謝林英，謝靜，張海清

（贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院眼科，江西 贛州 341000）

核桃油對大鼠青光眼模型視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用

謝林英，謝靜，張海清

（贛南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院眼科，江西 贛州 341000）

目的 觀察核桃油對大鼠青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用。方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cmH2O（14.63 kPa）高眼壓，誘導大鼠視網(wǎng)膜缺血60min，建立急性青光眼模型。正常對照組、青光眼模型對照組、模型加藥組。均取左眼對照。分別在3 d、5 d、7 d觀察視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)及視網(wǎng)膜各層厚度。結(jié)果 模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低（P＜0.05）；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高（P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目比較差異無統(tǒng)計學意義。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層厚度與模型對照組比較，均發(fā)生顯著增多或增厚，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外核層厚度比較差異無統(tǒng)計學意義。結(jié)論核桃油對實驗性青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞具有保護作用，在今后的臨床研究與實踐中，應(yīng)對其給予足夠的重視。

核桃油；青光眼；大鼠模型；視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞；保護作用

核桃，又名胡核，核桃仁含油量高達65%～70%，其中不飽和脂肪酸含量高達80%以上。核桃油具有很高的營養(yǎng)價值，自古以來作為營養(yǎng)食品，尤其是其中富含亞油酸、亞麻酸及多種微量元素是神經(jīng)組織中細胞脂肪成分的良好來源[1]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面，而對其視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護研究卻鮮有文獻報道[2]。本課題探討核桃油對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞影響以及作用機制，證明核桃是具有中國特色和開發(fā)價值的中醫(yī)藥品及食品。研究中，建立了急性青光眼大鼠模型，并展開了分組實驗，結(jié)果匯報如下。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 實驗所需試劑包括：濃度為4%的中型甲醛，濃度為4%的水合氯醛，濃度為1%的利多卡因，濃度為1%的氯霉素眼藥水，核桃油。實驗所需儀器包括：尼康公司的光學顯微鏡，石蠟切片機（購自德國Nussloch）。實驗動物：90只健康、成年雄性SD大鼠。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 取Sprague Dawley成年大鼠，清潔級，雄性，體質(zhì)量250～300 g。成年SD大鼠90只。隨機分為3組：正常對照組（對照組），青光眼損傷對照組（損傷組），青光眼損傷后核桃油喂養(yǎng)組[喂養(yǎng)動物喂養(yǎng)時間為30 d。核桃油的劑量為1 000mg/（kg·d）]。均取左眼對照。而后取3組大鼠視網(wǎng)膜病理切片及鋪片，顯微鏡觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞數(shù)及IPL、INL厚度。

1.2.2 造模方法 采用前房灌注生理鹽水法形成150 cm H2O（14.63 kPa）高眼壓，誘導大鼠視網(wǎng)膜缺血60min，建立急性青光眼模型。

1.2.3 標本采集 按照預(yù)先分組，在第3、5、7天進行斷頭處死大鼠，迅速將眼球摘除，經(jīng)亞甲藍對角膜上極、視神經(jīng)短端進行標記，角膜上扎一個小孔，浸潤在4%中型甲醛中，進行固定，持續(xù)24 h，而后將固定好眼球經(jīng)角膜上極、視神經(jīng)斷端對稱將眼球剖開，梯度酒精脫水，而后浸蠟。常規(guī)石蠟包埋后，連續(xù)4μm切片，進行常規(guī)蘇木精-伊紅染色。

1.2.4 顯微鏡觀察 經(jīng)攝像顯微鏡對標本進行觀察，同時照相，對高倍視野內(nèi)視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目進行統(tǒng)計，同時對視乳頭周圍1mm處視網(wǎng)膜各層厚度進行測量。

1.3 觀察指標 對比分析各組實驗動物視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)、內(nèi)叢狀層以及內(nèi)核層、外核層厚度。

1.4 統(tǒng)計學方法 采取SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行處理，計量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗,計數(shù)資料以率（%）表示,采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比 經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低（P＜0.05）；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高（P＜0.05）；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目比較差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 3組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比

表1 3組視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目對比

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

7 d 17.0±1.6 9.0±2.7a 17.0±2.1b組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 21.0±3.2 10.0±1.3a 19.0±3.5b 5 d 18.0±2.4 9.0±3.1a 17.0±3.4b

2.2 視網(wǎng)膜 經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層厚度與模型對照組比較，均發(fā)生顯著增多或增厚，差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外核層厚度比較差異無統(tǒng)計學意義，見表2、3、4。

表2 3組視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層厚度比較

表2 3組視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層厚度比較

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 57.1±4.5 26.5±2.1a 43.6±3.1b 3 d 58.4±4.3 28.9±1.6a 49.8±4.3b 5 d 56.9±3.7 28.1±2.3a 46.7±2.5b

表3 3組視網(wǎng)膜內(nèi)核層厚度比較

表3 3組視網(wǎng)膜內(nèi)核層厚度比較

注：與正常對照組比較，a P＜0.05，與模型對照組比較，b P＜0.05

組別正常對照組模型對照組模型加藥組7 d 31.2±3.2 16.6±2.1a 21.5±3.2b 3 d 30.2±3.1 19.9±2.3a 24.1±2.5b 5 d 29.9±2.7 17.3±1.4a 22.3±1.5b

表4 3組視網(wǎng)膜外核層厚度比較（

表4 3組視網(wǎng)膜外核層厚度比較（

7 d 41.1±1.7 39.2±1.4 39.2±2.3組別正常對照組模型對照組模型加藥組3 d 40.5±2.1 38.8±1.6 40.8±1.8 5 d 41.3±1.8 37.2±1.9 39.9±1.6

3 討論

青光眼是最常見的眼科疾病之一，可發(fā)于各年齡段，是危害人群致盲的首要原因。青光眼嚴重影響了人群的生活及工作。青光眼最早期癥狀往往表現(xiàn)為視力的明顯下降，出現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的凋亡。有研究證實，青光眼患者中，存在諸多致病因素，會造成患者視神經(jīng)細胞凋亡[3]。開發(fā)一種安全、經(jīng)濟、有效的對青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)保護作用的藥物具有重要的臨床意義[4]。近幾年，隨著醫(yī)學技術(shù)水平的不斷提高，基因工程、細胞因子學、中西醫(yī)保護視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡的研究越來越多[5]。核桃自古以來作為營養(yǎng)食品，它富含的亞油酸、亞麻酸及多種微量元素對神經(jīng)細胞具有很好的修復作用[6]。目前對核桃油的研究主要集中在油的提取方法、成分分析及分離方面，而對其神經(jīng)營養(yǎng)保護功能及機制研究鮮有文獻報道[7]。本次研究中，出于對核桃油對大鼠青光眼模型視神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用進行研究分析的目的，建立了急性青光眼大鼠模型，并展開了分組實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型對照組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較正常對照組發(fā)生明顯降低；模型加藥組3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目均較模型對照組發(fā)生顯著升高；模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d的視網(wǎng)膜節(jié)細胞數(shù)目無明顯差異。模型加藥組3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層厚度與模型對照組比較，均發(fā)生顯著增多或增厚，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型加藥組與正常對照組比較，3 d、5 d、7 d時視網(wǎng)膜內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外核層厚度無明顯差異。這一結(jié)果與相關(guān)文獻[8]報道結(jié)果相似，充分證實核桃油對實驗性青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞具有保護作用，在今后的臨床研究與實踐中，應(yīng)對其給予足夠的重視。

[1] 袁援生.青光眼流行病學研究進展[J].昆明醫(yī)學院學報,2010,31(9):1-3.

[2] 樓航芳,葛鋼鋒.中西醫(yī)聯(lián)合用藥對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞bcl-2和bax基因表達的影響[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2010,34(2):146-145.

[3] 游玉霞,李玉潔,張海娟,等.杞貞膠囊對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞保護作用及其作用機制的實驗研究[J].眼科,2014,23(6):402-405.

[4] 張芳玲,邵蔚.銀杏葉提取物注射液對NMDA誘導的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞損傷的保護作用[J].南京中醫(yī)藥大學學報.2014,30(3):283-286.

[5] 杜然然,畢宏生,郭俊國,等.枸杞多糖對體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞的保護作用[J].眼科新進展,2014,34(2):119-122.

[6] 李諾,黃麗娜,曾平.白蒺藜皂苷對慢性高眼壓兔視網(wǎng)膜SOD活性和MDA含量的影響[J].國際眼科雜志,2013,13(5):854-856.

[7] 沈惠芳,謝欣,楊文忠,等.注射用鼠神經(jīng)生長因子多藥聯(lián)合治療對缺血性視神經(jīng)病變的作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2015,35(15):1412-1414.

[8] 余勇軍,曾志成.益氣養(yǎng)陰活血化瘀中藥對青光眼術(shù)后視神經(jīng)保護作用的研究[J].國際眼科雜志,2011,11(12):2106-2109.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.32.069

贛州市指導性科技計劃（GZ2015ZSF094)