付長(zhǎng)華,郞明洋
(花園藥業(yè)股份有限公司,浙江 金華 322121)
羅紅霉素氨溴索膠囊是由鹽酸氨溴索與羅紅霉素兩種成分組成的復(fù)方制劑。氨溴索可增強(qiáng)羅紅霉素的抗菌活性。另外,氨溴索具有對(duì)肺部多重保護(hù)作用的專屬特點(diǎn),對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的喘、咳、痰、炎四癥均具有一定的治療和緩解作用。羅紅霉素和鹽酸氨溴索的單方制劑目前在臨床上應(yīng)用廣泛,并常常聯(lián)合用藥。羅紅霉素氨溴索膠囊主要用于治療由羅紅霉素敏感微生物引起的細(xì)菌性急性支氣管炎、慢性支氣管炎的急性加重、支氣管肺炎、典型性病原體肺炎、合并細(xì)菌感染的支氣管哮喘或支氣管擴(kuò)張等。臨床上,羅紅霉素氨溴索分散片用于治療急性下呼吸道細(xì)菌性感染,祛痰療效的臨床控制率及咳痰相關(guān)癥狀的消失時(shí)間方面優(yōu)于羅紅霉素膠囊[1]。羅紅霉素聯(lián)合氨溴索可顯著改善支氣管擴(kuò)張癥患者的咳痰、肺功能及呼吸困難等癥狀,臨床效果顯著[2]。
通過(guò)對(duì)不同色譜條件的考察,建立了同時(shí)測(cè)定羅紅霉素氨溴索膠囊中羅紅霉素和鹽酸氨溴索兩種藥物含量的HPLC檢測(cè)方法。
日本島津高效液相色譜儀(LC-10ATVP),檢測(cè)器(SPD-10AVP),浙江大學(xué)色譜工作站(N2000)。乙腈為色譜純,醋酸銨、枸櫞酸、三乙胺均為分析純,檢測(cè)用水為超純水。羅紅霉素氨溴索膠囊樣品及空白輔料提供單位:花園藥業(yè)股份有限公司,批號(hào):20170301、201700302、20170303;規(guī)格:每粒含羅紅霉素0.15 g,氨溴索0.03 g。
用C18柱,以乙腈-0.64%醋酸銨(含1.05%枸櫞酸,用三乙胺調(diào)pH值為6.7)-甲醇(38:35:27)為流動(dòng)相;流速為1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。理論板數(shù)>3000,分離度>1.5。
2.2.1 供試品溶液的制備
取樣品研碎,混勻,精密稱取藥粉適量(約相當(dāng)于羅紅霉素0.225 g,鹽酸氨溴索0.045 g),放入50 mL量瓶中,溶解稀釋至刻度,作為供試品溶液。
2.2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取鹽酸氨溴索和羅紅霉素對(duì)照品適量,同上法制成每1 mL中約含鹽酸氨溴索0.9 mg和羅紅霉素4.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。
精密稱取鹽酸氨溴索和羅紅霉素對(duì)照品適量,制成每1 mL中約含鹽酸氨溴索0.020 mg、羅紅霉素0.4 mg的溶液,得溶液1、溶液2;再取上述兩溶液少量,同體積混合得溶液3。將3種溶液在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別進(jìn)行掃描,結(jié)果為羅紅霉素在末端有最大吸收;鹽酸氨溴索在305 nm、247 nm、224 nm及211 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收,經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn),在211 nm及224 nm處,基線不平,在230 nm處羅紅霉素和鹽酸氨溴索均有較大吸收,且基線較平,因此選擇230 nm作為有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。
在上述色譜條件下,經(jīng)HPLC法測(cè)定鹽酸氨溴索、羅紅霉素和樣品中其他組分的色譜峰可分離,分離度大于1.5,理論板數(shù)均在3000以上。
2018年9月25日,習(xí)近平總書(shū)記親臨黑龍江墾區(qū)考察,并對(duì)農(nóng)墾定位、發(fā)展戰(zhàn)略、深化改革、糧食生產(chǎn)、綠色發(fā)展、農(nóng)業(yè)科技等工作作出了一系列重要指示,為推進(jìn)農(nóng)墾改革發(fā)展指明了方向。墾區(qū)廣大干部群眾備受鼓舞,更加堅(jiān)定了推進(jìn)農(nóng)墾改革發(fā)展的信心和決心。集團(tuán)(總局)黨委把學(xué)習(xí)宣傳貫徹習(xí)近平總書(shū)記在墾區(qū)考察時(shí)的重要講話精神作為首要政治任務(wù),以把握精神實(shí)質(zhì)、核心要義、統(tǒng)一思想行動(dòng)為根本,以推動(dòng)農(nóng)墾改革發(fā)展為目標(biāo),注重以上率下,注重全面系統(tǒng),注重知行合一,在“高”“廣”“深”“實(shí)”上發(fā)力,高標(biāo)準(zhǔn)高質(zhì)量地做好習(xí)近平總書(shū)記重要講話精神的學(xué)習(xí)宣傳貫徹工作,收到了良好的效果。
圖1 羅紅霉素和鹽酸氨溴索對(duì)照品及樣品的高效液相色譜圖
精密稱取297.4 mg羅紅霉素對(duì)照品和56.3 mg鹽酸氨溴索對(duì)照品,置于25 mL容量瓶中稀釋,分別量取 1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL,放入10 mL容量瓶稀釋,取20μL進(jìn)針記錄圖譜,以A與C作曲線。
表1 羅紅霉素不同濃度及其峰面積
羅紅霉素線性回歸方程式:A=169729.3884C+11071.8758,R=0.9995。 結(jié)論:羅紅霉素在1.125~6.752 mg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。
表2 鹽酸氨溴索不同濃度及其峰面積
鹽酸氨溴索線性回歸方程式:A=9039841.9729C+202009.9996,R=0.9996。 結(jié)論:鹽酸氨溴索在0.225~1.351 mg/mL范圍內(nèi),線性關(guān)系良好。
按羅紅霉素氨溴索膠囊處方組成,取空白輔料,按制備工藝要求制成缺味樣品。然后,按2.2.1法制成陰性對(duì)照溶液,取該溶液與供試品溶液各20μL分別進(jìn)針記錄圖譜,進(jìn)行比較。
結(jié)果表明:陰性對(duì)照溶液的色譜圖與羅紅霉素和鹽酸氨溴索對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上沒(méi)有出現(xiàn)峰,說(shuō)明空白輔料對(duì)該試驗(yàn)沒(méi)有干擾。
精密吸取供試品溶液(20170301),重復(fù)進(jìn)樣6次,每次20μL,分別測(cè)定羅紅霉素和鹽酸氨溴索峰面積,計(jì)算其RSD分別為0.84%和0.94%。見(jiàn)表3。
圖2 陰性對(duì)照溶液的高效液相色譜圖
表3 含量測(cè)定精密度試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明:本品測(cè)定方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果良好。
按含量測(cè)定方法,對(duì)同一批樣品(20170301)分別制備6份供試品溶液,精密吸取各供試品溶液20μL,進(jìn)行進(jìn)針檢測(cè),記錄羅紅霉素和鹽酸氨溴索色譜圖與峰面積,羅紅霉素平均含量為99.75%,其RSD為0.66%;鹽酸氨溴索平均含量為100.14%,其RSD為0.99%。見(jiàn)表4。
結(jié)果表明:本方法重現(xiàn)性好。
取供試品溶液(20170301)置于室溫下,于0 h、2 h、6 h、12 h、24 h 分別進(jìn)樣 20 μL 進(jìn)行檢測(cè),分別記錄羅紅霉素和鹽酸氨溴索色譜圖與峰面積,計(jì)算其RSD分別為0.90%和0.74%。見(jiàn)表5。
表4 含量測(cè)定重復(fù)性結(jié)果
表5 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果表明:供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
精密稱取羅紅霉素對(duì)照品約90 mg、112.5 mg、135 mg及鹽酸氨溴索對(duì)照品約18 mg、22.5 mg、27 mg各三份,分別置于25 mL量瓶中,分別加入處方量的混合空白輔料,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻,過(guò)濾,精密量取20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密稱取鹽酸氨溴索與羅紅霉素對(duì)照品適量,同法檢測(cè),記錄色譜圖,計(jì)算即得結(jié)果,考察本方法的加樣回收率情況。測(cè)定結(jié)果如表6所示。
表6 含量測(cè)定方法的回收率測(cè)定結(jié)果
結(jié)果表明:本品的加樣回收率良好。
取本品20粒,研細(xì),精密稱取藥粉適量(羅紅霉素約0.225 g,鹽酸氨溴索約0.045 g),按2.2.1法制成供試品溶液;另精密稱取2種對(duì)照品適量,按2.2.2法制成對(duì)照品溶液;分別取20μL進(jìn)針,計(jì)算即得結(jié)果。3批羅紅霉素氨溴索膠囊樣品的羅紅霉素和鹽酸氨溴索含量測(cè)定結(jié)果如表7所示。
表7 樣品羅紅霉素和鹽酸氨溴索含量測(cè)定結(jié)果
參照文獻(xiàn)[3],以乙腈-0.067 mol/L磷酸二氫銨(以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.5)(35∶65)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm,試驗(yàn)結(jié)果表明:在該條件下羅紅霉素和鹽酸氨溴索的保留時(shí)間相差較大,且羅紅霉素的分離度較差;參照文獻(xiàn)[4],以乙腈-0.64%醋酸銨(含1.05%枸櫞酸,用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.8)-甲醇(48 ∶25 ∶28)為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm,試驗(yàn)結(jié)果表明:在該條件下,羅紅霉素和鹽酸氨溴索的保留時(shí)間較理想,分離度與理論塔板數(shù)均較好,但鹽酸氨溴索有肩峰;調(diào)整乙腈-0.64%醋酸銨(含1.05%枸櫞酸,以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.8)-甲醇三者比例為38∶35∶27后,羅紅霉素和鹽酸氨溴索兩峰峰形良好,保留時(shí)間理想,分離度與理論塔板數(shù)均較好,因此確定本品有關(guān)物質(zhì)檢查流動(dòng)相為:乙腈-0.64%醋酸銨(含1.05%枸櫞酸,以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.7)-甲醇(38∶35∶27)。本研究采用HPLC法同時(shí)測(cè)定羅紅霉素氨溴索膠囊中羅紅霉素和鹽酸氨溴索的含量,在規(guī)定的色譜條件下,可用于羅紅霉素氨溴索膠囊的質(zhì)量控制。