何小英，馬迎春

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070）

鎮(zhèn)痛寧膠囊鎮(zhèn)痛作用部位的實(shí)驗(yàn)研究

何小英，馬迎春

（甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070）

目的：探討鎮(zhèn)痛寧膠囊實(shí)現(xiàn)鎮(zhèn)痛效果的作用部位，為臨床用藥提供依據(jù)。方法：采用中樞神經(jīng)鎮(zhèn)痛和末梢神經(jīng)鎮(zhèn)痛動(dòng)物模型進(jìn)行該藥的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：大鼠腦室給藥電刺激實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，低劑量組（0.38 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）；中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），在給藥3 h后，與空白對(duì)照組比較中劑量（0.76 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）。大鼠腦室給藥甩尾實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，給藥1 h時(shí)中劑量（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.01）、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05）；給藥2 h時(shí)中劑量組（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.05）；在給藥3 h時(shí)中劑量（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.01）。扭體實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，低劑量組（0.19 g/kg）有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組（0.38 g/kg）、高劑量組（0.56 g/kg）有顯著性差異（P＜0.01）。大鼠足跖定壓實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，左、右腳趾中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）均有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：大鼠腦室給藥鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)表明該藥為中樞性鎮(zhèn)痛藥，并且鎮(zhèn)痛作用延長至3 h，明顯長于嗎啡組；小鼠醋酸扭體試驗(yàn)和大鼠致炎足趾定壓實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該藥對(duì)末梢神經(jīng)疼痛也有明顯的抑制作用。

鎮(zhèn)痛寧膠囊；鎮(zhèn)痛作用；實(shí)驗(yàn)研究

鎮(zhèn)痛寧膠囊為純中藥復(fù)方制劑，具有祛風(fēng)通絡(luò)、祛痰除濕、補(bǔ)血活血、通絡(luò)止痛的功效，有標(biāo)本兼治的作用，主要用于治療頭痛，偏頭痛。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，每組10只。Wistar大鼠，SPF級(jí)，體質(zhì)量150～200 g，雌雄各半，每組10只。以上動(dòng)物均購于甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-（甘）2014-002。

1.2 受試藥物

鎮(zhèn)痛寧膠囊（蘭州鑫科醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：20140810）。配制方法：實(shí)驗(yàn)時(shí)稱取膠囊內(nèi)容物，以1%羧甲基纖維素鈉或蒸餾水稀釋至混懸液灌胃給藥。劑量設(shè)計(jì)：根據(jù)新藥審批辦法要求，設(shè)計(jì)高、中、低3個(gè)劑量，0.56，0.38，0.19 g/kg（小鼠劑量），1.14，0.76，0.38 g/kg（大鼠劑量）。腦室給藥用蒸餾水浸泡藥物滅菌后備用。

1.3 陽性對(duì)照物

桂參止痛合劑（昆明益康制藥廠，批號(hào)：20140611），給藥劑量為0.81 g/kg（是臨床用藥劑量的10倍）。鹽酸嗎啡（沈陽第一制藥廠，批號(hào)：2013990702），皮下注射給藥劑量為3.33 mg/kg（是臨床劑量的5倍）。

1.4 空白對(duì)照

等劑量的生理鹽水給藥。

1.5 儀器與試劑

儀器：GT-8402型熱板儀；GJ-7906型光電記數(shù)儀；YSD-4藥理生理多用儀；光輻射刺激儀（由10倍放大鏡，24 V，250 W碘鎢燈組成）。

試劑：醋酸，角叉菜等均為市售化學(xué)試劑。

1.6 動(dòng)物管理

1.6.1 飼養(yǎng)環(huán)境 動(dòng)物分區(qū)飼養(yǎng)于甘肅省藥品檢驗(yàn)研究院安評(píng)中心動(dòng)物室，該動(dòng)物室為潔凈設(shè)施環(huán)境，環(huán)境溫度：18～24℃，相對(duì)濕度40%～60%，動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（甘）2011-002。

1.6.2 飼料 日常喂以蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司動(dòng)物室提供的鼠飼料。主要成分及含量：水分6.5%，粗脂肪7.8%，粗蛋白23.7%，粗纖維5.2%，粗灰分8.5%，鈣1.5%，總磷0.9%，符合國家GB 14924.3-2001標(biāo)準(zhǔn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 大鼠腦室給藥電刺激實(shí)驗(yàn)

Wistar大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量150～200 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，按給藥前痛閾值分層隨機(jī)分成灌胃給藥鎮(zhèn)痛寧膠囊低、中、高3個(gè)劑量組，分別為0.38，0.76，1.14 g/kg；桂參止痛合劑組給藥劑量為0.81 g/kg。嗎啡組腦室給藥劑量為3.33 mg/kg﹑空白對(duì)照組給等體積溶劑的生理鹽水（NS），以上6組給藥方式均為腦室給藥。實(shí)驗(yàn)前預(yù)測，用YSD-4藥理生理多用儀兩電極刺激小鼠尾部（條件為5 V，0.04 ms，1 Hz，1/0.125 s），連續(xù)3次，每次間隔5 min，3次內(nèi)有2次嘶叫為合格。選合格大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。腦室給藥方法為：切開大鼠顱頂皮膚，暴露顱骨，然后用注射器針頭插入右側(cè)腦室給藥，于給藥10 min，1 h，2 h，3 h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄出現(xiàn)第一次嘶叫的時(shí)間[1]。

2.2 大鼠腦室給藥甩尾實(shí)驗(yàn)

Wistar大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量150～200 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，給藥方法及動(dòng)物分組同大鼠腦室給藥電刺激試驗(yàn)。輻射儀由10倍放大鏡和24 V，250 W碘鎢燈組成，燈產(chǎn)生一定強(qiáng)度的光束，經(jīng)透鏡聚焦照射大鼠尾部致痛，大鼠甩尾作為疼痛反應(yīng)指標(biāo)。將大鼠分別置于特制的固定圓筒內(nèi)，使其不能自由活動(dòng)而鼠尾由筒后蓋的中心孔處穿出，任其自然下垂，大鼠稍經(jīng)訓(xùn)練即能保持安靜以備實(shí)驗(yàn)。測痛時(shí)漏斗外口緊貼鼠尾，借電子秒表記錄從照射開始至出現(xiàn)甩尾的時(shí)間作為痛閾值，連測2次，取其平均值作為基礎(chǔ)痛閾值[2-3]。選用5 s左右引起甩尾的大鼠供實(shí)驗(yàn)用，＜3 s或＞10 s表示動(dòng)物反應(yīng)過敏或遲鈍，舍棄不用。給藥后每隔1 h測定1次，記錄引起甩尾的照射時(shí)間，連續(xù)3次，若照射12.5 s仍不甩尾時(shí)，中斷照射，以免局部燙傷，并以12.5 s計(jì)算。

2.3 小鼠扭體實(shí)驗(yàn)

昆明種小鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g隨機(jī)分為6組，每組10只，按給藥前痛閾值分層隨機(jī)分成灌胃給藥鎮(zhèn)痛寧膠囊高、中﹑低劑量組、桂參合劑組﹑等體積溶劑空白對(duì)照組，嗎啡皮下注射給藥組，給藥劑量見表3，各組動(dòng)物給藥后1 h，每鼠腹腔注射 0.6%醋酸溶液0.2 mL/20 g，記錄20 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。

2.4 大鼠足趾定壓實(shí)驗(yàn)

Wistar大鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量150～200 g，隨機(jī)分為6組，每組10只，給藥劑量及動(dòng)物分組同小鼠扭體實(shí)驗(yàn)。給藥30 min后，大鼠右腳注射1%角叉菜、0.1 mL/只，于給藥1 h后，用游標(biāo)卡尺測定大鼠足跖壓痛值。（先用游標(biāo)卡尺測定腳的厚度，再推動(dòng)卡尺加壓，直到大鼠嘶叫為止，計(jì)算兩次游標(biāo)卡尺的差值）同時(shí)對(duì)大鼠未致炎的左腳進(jìn)行測定，并對(duì)各組動(dòng)物分別于1 h后進(jìn)行測定[4-7]。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大鼠腦室給藥電刺激實(shí)驗(yàn)

表1 鎮(zhèn)痛寧膠囊對(duì)大鼠腦室給藥電刺激法的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1結(jié)果表明，鎮(zhèn)痛寧膠囊3個(gè)劑量在給藥10 min，1 h，2 h后均有明顯鎮(zhèn)痛作用，與空白對(duì)照組比較，低劑量組（0.38 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05）;中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），在給藥3 h后，與空白對(duì)照組比較中劑量（0.76 μg/kg）有明顯差異（P＜0.05），提示鎮(zhèn)痛時(shí)間長于嗎啡組。

3.2 大鼠腦室給藥甩尾試驗(yàn)

表2 鎮(zhèn)痛寧膠囊對(duì)大鼠腦室給藥甩尾法的鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2結(jié)果表明，鎮(zhèn)痛寧膠囊中劑量組對(duì)輻射熱所致大鼠尾部疼痛有明顯的抑制作用，其給藥1 h和2 h后的鎮(zhèn)痛作用與嗎啡組相當(dāng)。與空白對(duì)照組比較，給藥1h時(shí)中劑量（0.76 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01）、高劑量組有顯著性差異（P＜0.05）；給藥2 h時(shí)中劑量組（0.76 μg/kg）有顯著性差異（P＜0.05）；在給藥3 h時(shí)中劑量組（0.76 μg/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），結(jié)果提示該藥中劑量組能延長鎮(zhèn)痛時(shí)間，其鎮(zhèn)痛時(shí)間長于嗎啡組。

3.3 扭體實(shí)驗(yàn)

表3 藥物對(duì)小鼠冰醋酸致痛作用的影響

表3結(jié)果表明，鎮(zhèn)痛寧膠囊高、中、低劑量組及桂參組，嗎啡組均對(duì)醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，與空白對(duì)照組比較，低劑量組（0.19 g/kg）有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組（0.38 g/kg）、高劑量組（0.56 g/kg）有非常顯著性差異（P＜0.01），結(jié)果提示鎮(zhèn)痛寧膠囊中劑量組鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)于嗎啡組。

3.4 大鼠足跖定壓實(shí)驗(yàn)

表4 鎮(zhèn)痛寧膠囊對(duì)大鼠足跖定壓鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4結(jié)果表明：鎮(zhèn)痛寧膠囊高、中劑量給藥組在給藥1 h后，對(duì)左腳未致炎癥足跖壓痛有明顯抑制作用，與空白對(duì)照組比較，左、右腳趾中劑量組（0.76 μg/kg）、高劑量組（1.14 μg/kg）均有非常顯著性差異（P＜0.01），結(jié)果提示該藥對(duì)末梢神經(jīng)疼痛有抑制作用，抑制疼痛作用同于嗎啡。

4 討論

4.1 鎮(zhèn)痛寧膠囊經(jīng)大鼠腦室給藥可明顯抑制電刺激和輻射熱產(chǎn)生的尾部疼痛，說明該藥為中樞性鎮(zhèn)痛藥。

4.2 鎮(zhèn)痛寧膠囊小鼠扭體實(shí)驗(yàn)和大鼠足跖定壓實(shí)驗(yàn)說明該藥能抑制醋酸扭體反應(yīng)和致炎癥的大鼠足趾壓痛，說明該藥對(duì)末梢神經(jīng)疼痛也有抑制作用。

兩種鎮(zhèn)痛動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：鎮(zhèn)痛寧膠囊對(duì)中樞神經(jīng)疼痛和末梢神經(jīng)疼痛均有明顯的抑制作用；其中、高劑量鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)于5倍臨床劑量的嗎啡組，并且持續(xù)時(shí)間長于嗎啡組。

[1] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1991:351-356.

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本文編輯：魯守琴

Experimental Study on Analgesic Site of Zhentongning Capsules

He Xiao-ying, Ma Ying-chun
(Gansu Institute for Drug Control, Gansu Lanzhou 730000, China)

Objective：To investigate the analgesic site of zhentongning capsules, a traditional Chinese medicine compound preparation, and to provide a basis for clinical medication.Methods：Analgesic test was performed in animal models of central nerve analgesia and peripheral nerve analgesia.Results：In electrical stimulation test on rats after intraventricular administration, the result in low dose group (0.38 μg/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with those in blank control group. The result in moderate dose group 3 h after administration showed significant difference with that in blank control group (P＜0.05). In tail-flick test on rats after intraventricular administration, the result in moderate dose group (0.76 μg/kg) 1 h after administration showed remarkable difference (P＜0.01), while that in high dose group showed significant difference (P＜0.05), with that in blank control group. The result in moderate dose group (0.76 μg/kg) showed significant difference with that in blank control group 2 h (P＜0.05), while showed remarkable difference 3 h (P＜0.01), after administration. In writhing test, the result in low dose group (0.19 g/kg) showed significant difference (P＜0.05), while those in moderate (0.38 g/kg) and high (0.56 g/kg) dose groups showed remarkable difference (P＜0.01), with that in blank control group. However, in plantar pressure test on rats, all the results of left and right foot pads in moderate (0.76 μg/kg) and high (1.14 μg/kg) dose groups showed remarkable differences with those in blank control group (P＜0.01).Conclusion：The analgesic tests in rats by intraventricular administration proved the preparation as a central analgesic drug, of which the analgesic effect was prolonged to 3 h, significantly longer than that of morphine. The writhing test in mice and plantar pressure test in rats showed significantly inhibitory effect of the drug on peripheral nerve pain.

Zhentongning Capsules; Analgesic Effect; Experimental Study

R285.5

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.012

2017 - 04 - 10

何小英，女，職稱：主管藥師。研究方向：藥品檢驗(yàn)與藥物分析。通訊作者E-mail：1165715940@qq.com