胡冬梅+朱麗佳

摘 要：本文對(duì)不同炮制工藝對(duì)何首烏中成分含量的影響進(jìn)行研究。固定相為：依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u），乙腈-甲醇-水（10：2：88）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm；2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在5～95μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。本法簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好、回收率高，可用于不同何首烏炮制品中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：何首烏；炮制；測(cè)定

何首烏為蓼科多年生纏繞藤本植物，又名野苗、桃柳藤、赤葛、九真藤、馬肝石、九真藤芮草、蛇草、陳知白、、瘡帚等。生首烏能解毒，消癰，潤(rùn)腸通便。制首烏功能補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨?！兜崮媳静荨酚涊d：“澀精，堅(jiān)腎氣，止赤白便濁，縮小便，入血分，消痰毒。治赤白癜風(fēng)，瘡疥頑癬，皮膚瘙庠。截瘧，治痰瘧?！焙问诪踅?jīng)炮制可減毒，炮制方法、時(shí)間對(duì)何首烏成分及肝毒性均有影響[1-5]。本文對(duì)不同炮制工藝對(duì)何首烏中成分含量的影響進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：PURIST超純水系統(tǒng)（上海瑞楓生物科技有限公司）；TGF-9075A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海喆圖科學(xué)儀器有限公司）；HX-06超聲波清洗器（武漢恒信世紀(jì)科技有限公司）；德國(guó)美諾PG8583CD實(shí)驗(yàn)室清洗消毒機(jī)（科德恩（北京）科技發(fā)展有限公司）；LC2000液相色譜（天美（中國(guó)）科學(xué)儀器有限公司）；普利賽斯EP125SM電子天平（上海天美天平儀器有限公司）；PURELAB flex 系列純水機(jī)（威立雅水處理技術(shù)（上海）有限公司）。

1.2 試藥：乙腈（北京邁瑞達(dá)科技有限公司）、磷酸（天津譜祥科技有限公司）、三乙胺（淄博市臨淄冰清精細(xì)化工廠）、甲醇（天津譜祥科技有限公司）、磷酸氫二銨（北京邁瑞達(dá)科技有限公司）、冰乙酸（北京邁瑞達(dá)科技有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[1-5]。色譜柱為依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u）；乙腈-甲醇-水（10：2：88）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為322nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 炮制品的制備

2.2.1 黑豆黃酒制。取何首烏倒入盆內(nèi)，用黑豆汁與黃酒拌勻，置罐內(nèi)或適宜容器內(nèi)，密閉，坐水鍋中，隔水燉至汁液吸盡，取出，曬干即得。黑豆汁的制法 取黑豆10kg，加水煮約4小時(shí)，熬汁約15kg，豆渣冉加水煮約3小時(shí)，熬汁約10kg，兩次共熬汁約25kg。

2.2.2 蒸制。取何首烏，洗凈，煮沸4-6小時(shí)，至中心至粘性，曬半干，切去莖基及尾梢，反復(fù)曬至發(fā)硬，再浸4小時(shí)后，加水蓋過(guò)藥面，煮沸8小時(shí)，燜1夜，曬半干，再蒸8小時(shí)，燜15小時(shí)。再如前法操作1次，趁熱切9-12mm方塊，曬干。

2.2.3 酒制。取何首烏片或塊，用黃酒拌勻，潤(rùn)4-6小時(shí)，放籠屜內(nèi)蒸6小時(shí)，取出稍晾，再加入鍋內(nèi)汁水，候汁吸盡，撈起再蒸，以蒸黑為度，取出曬干或烘干。

2.2.4 黑豆制。取何首烏片或塊，用黑豆汁拌勻，置非鐵質(zhì)的適宜容器內(nèi)，密閉，隔水加熱或用蒸汽加熱燉至汁液吸盡或取何首烏片或塊。黑豆汁制法：取黑豆10kg，加水適量，約煮4小時(shí)，熬汁約15kg，豆渣再加水煮約3小時(shí)，敖汁約10kg，合并得黑豆汁約25kg。

2.3 供試品溶液的制備

取何首烏適量，粉碎成粗粉，精密稱(chēng)定至容量瓶?jī)?nèi)，加適量流動(dòng)相超聲20分鐘，放涼，用流動(dòng)相定容，過(guò)0.45μm的濾膜，即得。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品約10mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流動(dòng)相超聲波振蕩溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷20μg）。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為5μg·mL-1、15μg·mL-1、25μg·mL-1、35μg·mL-1、45μg·mL-1、55μg·mL-1、65μg·mL-1、75μg·mL-1、85μg·mL-1、95μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品在5～95μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.55%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱(chēng)取同批何首烏樣品6份，分別制備成供試品，按色譜條件測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.53%，結(jié)果表明，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，1，2，3，4h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積積分值的RSD為0.52%。結(jié)果表明2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定何首烏三批樣品中2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，結(jié)果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量生片>黑豆制>黑豆黃酒制>蒸制>酒制。

3 討論

分別考察乙腈-甲醇-水（10：2：88），乙腈-甲醇-水（20：2：78），乙腈-0.033mol/L磷酸二氫鉀（含0.5%三乙胺，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）（30：70），乙腈-甲醇-水（15：15∶70），0.05mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH到3.0）-乙腈（20∶80），乙腈-甲醇-1%醋酸鈉-冰醋酸（18：12：70∶0.1）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（10：2：88）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（10：2：88）為流動(dòng)相。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量生片>黑豆制>黑豆黃酒制>蒸制>酒制。

參考文獻(xiàn)

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