錢婉霞

摘 要：本文用高效液相法對(duì)羅紅霉素膠囊中的羅紅霉素的進(jìn)行了含量測(cè)定。固定相為：依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動(dòng)相，漂移管溫度為80攝氏度；載氣流速為1.5ml/min；羅紅霉素在20～400μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。羅紅霉素的平均回收率為99.1%。本法簡便、重現(xiàn)性好、回收率高，可用于羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：羅紅霉素膠囊；羅紅霉素；測(cè)定

羅紅霉素是新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要作用于革蘭氏陽性菌、厭氧菌、衣原體和支原體等。羅紅霉素體外抗菌作用與紅霉素相類似，體內(nèi)抗菌作用比紅霉素強(qiáng)1-4倍。羅紅霉素對(duì)肺炎衣原體、肺炎支原體、溶脲脲原體的抗微生物作用與紅霉素相仿或略強(qiáng)。羅紅霉素適用于沙眼衣原體引起的尿道炎和宮頸炎；化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎，敏感菌所致的鼻竇炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作，肺炎支原體或肺炎衣原體所致的肺炎；敏感細(xì)菌引起的皮膚軟組織感染。本文用高效液相法對(duì)羅紅霉素膠囊中的羅紅霉素的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：10L-50L大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京賽美思儀器設(shè)備有限公司）；ZAM3000ELSD蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（北京溫分分析儀器技術(shù)開發(fā)公司）；JΜLABO TW系列通用水浴槽（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）；HN-6AL功率可調(diào)超聲波清洗（上海汗諾儀器有限公司）；XSYF-D 實(shí)驗(yàn)室廢水處理設(shè)備（北京湘順源科技有限公司）；PH-660高精度實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海禾工科學(xué)儀器有限公司）；BT賽多利斯電子天平（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥：乙腈（杭州匯普化工儀器有限公司）、甲醇（杭州匯普化工儀器有限公司）、冰乙酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、三乙胺（杭州匯普化工儀器有限公司）、乙酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）、磷酸（天津市順隆達(dá)科技有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。色譜柱為依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u）；以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動(dòng)相，漂移管溫度為80攝氏度；載氣流速為1.5ml/min。理論板數(shù)按羅紅霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取羅紅霉素膠囊內(nèi)容物適量，精密稱定至容量瓶內(nèi)，加適量流動(dòng)相超聲20分鐘，放涼，用流動(dòng)相定容，過0.45μm的濾膜，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取羅紅霉素對(duì)照品約5mg，置10毫升棕色容量瓶中，用流動(dòng)相超聲波振蕩溶解并用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含羅紅霉素50μg）。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為20μg·mL-1、40μg·mL-1、80μg·mL-1、160μg·mL-1、240μg·mL-1、320μg·mL-1、400μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值的對(duì)數(shù)A（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，羅紅霉素對(duì)照品在20～400μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取羅紅霉素對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.69%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批羅紅霉素膠囊樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.73%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，0.5小時(shí)，1.0小時(shí)，1.5小時(shí)，2.0小時(shí)，4.0小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品羅紅霉素峰面積積分值的RSD為0.82%。結(jié)果表明羅紅霉素在4.0小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 陰性干擾試驗(yàn)

按處方除羅紅霉素的原輔料，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用以上選定的測(cè)定條件進(jìn)行吸收曲線繪制，觀察在與羅紅霉素相同的保留時(shí)間處是否存在吸收峰，結(jié)果：在選定條件下測(cè)得的陰性液吸收曲線在與羅紅霉素相同保留時(shí)間處不存在吸收峰，表明選定的條件測(cè)定羅紅霉素?zé)o干擾，具有較強(qiáng)的專屬性。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的羅紅霉素對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.1%，RSD為0.86%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定羅紅霉素膠囊三批樣品中羅紅霉素的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為標(biāo)示量的100.5%、99.3%、100.6%。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1），0.2mol/L的乙酸-甲醇（80：20），水-甲醇-磷酸（10：90：0.01），甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（600：400：0.2：0.1），水-甲醇-乙腈-冰醋酸（10：60：30：0.1），甲醇-水-三乙胺（70∶30：0.2）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（700：300：0.2：0.1）為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)方法是一種簡便、準(zhǔn)確、安全的測(cè)定羅紅霉素膠囊含量的方法。羅紅霉素膠囊中羅紅霉素的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95-105%。

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