馮霞，梁國強，陳偉

（1．南京醫(yī)科大學附屬南京腦科醫(yī)院藥劑科，江蘇 南京 210029；2．蘇州市吳門醫(yī)派研究院，江蘇 蘇州 215003）

氣相色譜法測定珍珠明目滴眼液中的乙醇殘留量

馮霞1，梁國強2，陳偉2

（1．南京醫(yī)科大學附屬南京腦科醫(yī)院藥劑科，江蘇 南京 210029；2．蘇州市吳門醫(yī)派研究院，江蘇 蘇州 215003）

目的：建立珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量的測定方法。方法：采用氣相色譜法，鍵合交聯聚乙二醇為固定液的毛細管柱，載氣為氮氣，氫火焰離子化檢測器（FID），進樣口溫度為190℃，檢測器溫度為250℃，柱溫采用程序升溫，初始溫度為50℃，保持3 min，再以50℃/min的升溫速率升溫至200℃，保持5 min。載氣流速1.5 mL/ min，空氣流量450 mL/min；氫氣流量45 mL/min，分流比為30∶1。結果：乙醇濃度在21.01～105 050.48 μg/mL內具有良好的線性關系，72批樣品中有18批樣品的乙醇殘留量超過0.5%。結論：本方法準確、可靠，靈敏度高，適用于珍珠明目滴眼液中乙醇殘留量的檢測。

氣相色譜法；氫火焰離子化檢測器；珍珠明目滴眼液；乙醇殘留

珍珠明目滴眼液主要由珍珠液和冰片配伍制成，是國家食品藥品監(jiān)督管理局批準的二級中藥保護品種，收載于《中藥成方制劑》第17冊，其主要功能為清熱瀉火、養(yǎng)肝明目，主要用于肝虛火旺引起視力疲勞癥和慢性結膜炎，長期使用可以保護視力[1-4]。

珍珠明目滴眼液生產過程中運用到乙醇，而滴眼液屬眼科用藥，要求比較嚴謹，對制劑中乙醇殘留量需要進行控制。因此，本研究采用氣相色譜法鑒定不同廠家珍珠明目滴眼液中的乙醇殘留量[5-10]，評價不同生產企業(yè)制劑生產工藝，為確保生產工藝的穩(wěn)定性及有效控制珍珠明目滴眼液的質量提供參考依據。

1 儀器與試藥

PE Clarus 680 氣相色譜儀（美國PerkinElmer公司），乙醇為色譜純（美國Sigma-Aldrich公司），無水乙醇標準品（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：1612772），正丁醇標準品（中國藥品生物制品檢定研究院，批號：160108），水為超純水（美國millipore公司Q3制備），色譜柱DB-WAX（30 m×0.320 mm，0.50 μm），樣品為市場收集的7個廠家的72批樣品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

按照氣相色譜法[《中華人民共和國藥典》（2015年版）附錄Ⅵ E]測定，用鍵合交聯聚乙二醇為固定液的毛細管柱；起始溫度為50℃，維持3 min，再以10℃/min的速率升溫至80℃，再以50℃/min的速率升溫至200℃，維持5 min；進樣口溫度190℃；氫火焰離子化檢測器（FID）溫度250℃。載氣（N2）流量1.5 mL/min；空氣流量450 mL/min；氫氣流量45 mL/min，分流比為30∶1。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取無水乙醇對照品8.429 67 g，置20 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置20 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 內標溶液制備 精密稱取正丁醇4.7951 g，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。

2.2.3 樣品溶液制備 取0.50 g樣品加內標溶液0.5 mL，混勻，作為供試品溶液。

3 系統(tǒng)適用性實驗

3.1 專屬性實驗

在“2.1”色譜條件下，對照品溶液中乙醇、正丁醇保留時間均在13 min內，分離良好，說明上述色譜條件適用于本品的含量測定。見圖1。

圖1 專屬性實驗HPLC圖

3.2 標準曲線線性范圍

精密量取上述對照品溶液加內標溶液適量稀釋制成每1 mL濃度分別為21.01，52.53，105.05，210.11，420.22，1050.55，2101.10和10505.48 μg濃度的溶液，各取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以各自的峰面積（Y）對其濃度（X）進行線性回歸，回歸方程為：

Y＝0.003X－0.093（R2＝0.999），

結果表明在21.01～105 050.48 μg/mL范圍內乙醇色譜峰面積與其濃度成良好線性關系。

3.3 精密度

取高、中、低濃度對照品溶液，重復進樣5次，計算待測組分乙醇峰面積與內標物正丁醇峰面積之比的相對標準偏差（RSD）分別為2.55 %，1.22%和3.88%，表明該方法精密度良好。

3.4 重復性

取同一批號的珍珠明目滴眼液（批號：20120119）按“2.2”項下方法制備供試品溶液6份，照“2.1”項下色譜條件進樣，內標法計算乙醇含量平均值為0.22%，RSD為0.65%，表明該方法重復性良好。

3.5 穩(wěn)定性

取同一批號的珍珠明目滴眼液（批號：20120119）按“2.2”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件，分別于配制后0，2，4，8，10，20 h后進樣，計算待測組分乙醇峰面積與內標物正丁醇峰面積之比的RSD為2.84%，表明20 h內供試品溶液基本穩(wěn)定。

3.6 加樣回收率

取已知乙醇殘留量的樣品（批號：20120119）6份，分別加入1 050.55 μg/mL的標準溶液，按“2.1”項下色譜條件，以內標法計算回收率平均值為96.65%，RSD為3.70 %。見表1。

4 樣品測定

取“2.2.3”項下樣品溶液1 μL注入氣相色譜儀，測定。按“2.2”項下方法制備供試品溶液6份，按“2.1”項下色譜條件進樣測定迷迭香酸的色譜峰面積，內標法計算乙醇含量，測定結果見表2。

表1 乙醇加樣回收率

表2 72批樣品乙醇殘留量

（續(xù)表）

4 結果與討論

《中華人民共和國藥典》（2015年版）二部附錄Ⅷ P中規(guī)定，乙醇為第三類溶劑殘留，不得超過0.5%。針對現行法定標準未設置滴眼液中乙醇殘留量的檢查項，建立了一種靈敏的氣相色譜測定乙醇殘留量的方法，該方法能將珍珠明目滴眼液中的乙醇有效分離，具有較高的靈敏度和準確性，可用于珍珠明目滴眼液的有關物質檢查，對滴眼液中的第三類溶劑殘留進行控制。依據上述方法檢驗，72批樣品中有20批樣品的乙醇殘留量超過0.5%。從72批珍珠明目滴眼液樣品乙醇殘留量分布情況圖中可以看出不同廠家生產的珍珠明目滴眼液樣品乙醇殘留量變動幅度差別較大。建議增加珍珠明目滴眼液的乙醇殘留量的檢查項，以進一步規(guī)范珍珠明目滴眼液的生產。

[l] 國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準:中藥成方制劑[S].第17冊.北京:人民衛(wèi)生出版社,1998.

[2] 程敏,葉小弟,繆云萍,等.珍珠明目滴眼液改善兔眼球結膜微循環(huán)的實驗研究[J].中國臨床藥理學與治療學,2012,17(8):856-859.

[3] 牛耘麗,徐蔚.珍珠明目滴眼液治療慢性結膜炎的臨床研究[[J].同濟大學學報:醫(yī)學版,2005,26(2):62-64.

[4] 沈愛祥,王繼紅,丁潔瑾,等.珍珠明目滴眼液聯合自體血清治療角膜潰瘍臨床療效分析[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011,38(7):1361-1363.

[5] 韓海,賈運濤.參麥注射液中殘留乙醇和乙酸乙酯的氣相色譜限量檢查[J].中南藥學,2004,2(5):278-279.

[6] 韓海.毛細管氣相色譜法檢查參麥注射液中殘留乙醇和乙酸乙酯限量[J].暨南大學學報(自然科學版),2005,26(3):446-448.

[7] 林秋婕,陳贊民.頂空氣相色譜法測定紫杉醇注射液中乙醇含量[J].中國熱帶醫(yī)學,2007,7(7):1211-1212.

[8] 楊先炯,王永林,王愛民,等.氣相色譜法測定注射用辛芍凍干粉針有機溶劑殘留量[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(2):342-343.

[9] 丁泉,黃健,楊揚.頂空氣相色譜法測定脈絡寧注射液中有機溶劑殘留量[J].福建分析測試,2010,19(2):63-65.

[10] 肖樹雄,莫結麗.頂空氣相色譜法測定參芪扶正注射液中乙醇殘留量[J].中國藥師,2010,13(12):1763-1765.

本文編輯：魯守琴

Determination of Residual Ethanol Content in Zhenzhu Mingmu Eye Drops by Gas Chromatography

Feng Xia1, Liang Guo-qiang2, Chen Wei2
(1. Department of Pharmacy, Nanjing Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Jiangsu Nanjing 210029, China; 2. Suzhou Institute of Wumen Chinese Medicine, Jiangsu Suzhou 215003, China)

Objective：To establish a method for determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.Methods：Gas chromatography (GC) was adopted by using a capillary column (DB-WAX) with FID detector, serving hehelium as carrier gas. The temperature of injection port was 190℃ and that of detector was 250℃. Programmed rising of column temperature was adopted. The initial column temperature was 50℃, which was maintained for 3 mins and raised to 200℃ at a rate of 50℃/min, then maintained for 5 mins. The flow rate of carrier gas was 1.5 mL/min, while the air flow was 450 mL/min, the hydrogen flow was 45 mL/min, and the split ratio was 30∶1.Results：The calibration curve showed a good linearity at a ethanol concentration range of 21.01～105 050. 48 μg/mL. The residual ethanol contents in 18 of 72 batches of samples were more than 0.5%.Conclusion：The method is accurate, reliable and sensitive for the determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.

Gas Chromatography; Hydrogen Flame Ionization Detector; Zhenzhu Mingmu Eye Drops; Residual Ethanol Content

R286.0

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.014

2017 - 04 - 01

馮霞，女，主管中藥師。研究方向：中藥學、中藥藥理。E-mail：1565661221@qq.com

陳偉，男，碩士，主管中藥師。研究方向：中藥學。E-mail：540584399@qq.com