付長(zhǎng)華，郞明洋

（花園藥業(yè)股份有限公司，浙江 金華 322121）

羅紅霉素氨溴索膠囊是由鹽酸氨溴索與羅紅霉素兩種成分組成的復(fù)方制劑。氨溴索可增強(qiáng)羅紅霉素的抗菌活性。另外，氨溴索具有對(duì)肺部多重保護(hù)作用的專屬特點(diǎn)，對(duì)呼吸系統(tǒng)疾病的喘、咳、痰、炎四癥均具有一定的治療和緩解作用。羅紅霉素和鹽酸氨溴索的單方制劑目前在臨床上應(yīng)用廣泛，并常常聯(lián)合用藥。羅紅霉素氨溴索膠囊主要用于治療由羅紅霉素敏感微生物引起的細(xì)菌性急性支氣管炎、慢性支氣管炎的急性加重、支氣管肺炎、典型性病原體肺炎、合并細(xì)菌感染的支氣管哮喘或支氣管擴(kuò)張等。臨床上，羅紅霉素氨溴索分散片用于治療急性下呼吸道細(xì)菌性感染，祛痰療效的臨床控制率及咳痰相關(guān)癥狀的消失時(shí)間方面優(yōu)于羅紅霉素膠囊[1]。羅紅霉素聯(lián)合氨溴索可顯著改善支氣管擴(kuò)張癥患者的咳痰、肺功能及呼吸困難等癥狀，臨床效果顯著[2]。

通過(guò)對(duì)不同色譜條件的考察，建立了同時(shí)測(cè)定羅紅霉素氨溴索膠囊中羅紅霉素和鹽酸氨溴索兩種藥物含量的HPLC檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀（LC-10ATVP），檢測(cè)器（SPD-10AVP），浙江大學(xué)色譜工作站（N2000）。乙腈為色譜純，醋酸銨、枸櫞酸、三乙胺均為分析純，檢測(cè)用水為超純水。羅紅霉素氨溴索膠囊樣品及空白輔料提供單位：花園藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20170301、201700302、20170303；規(guī)格：每粒含羅紅霉素0.15 g，氨溴索0.03 g。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

用C18柱，以乙腈-0.64%醋酸銨（含1.05%枸櫞酸，用三乙胺調(diào)pH值為6.7）-甲醇（38：35：27）為流動(dòng)相；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。理論板數(shù)＞3000，分離度＞1.5。

2.2 溶液制備

2.2.1 供試品溶液的制備

取樣品研碎，混勻，精密稱取藥粉適量（約相當(dāng)于羅紅霉素0.225 g，鹽酸氨溴索0.045 g），放入50 mL量瓶中，溶解稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸氨溴索和羅紅霉素對(duì)照品適量，同上法制成每1 mL中約含鹽酸氨溴索0.9 mg和羅紅霉素4.5 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

精密稱取鹽酸氨溴索和羅紅霉素對(duì)照品適量，制成每1 mL中約含鹽酸氨溴索0.020 mg、羅紅霉素0.4 mg的溶液，得溶液1、溶液2；再取上述兩溶液少量，同體積混合得溶液3。將3種溶液在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)分別進(jìn)行掃描，結(jié)果為羅紅霉素在末端有最大吸收；鹽酸氨溴索在305 nm、247 nm、224 nm及211 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，在211 nm及224 nm處，基線不平，在230 nm處羅紅霉素和鹽酸氨溴索均有較大吸收，且基線較平，因此選擇230 nm作為有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，經(jīng)HPLC法測(cè)定鹽酸氨溴索、羅紅霉素和樣品中其他組分的色譜峰可分離，分離度大于1.5，理論板數(shù)均在3000以上。

2018年9月25日，習(xí)近平總書(shū)記親臨黑龍江墾區(qū)考察，并對(duì)農(nóng)墾定位、發(fā)展戰(zhàn)略、深化改革、糧食生產(chǎn)、綠色發(fā)展、農(nóng)業(yè)科技等工作作出了一系列重要指示，為推進(jìn)農(nóng)墾改革發(fā)展指明了方向。墾區(qū)廣大干部群眾備受鼓舞，更加堅(jiān)定了推進(jìn)農(nóng)墾改革發(fā)展的信心和決心。集團(tuán)（總局）黨委把學(xué)習(xí)宣傳貫徹習(xí)近平總書(shū)記在墾區(qū)考察時(shí)的重要講話精神作為首要政治任務(wù)，以把握精神實(shí)質(zhì)、核心要義、統(tǒng)一思想行動(dòng)為根本，以推動(dòng)農(nóng)墾改革發(fā)展為目標(biāo)，注重以上率下，注重全面系統(tǒng)，注重知行合一，在“高”“廣”“深”“實(shí)”上發(fā)力，高標(biāo)準(zhǔn)高質(zhì)量地做好習(xí)近平總書(shū)記重要講話精神的學(xué)習(xí)宣傳貫徹工作，收到了良好的效果。

圖1 羅紅霉素和鹽酸氨溴索對(duì)照品及樣品的高效液相色譜圖

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

精密稱取297.4 mg羅紅霉素對(duì)照品和56.3 mg鹽酸氨溴索對(duì)照品，置于25 mL容量瓶中稀釋，分別量取 1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL，放入10 mL容量瓶稀釋，取20μL進(jìn)針記錄圖譜，以A與C作曲線。

表1 羅紅霉素不同濃度及其峰面積

羅紅霉素線性回歸方程式：A=169729.3884C+11071.8758，R=0.9995。 結(jié)論：羅紅霉素在1.125～6.752 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

表2 鹽酸氨溴索不同濃度及其峰面積

鹽酸氨溴索線性回歸方程式：A=9039841.9729C+202009.9996，R=0.9996。 結(jié)論：鹽酸氨溴索在0.225～1.351 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6 空白輔料干擾試驗(yàn)

按羅紅霉素氨溴索膠囊處方組成，取空白輔料，按制備工藝要求制成缺味樣品。然后，按2.2.1法制成陰性對(duì)照溶液，取該溶液與供試品溶液各20μL分別進(jìn)針記錄圖譜，進(jìn)行比較。

結(jié)果表明：陰性對(duì)照溶液的色譜圖與羅紅霉素和鹽酸氨溴索對(duì)照品色譜峰相應(yīng)位置上沒(méi)有出現(xiàn)峰，說(shuō)明空白輔料對(duì)該試驗(yàn)沒(méi)有干擾。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液（20170301），重復(fù)進(jìn)樣6次，每次20μL，分別測(cè)定羅紅霉素和鹽酸氨溴索峰面積，計(jì)算其RSD分別為0.84%和0.94%。見(jiàn)表3。

圖2 陰性對(duì)照溶液的高效液相色譜圖

表3 含量測(cè)定精密度試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明：本品測(cè)定方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品（20170301）分別制備6份供試品溶液，精密吸取各供試品溶液20μL，進(jìn)行進(jìn)針檢測(cè)，記錄羅紅霉素和鹽酸氨溴索色譜圖與峰面積，羅紅霉素平均含量為99.75%，其RSD為0.66%；鹽酸氨溴索平均含量為100.14%，其RSD為0.99%。見(jiàn)表4。

結(jié)果表明：本方法重現(xiàn)性好。

2.9 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（20170301）置于室溫下，于0 h、2 h、6 h、12 h、24 h 分別進(jìn)樣 20 μL 進(jìn)行檢測(cè)，分別記錄羅紅霉素和鹽酸氨溴索色譜圖與峰面積，計(jì)算其RSD分別為0.90%和0.74%。見(jiàn)表5。

表4 含量測(cè)定重復(fù)性結(jié)果

表5 溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明：供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1 0 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取羅紅霉素對(duì)照品約90 mg、112.5 mg、135 mg及鹽酸氨溴索對(duì)照品約18 mg、22.5 mg、27 mg各三份，分別置于25 mL量瓶中，分別加入處方量的混合空白輔料，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取鹽酸氨溴索與羅紅霉素對(duì)照品適量，同法檢測(cè)，記錄色譜圖，計(jì)算即得結(jié)果，考察本方法的加樣回收率情況。測(cè)定結(jié)果如表6所示。

表6 含量測(cè)定方法的回收率測(cè)定結(jié)果

結(jié)果表明：本品的加樣回收率良好。

2.1 1 含量測(cè)定

取本品20粒，研細(xì)，精密稱取藥粉適量（羅紅霉素約0.225 g，鹽酸氨溴索約0.045 g），按2.2.1法制成供試品溶液；另精密稱取2種對(duì)照品適量，按2.2.2法制成對(duì)照品溶液；分別取20μL進(jìn)針，計(jì)算即得結(jié)果。3批羅紅霉素氨溴索膠囊樣品的羅紅霉素和鹽酸氨溴索含量測(cè)定結(jié)果如表7所示。

表7 樣品羅紅霉素和鹽酸氨溴索含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

參照文獻(xiàn)[3]，以乙腈-0.067 mol/L磷酸二氫銨（以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.5）（35∶65）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，試驗(yàn)結(jié)果表明：在該條件下羅紅霉素和鹽酸氨溴索的保留時(shí)間相差較大，且羅紅霉素的分離度較差；參照文獻(xiàn)[4]，以乙腈-0.64%醋酸銨（含1.05%枸櫞酸，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.8）-甲醇（48 ∶25 ∶28）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，試驗(yàn)結(jié)果表明：在該條件下，羅紅霉素和鹽酸氨溴索的保留時(shí)間較理想，分離度與理論塔板數(shù)均較好，但鹽酸氨溴索有肩峰；調(diào)整乙腈-0.64%醋酸銨（含1.05%枸櫞酸，以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.8）-甲醇三者比例為38∶35∶27后，羅紅霉素和鹽酸氨溴索兩峰峰形良好，保留時(shí)間理想，分離度與理論塔板數(shù)均較好，因此確定本品有關(guān)物質(zhì)檢查流動(dòng)相為：乙腈-0.64%醋酸銨（含1.05%枸櫞酸，以三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.7）-甲醇（38∶35∶27）。本研究采用HPLC法同時(shí)測(cè)定羅紅霉素氨溴索膠囊中羅紅霉素和鹽酸氨溴索的含量，在規(guī)定的色譜條件下，可用于羅紅霉素氨溴索膠囊的質(zhì)量控制。