劉新愛，童秋玲，宮 璞，金 李，張金玲，林華堅，楊朝陽

（福建中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，福建 福州 350122）

氯胺酮成癮者外周血白細(xì)胞端粒長度與中醫(yī)病理因素的關(guān)聯(lián)性研究

劉新愛，童秋玲，宮 璞，金 李，張金玲，林華堅，楊朝陽

（福建中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，福建 福州 350122）

目的 探討氯胺酮成癮者外周血白細(xì)胞的端粒長度與中醫(yī)病理因素的關(guān)系，從而在基因?qū)用嫔咸接懧劝吠獙θ梭w身心健康影響的可能中醫(yī)內(nèi)在機制。 方法 將91例氯胺酮成癮者和100例健康受試者分為試驗組和對照組，采集四診信息，應(yīng)用中醫(yī)證素辨證方法提取中醫(yī)病理因素，獲取外周血白細(xì)胞的DNA，使用QPCR基礎(chǔ)技術(shù)來測量端粒長度。 結(jié)果 ①2組外周血白細(xì)胞端粒長度與年齡和性別呈顯著相關(guān)（P＜0.05）；校正性別和年齡后，試驗組的端粒長度比對照組的短（P＜0.05）。② 氯胺酮成癮者的中醫(yī)證素分布：肝、腎、脾為主要病位因素；氣虛、陽虛為主要病性因素。③ 校正性別和年齡后，試驗組熱、氣虛、陽虛、血虛等證素的端粒長度相比對照組的端粒長度更短（P＜0.05）。 結(jié)論 ① 吸食氯胺酮會造成端粒受損，使端粒長度縮短。② 氯胺酮對機體損傷是多臟腑功能失調(diào)共同所致，肝、腎、脾為氯胺酮成癮者的主要病位因素，氣虛和陽虛為氯胺酮成癮者的主要病性因素。③ 氯胺酮成癮者端粒長度的縮短由中醫(yī)多病理因素共同影響所致，主要體現(xiàn)在熱、氣虛、陽虛、血虛等中醫(yī)病理因素上，從而進一步在基因水平上揭示了氯胺酮對人體身心健康影響的中醫(yī)內(nèi)在機制。

氯胺酮；端粒長度；中醫(yī)病理因素

當(dāng)前毒品泛濫問題已成為世界最嚴(yán)重的犯罪問題之一，吸毒已從個體或群體發(fā)展成為一個復(fù)雜的社會問題。相對于海洛因等人們耳熟能詳?shù)亩酒?，氯胺酮成本低廉，更具誘惑力，危害更大，并日益成為制毒、販毒和吸毒人員的“新寵”，尤其是心智發(fā)育尚不成熟、缺乏社會閱歷的青少年更容易成為此類毒品的受害者［1］。人體端粒由富含鳥嘌呤（G）的DNA重復(fù)序列組成［2］。毒品濫用會導(dǎo)致端粒受損，且吸毒者的端粒明顯比正常人群的短［3］。而端粒保護著染色體末端免受各種酶的攻擊，特別是在保護基因組的穩(wěn)定性、完整性方面起著至關(guān)重要的作用［4］。在健康細(xì)胞中，端粒會“吞食”任何突出的DNA末端，從而形成一種形似套索樣的T型環(huán)狀結(jié)構(gòu)，并通過這一結(jié)構(gòu)來保護染色體［5］。端粒長度的縮短到一定界限可以導(dǎo)致細(xì)胞停止分裂，細(xì)胞老化而逐漸死亡。中醫(yī)藥在戒毒方面歷史悠久，中醫(yī)對毒癮與端粒的研究也不斷進行著探索和嘗試，尤其是針對端粒與衰老的病機及治法上，取得了一定的成就。目前氯胺酮導(dǎo)致的端粒長度變化相關(guān)研究較少，因此本課題通過研究氯胺酮成癮者的端粒長度變化以及探討端粒長度變化與中醫(yī)病理因素的關(guān)聯(lián)性，以期進一步加深對毒癮影響人體健康的中醫(yī)機制的認(rèn)識，為臨床防治氯胺酮成癮方面提供可靠依據(jù)。

1 對象和方法

1.1 研究對象 所有參與者均為年齡18～54歲的漢族人，試驗組為氯胺酮成癮者91例，均來源于2012—2014年在福建省司法廳戒毒管理局所轄的強制戒毒所和福州市公安強制戒毒所強制戒毒人員，其中男45例，女46例；對照組為100例健康受試者，均來源于福建省第二人民醫(yī)院體檢中心，其中男49例，女51例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 試驗組為強制戒毒人群中的康復(fù)期人員；② 符合《氯胺酮依賴診斷治療指導(dǎo)原則》（衛(wèi)醫(yī)辦〔2012〕112號）的戒毒患者；③ 參與者自知力完整、無精神疾病和其他嚴(yán)重疾??；④ 被調(diào)查者能配合問卷調(diào)查人員完成問卷，對在調(diào)查中所涉及的各種評估量表能夠正確理解并順利回答；⑤本人自愿參與本次調(diào)查。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ① 肝、腎、心功能不全的受試者；② 在本研究之前有任何鴉片類藥物使用史者。

1.4 研究方法 16項復(fù)吸原因問卷來自北京大學(xué)中國藥物依賴研究所［6］，同時采用“證素辨證”的方法和參考《中醫(yī)臨床診療術(shù)語》制訂，“福建省吸毒人員中醫(yī)證候量表”經(jīng)過預(yù)實驗設(shè)計形成。所有被調(diào)查對象均由經(jīng)過培訓(xùn)的專業(yè)人員對其逐項詢問完成調(diào)查。

1.5 四診資料采集 四診資料信息力求做到準(zhǔn)確客觀，同時按規(guī)范化方法收集獲得，參考“600種常見癥狀的辨證意義”［7］相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行分析。

1.6 證素辨證 采用證素辨證方法，以各癥狀要素積分和閾值法確定證候及各個證的權(quán)重。各證要素的診斷確定以100作為通用閾值，各癥狀對各證的要素貢獻(xiàn)度之和達(dá)到或超過100時，即可診斷為這些證的要素。每一癥狀的輕重，以中等程度為準(zhǔn)，若該癥狀重時，其定量診斷值乘以1.5，若癥狀輕，乘以 0.7。

1.7 實驗方法

1.7.1 提取人全血DNA 空腹抽取乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝全血，使用ABI6100全自動核酸提取儀，同時提取外周血白細(xì)胞DNA，DNA放置于-80℃冰箱保存。

1.7.2 外周血白細(xì)胞端粒長度的測量 采用QPCR技術(shù)來測量。每個樣品均以核糖核酸酶P作為參考（ABI），每個樣本的端粒長度相對值為T／S比值，即端粒／單拷貝基因比值。以作為參考的核糖核酸酶P的數(shù)量和端粒重復(fù)的數(shù)量同時在ABI7900 HT熱循環(huán)儀10 mL反應(yīng)體系的孔板上為樣本，每個樣本一式2份。核糖核酸酶P化驗和端粒化驗所需的循環(huán)條件為95℃，留置10 min，然后二者各在95℃、15 s內(nèi)循環(huán)50次，60℃ 1 min內(nèi)循環(huán)50次。

1.7.3 端粒酶反應(yīng) ①1個TaqMan基因表達(dá)預(yù)混液（ABI）試劑盒；② 300 nM 正向引物：5’-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTT-TGGGTTTGGGTTTGGG TT-3’；③300 nM反向引物1 ng的模板DNA引物：5’ -GGCTTGCCTTACCCTTACCCT －TACCCTTACCCTTACCCT-3’。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用ACESS2003軟件，錄入相關(guān)問卷資料，運用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料符合正態(tài)分布的以（x±s）表示，不滿足參數(shù)檢驗條件的計量資料采用非參數(shù)秩和檢驗。兩個變量相關(guān)分析不符合正態(tài)分布的采用Spearman法，2組端粒長度 T／S比率比較采用協(xié)方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 端粒長度與年齡、性別的相關(guān)性 用Spearman相關(guān)分析所有研究對象的端粒長度與年齡、性別的相關(guān)性表明：端粒長度與年齡呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)＝-0.353，P＝0.000＜0.05；端粒長度與性別呈顯著相關(guān)，相關(guān)系數(shù)＝0.173，P＝0.018＜0.05。結(jié)果見表1。

表1 端粒長度與年齡、性別的相關(guān)性

2.2 2組端粒長度比較 見表2。

表2 2組一般資料比較（x±s）

2.3 試驗組主要證素分布 中醫(yī)證素分析根據(jù)證素判斷標(biāo)準(zhǔn)，按證素積分賦值：積分值按70分以下和70分以上分2組，將2組分別賦值為0和1。具體病位及病性證素積分的分布見表3。

表3 試驗組主要病位證素分布（n＝91）

2.4 試驗組端粒長度與對照組各證素的端粒長度比較 選取試驗組病位證素積分和病性證素積分較高的證素，分別比較試驗組各證素的端粒長度與對照組端粒長度。校正性別和年齡后，試驗組熱、氣虛、陽虛、血虛證素的端粒長度與對照組的端粒長度比較均有顯著性差異（P＜0.05），且端粒長度相比對照組的端粒長度更短；其他證素的端粒長度與對照組端粒長度比較無顯著性差異（P＞0.05）。見表 4、表 5。

表4 對照組端粒長度與試驗組各證素的端粒長度比較

表5 2組各證素的一般資料比較（x±s）

3 討 論

3.1 吸食氯胺酮會造成機體端粒損傷，使端粒長度縮短 端粒長度的維持取決于端粒酶及相關(guān)蛋白的共同作用。在生物學(xué)上，正常細(xì)胞長度隨體細(xì)胞的不斷分裂、增殖而逐漸縮短。同時，細(xì)胞端粒的長度還會受氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、吸煙等因素的影響。在本研究中，校正了性別和年齡后發(fā)現(xiàn)氯胺酮成癮者的端粒長度均比健康人群的短，說明吸食氯胺酮會導(dǎo)致端粒長度變短。

3.2 作為新型毒品，氯胺酮有潛在的濫用風(fēng)險［8］，對人體的傷害不言而喻。長期吸食氯胺酮會對吸食者的軀體和神經(jīng)系統(tǒng)造成嚴(yán)重?fù)p害［9］，還可導(dǎo)致嚴(yán)重心功能不全，誘發(fā)慢性腎衰竭等一系列心腎功能的損害［10］，嚴(yán)重者可發(fā)生精神錯亂、精神分裂［11-13］，甚至意識喪失，長期活在幻想的精神世界中。

本研究證明氯胺酮成癮者的中醫(yī)證素分布病位以肝、脾、腎為主，尤以肝最為多見，說明氯胺酮和其他毒品一樣對人體臟腑功能損傷主要是對肝、脾、腎等多臟腑功能損害［14］，正如《抉癮芻言》所言：“五臟六腑皆能受癮”?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)氯胺酮成癮者臨床上常出現(xiàn)尿頻、尿急、血尿等癥狀［10］，這是氯胺酮與海洛因、冰毒等其他毒品明顯不同的地方。從本研究結(jié)果可以看出腎的病變在氯胺酮成癮者的發(fā)生發(fā)展過程中非常重要。

研究還發(fā)現(xiàn)在病性證素上，實證以氣滯最為多見，虛證以氣虛最為常見。毒品味辛性溫燥，長期食用易散肝耗氣，疏泄失常，氣機不暢，從而出現(xiàn)心情抑郁、焦慮不安、氣機不暢等氣滯表現(xiàn)。吸毒日久，元氣耗傷太過，臟腑機能減退，故而出現(xiàn)氣短懶言、神疲乏力等氣虛表現(xiàn)。由此可見，氣滯和氣虛是氯胺酮成癮者氣機失調(diào)的主要病理因素。

3.3 本研究證明：氯胺酮成癮者對工作、生活失去興趣與熱、氣虛、陽虛、血虛等密切相關(guān)。在證素分布上，氯胺酮成癮者病位上以肝最為常見，且腎、脾、心、胃、心神也是氯胺酮成癮者的主要病位因素。病性上以氣虛最為常見，且陽虛、陰虛、氣滯、血虛、痰也是氯胺酮成癮者的主要病性因素。同時，吸食氯胺酮造成端粒長度變短主要表現(xiàn)在熱、氣虛、陽虛、血虛等中醫(yī)證素上。

總而言之，吸食氯胺酮可導(dǎo)致端粒長度變短，其引起端粒長度的縮短均可體現(xiàn)在中醫(yī)病理因素上，從而形成相應(yīng)的證，且本研究認(rèn)為這些證的形成均參與了毒癮形成的過程。這為我們后續(xù)更進一步的研究以及對中醫(yī)戒毒治療提供一定的借鑒和參考。

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R277.7

A

1000-338X（2017）05-0001-03

2017-02-06

國家自然科學(xué)基金項目（81373553）

劉新愛（1989—），男，碩士研究生。

楊朝陽（1972—），男，醫(yī)學(xué)博士，副教授。E－mail：yzy813@126.com