOD活性的影響

2.2 對(duì)植物CAT活性的影響

如圖2所示，CT1的油菜CAT活性最高，達(dá)到21.5 U·g-1·min-1，分別為CK水、CK病、CT2的1.3、1.1和4.4倍，僅與CT2之間差異達(dá)到顯著水平(P<0.05)。黃瓜中，CT2的CAT活性最高，達(dá)到20.4 U·g-1·min-1，CT1次之，為18.3 U·g-1·min-1，其CAT活性分別為CK水和CK病的1.0和1.1倍，各處理間均無(wú)顯著差異。

圖2 不同處理對(duì)植物CAT活性的影響

2.3 對(duì)植物POD活性的影響

如圖3所示，油菜中，各處理間POD活性基本相等，均在1 000 U·g-1·min-1左右，而黃瓜中，各處理的POD活性相差比較明顯。具體來(lái)看，油菜中，CT1的POD活性最高，達(dá)到1 097 U·g-1·min-1，高出CT2 8.3%，CK水和CK病的POD活性介于CT1和CT2之間，各處理間并未達(dá)到顯著差異水平。黃瓜中，CK病的POD活性最高，達(dá)到1 876 U·g-1·min-1，分別是CK水、CT1和CT2的3.7、1.4和1.6倍，均已達(dá)到顯著差異水平，CT1的POD活性達(dá)到1 359 U·g-1·min-1，是CT2的1.2倍，差異達(dá)到顯著水平。

圖3 不同處理對(duì)植物POD活性的影響

2.4 對(duì)植物葉綠素含量的影響

圖4顯示，油菜植物中，CK水的葉綠素含量最高，達(dá)到3.5 mg·g-1，高出最低葉綠素含量(CK病)的40%，2個(gè)處理間存在顯著差異，CT1處理的葉綠素含量為3.1 mg·g-1，略高于CT2，表現(xiàn)出CK水>CT1>CT2>CK病。黃瓜中，葉綠素含量整體低于油菜，其中CT2的葉綠素含量最高，達(dá)到2.4 mg·g-1，分別為CK水、CK病和CT1的1.1、2.5和1.3倍，分別達(dá)到顯著差異水平。

圖4 不同處理對(duì)植物葉綠素含量的影響

3 小結(jié)與討論

本研究通過(guò)溫室盆栽試驗(yàn)探究了煙管菌對(duì)油菜菌核病及西瓜蔓枯病的生防作用，其處理后的油菜和黃瓜植株的抗病性相關(guān)酶活性均有不同程度地提高，葉綠素含量也均有增加，揭示了盆栽接種生防煙管菌對(duì)增強(qiáng)植株抗病性具有良好的促進(jìn)作用，說(shuō)明該菌株在生物防治中具有開(kāi)發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值。

[1] BOLTON M D，THOMMA B H，NELSON B D.Sclerotiniasclerotiorum，(Lib.) de Bary：biology and molecular traits of a cosmopolitan pathogen [J]. Molecular Plant Pathology，2006，7(1)：1-16.

[2] KEINATH A P. Baseline sensitivity ofDidymellabryoniaeto cyprodinil and fludioxonil and field efficacy of these fungicides against isolates resistant to pyraclostrobin and boscalid [J]. Plant Disease，2015，99(6)：815-822.

[3] 李慧，文李，劉凱，等. 油菜抗菌核病機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 作物研究，2015，29(1)：84-90.

[4] NJOROGE S M，KABIR Z，MARTIN F N，et al. Comparison of crop rotation forVerticilliumwiltmanagement and effect onPythiumspecies in conventional and organic strawberry production [J]. Plant Disease，2009，93(5)：519-527.

[5] MEI J，QIAN L，DISI J O，et al. Identification of resistant sources againstSclerotiniasclerotioruminBrassicaspecies with emphasis onB.oleracea[J]. Euphytica，2011，177(3)：393-399.

[6] Lou L N，Wang H Y，Qian C T，et al. Genetic mapping of gummy stem blight (Didymellabryoniae) resistance genes inCucumissativus-hystrix introgression lines [J]. Euphytica，2013，192(3)：359-369.

[7] WANG Y，HOU Y P，CHEN C J，et al. Detection of resistance inSclerotiniasclerotiorum，to carbendazim and dimethachlon in Jiangsu Province of China [J]. Australasian Plant Pathology，2014，43(3)：307-312.

[8] FIORI A C，SCHWAN-ESTRADA K R，VIDA J B，et al. Antifungal activity of leaf extracts and essential oils of some medicinal plants againstDidymellabryoniae[J]. Journal of Phytopathology，2000，148：483-487.

[9] 李雨，王少秋，譚蕊，等. 西瓜蔓枯病有效藥劑篩選及藥效評(píng)價(jià)[J]. 農(nóng)藥，2016，55(6)：460-462.

[10] HEYDARI A，MISAGHIA I J. The role of rhizosphere bacteria in herbicide-mediated increase inRhizoctoniasolani-inducedcotton seedling damping-off [J]. Plant and Soil，2003，257(2)：391-396.

[11] MANCINI V，ROMANAZZI G. Seed treatments to control seedborne fungal pathogens of vegetable crops [J]. Pest Management Science，2014，70(6)：860-868.

[12] 楊蕊，韓永超，楊龍，等. 盾殼霉菌株Chy-1抗真菌物質(zhì)的基本特性研究[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2014，30(4)：520-527.

[13] 夏龍蓀，林華峰. 白僵菌對(duì)幾種常見(jiàn)植物病原菌的拮抗作用研究[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2013，29(2)：324-330.

[14] MARTINEZ B，PEREZ J，INFANTE D，et al. Antagonism ofTrichodermaspp. isolates againstDidymellabryoniae(Fuckel) Rehm[J]. Artículo Original，2013，28(3)：192-198.

[15] CHEN F，WANG M，ZHENG Y，et al. Quantitative changes of plant defense enzymes and phytohormone in biocontrol ofcucumberfusariumwiltbyBacillussubtilisB579 [J].World Journal of Microbiology and Biotechnology，2010，26(4)：675-684.

[16] 閆艷華，王海寬，肖瑞峰，等. 一株乳酸菌對(duì)番茄灰霉病的防效及對(duì)幾種防御酶活性的影響[J]. 微生物學(xué)通報(bào)，2011，38(12)：1801-1806.

[17] 周登博，井濤，譚昕，等. 6種基質(zhì)拮抗菌發(fā)酵液對(duì)香蕉枯萎病及相關(guān)防御酶的影響[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2013，34(5)：947-951.

[18] 王春明，郭建國(guó)，漆永紅，等. 葡萄葉片葉綠素質(zhì)量分?jǐn)?shù)與其霜霉病抗性的關(guān)系[J]. 西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25(3)：458-464.

[19] 金娜，盧修亮，文洋，等. 紅灰鏈霉菌HDZ-9-47對(duì)番茄生長(zhǎng)及其防御酶的影響[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，2016，46(6)：833-840.

[20] 劉朝輝，曾華蘭，何煉，等. 哈茨木霉T23對(duì)茄子葉片內(nèi)防御酶系的影響[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2014，27(5)：1945-1948.

[21] 梁艷瓊，唐文，吳偉懷，等. 生防菌TB2對(duì)甘蔗葉片抗病相關(guān)酶活的誘導(dǎo)作用[J]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，31(6)：620-625.

[22] 賈瑞蓮，耿明明，袁玲. 寡雄腐霉發(fā)酵液對(duì)溫室番茄生長(zhǎng)及灰霉病的防治作用[J]. 植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2015，42(5)：827-833.

[23] BAR W C，LEE B H，PARK Y A，et al. Characteristics of bed-log of shiitake damaged byBjerkanderaadustaand antagonism between these two fungi [J]. The Korean Journal of Mycology，2011，39(1)：44-47.

[24] 汪華，喻大昭，郭堅(jiān). 一株多孔煙管菌菌株高氏15號(hào)的鑒定及抑菌活性研究[C]∥病蟲(chóng)害綠色防控與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全—中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì)2015年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集. 長(zhǎng)春，2015.

[25] 張旭輝，張紅楠，李勇，等. 抑制西瓜蔓枯病菌的生防真菌篩選、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 中國(guó)生物工程雜志，2017，37(5)：76-86.

[26] 王新艷. 大麗輪枝菌致病相關(guān)突變體的篩選及致病基因VdCYP1功能初步研究[D]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2015.

[27] SUDISHA J，NIRANJANA S R，UMESHA S，et al. Transmission of seed-borne infection of muskmelon byDidymellabryoniaeand effect of seed treatments on disease incidence and fruit yield [J]. Biological Control，2006，37(2)：196-205.

[28] 楊蘭芳，龐靜，彭小蘭，等. 紫外分光光度法測(cè)定植物過(guò)氧化氫酶活性[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009(20)：364-366.

[29] 李忠光，龔明. 植物生理學(xué)綜合性和設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)教程[M]. 武漢：華中科技大學(xué)出版社，2014.

[30] 昌夢(mèng)雨，魏曉楠，王秋悅，等. 植物葉綠素含量不同提取方法的比較研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2016，32(27)：177-180.

[31] 谷醫(yī)林，王遠(yuǎn)宏，常若葵，等. 解淀粉芽孢桿菌LJ1誘導(dǎo)黃瓜抗白粉病的研究[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15(3)：293-298.

[32] 張雨竹，董雪梅，郭春蘭，等. 桃色頂孢霉發(fā)酵液對(duì)大豆的促生及對(duì)抗氧化酶活性的影響[J]. 中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2014，36(4)：519-523.

[33] 劉淑宇，于新，陳發(fā)河，等. 綠色木霉菌發(fā)酵液對(duì)杧果炭疽菌胞內(nèi)抗性酶活性的影響[J]. 果樹(shù)學(xué)報(bào)，2013，30(2)：285-290.

[34] 薛春生，何瑞玒，肖淑芹，等. 哈茨木霉菌(Trichodermaharzianum)TR409誘導(dǎo)辣椒防御酶活性變化及防治疫病效果[J]. 沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，47(4)：479-483.

[35] 唐佳頻，邵宗澤，張智濤，等. 南極土壤來(lái)源的惡臭假單胞菌1A00316抗南方根結(jié)線蟲(chóng)的機(jī)制[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2014，20(6)：1046-1051.

[36] 朱麗梅，羅鳳霞. 百合葉片中可溶性蛋白、葉綠素、可溶性糖含量與灰霉病抗性的關(guān)系[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39(5)：134-136.

[37] 單麗萍，王昌祿，李貞景，等. 鏈霉菌TD-1對(duì)番茄灰霉病菌的抑制及防御酶活性的影響[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2015，30(2)：100-103.

[38] 趙建，黃建國(guó)，袁玲，等. 寡雄腐霉發(fā)酵液對(duì)番茄生長(zhǎng)的影響及對(duì)灰霉病的防治作用[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)，2014，34(23)：7093-7100.

[39] STADLER M，STEMER O. Production of bioactive secondary metabolites in the fruit bodies of macro fungi as a response to injury [J]. Phytochemistry，1998，49(4)：1013-1019.

2017-07-18

科技部農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金(2013GB2F100396)；中國(guó)博士后科學(xué)基金(2016M592621)；西南大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)資金項(xiàng)目(XDJK2016C185)

張紅楠(1992—)，女，河南安陽(yáng)人，碩士在讀，研究方向?yàn)橹参锊±砼c病害防治，E-mail：hongnanzhang@163.com。

吳 頔，重慶人，博士后在讀，E-mail：wudisuper610@126.com。

文獻(xiàn)著錄格式：張紅楠，張旭輝，吳頔. 生防煙管菌對(duì)植物抗病性相關(guān)酶活性及葉綠素含量的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(12)：2226-2230，2234.

10.16178/j.issn.0528-9017.20171245

S436

A

0528-9017(2017)12-2226-05

張瑞麟)