程麗麗

(響水縣中醫(yī)院，江蘇 響水 224600)

乙肝五項檢測中酶免疫法和金標(biāo)免疫法的應(yīng)用研究

程麗麗

(響水縣中醫(yī)院，江蘇 響水 224600)

目的 研究乙肝五項檢測中酶免疫法和金標(biāo)免疫法的檢測的一致性和靈敏度的差異及其在臨床中的應(yīng)用。方法 隨機選取我院檢驗科2012年6月至2015年6月的血樣150例作為研究樣本，分別采用酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測樣本乙肝五項，比較兩者對乙肝的確診結(jié)果有無異同以及兩者檢出率是否有差別。結(jié)果 酶免疫法大三陽檢出率為100%(41/41)，小三陽檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論 酶免疫法和金標(biāo)免疫法對乙肝五項檢測的結(jié)果具有一致性，且酶免疫法較金標(biāo)免疫法檢測靈敏度高。兩者檢測結(jié)果理想，值得臨床推薦。

乙肝五項檢測；酶免疫法；金標(biāo)免疫法；應(yīng)用研究

現(xiàn)今乙型病毒性肝炎已經(jīng)成為全世界范圍內(nèi)流行的疾病，是全世界感染人數(shù)最多的慢性傳染性疾病[1]，然而這種疾病并沒有得到及時有效的控制，很多乙肝患者發(fā)展為肝硬化，甚至威脅生命。為此，我們提出用酶免疫法和金標(biāo)免疫法[2]對乙肝HBsAg(乙肝病毒表面抗原)、HBsAb(乙肝病毒表面抗體)、HBeAg(乙肝病毒e抗原)、HBeAb(乙肝病毒e抗體)、HBcAb(乙肝病毒核心抗體)五項內(nèi)容(俗稱“乙肝兩對半”)進行檢測[1]，檢驗其一致性及靈敏度，并得到一些有意義的結(jié)果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽取2012年6月至2015年6月的患者血樣150例，乙肝陽性102例，陰性48例。其中男性80例，乙肝陰性28例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三項檢測陽性(大三陽)20例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三項檢測陽性(小三陽)18例，其他14例，年齡在30到49歲之間，平均年齡為39.1±2.7歲，女性70例，乙肝陰性20例，HBsAg，HBeAg，HBcAb三項檢測陽性(大三陽)21例，HBsAg，HBeAb，HBcAb三項檢測陽性(小三陽)19例，其他10例，年齡在31到50歲之間，平均年齡為38.8±3.9歲[2]。臨床資料符合實驗因素外其他非實驗因素基本相同，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。具有可比性。

1.2 研究方法 靜脈采血于真空促凝試管中，在37℃的溫度下靜置，待凝固后離心完全分離血清，在兩小時內(nèi)分別采取酶免疫法和金標(biāo)免疫法兩種方法檢測乙肝五項。采用酶標(biāo)儀以450/630nm雙波長比色，以S/CO值判定ELISA檢測結(jié)果.。金標(biāo)法嚴(yán)格按說明書滴加標(biāo)本和緩沖液，在15分鐘內(nèi)判定結(jié)果。兩種檢測方法的步驟嚴(yán)格按照實驗室操作規(guī)定進行。密切注意實驗過程，及時將檢測的實驗結(jié)果和各項數(shù)據(jù)記錄在表格中。通過對實驗數(shù)據(jù)的分析，比較兩種檢測方法對實驗結(jié)果的確定是否具有一致性及其敏感度的比較。

1.3 儀器與試劑 酶聯(lián)免疫檢測儀：深圳凱特KC-100，自動酶標(biāo)洗板機：優(yōu)利特URIT-670。濰坊三維生物工程集團有限公司生產(chǎn)的乙型肝炎病毒診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)，艾博生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的金標(biāo)快速檢測板。一次性使用靜脈血采集容器(促凝管)。

1.4 評價標(biāo)準(zhǔn) “優(yōu)”為陽性檢測結(jié)果高于90%，“良”為陽性檢測結(jié)果在80%到90%之間，“可”為陽性檢測結(jié)果在50%到80%之間，“差”為陽性檢測結(jié)果低于50%[3]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 以SPSS13.0軟件分析。數(shù)據(jù)比較以x2檢驗。計量數(shù)據(jù)以t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組效果對比 酶免疫法大三陽檢出率為100%(41/41)，小三陽檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。但兩種方法對大三陽和小三陽的檢測率均在90%左右，且大三陽均完全檢出，因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對半的檢測中具有高度一致性。見表1

表1 兩組效果對比(例，%)

注：與對照組相比，*P<0.05

2.2 兩種檢測方法敏感度和特異度對比 通過對乙肝兩對半的敏感度和特異度的實驗對比，得出酶免疫法的敏感度為97.2%，特異度為96.5%，均高于金標(biāo)免疫法的敏感度96.9%，特異度88.9%，計算x2值，得到P<0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。提示兩種方法相比較，酶免疫法對乙肝兩五項的檢出率要更高。詳見下表2

表2 兩種檢測方法敏感度和特異度對比

注：與對照組相比，*P<0.05

3 討論

目前，我國是世界上感染乙型肝炎病毒人數(shù)最多的國家，乙肝病毒傳播途徑以母嬰傳播為垂直傳播，以血液傳播和性傳播為平行傳播，傳播范圍廣，速度快，嚴(yán)重威脅我國人民的健康水平，對患病家庭造成經(jīng)濟、心理等各方面影響[3]。積極探索科學(xué)方法，找到迅速有效的治療和預(yù)防措施顯得刻不容緩。為此，我院采用酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測乙肝五項指標(biāo)，探究兩種方法檢測率及其敏感度差異，旨在指導(dǎo)臨床運用，并取得了一些結(jié)論。究其主要原因，酶免疫法為雙抗體夾心法，原理是形成抗原-抗體復(fù)合物，然后通過顯色來診斷鑒別，其形成的復(fù)合物穩(wěn)定性高，不易分離，因此具有較高的靈敏度(0.5ng/ml)。在ELISA檢測中需強調(diào)注意：血清分離必須徹底，避免纖維蛋白吸附導(dǎo)致結(jié)果假陽性；標(biāo)本不可溶血，否則血紅蛋白殘留也會致結(jié)果假陽性；操作必須規(guī)范，滴加樣本和試劑要垂直，保證加入量的準(zhǔn)確性；試劑盒在使用前應(yīng)先從冰箱取出放置37℃恒溫30分鐘方可使用，滴加時需搖勻試劑，棄去2滴后再加入；溫育時要封板，時間要準(zhǔn)確，以防影響結(jié)果的判定；洗板步驟非常重要，要先檢查洗板機，確保管道通暢，足量清洗液洗板5次洗完后要拍干ELISA板；在滴加終止液后10分鐘內(nèi)要在酶標(biāo)儀上比色讀取結(jié)果，時間過長可致假陽性。金標(biāo)免疫法是以膠體金作為免疫示蹤物檢測患者血清中抗原抗體，但由于需要較高濃度的免疫示蹤物，所以其靈敏度(5ng/ml)在一定程度上受到限制，這也是該方法稍差于酶免疫法的主要原因。

本文通過對酶免疫法和金標(biāo)免疫法檢測乙肝兩對半的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酶免疫法大三陽檢出率為100%(41/41)，小三陽檢出率為97.29%(36/37)，較金標(biāo)免疫法的100%(41/41)，89.18%(33/37)效果好。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對半的檢測中具有高度一致性。但兩種方法對大三陽和小三陽的檢測率均在90%左右，且大三陽均完全檢出，因此提示酶免疫法和金標(biāo)免疫法在乙肝兩對半的檢測中具有高度一致性，均能有效檢測出陽性患者，符合張曉春等人的報道結(jié)果[4]。此外，通過對乙肝五項的敏感度和特異度的實驗對比，得出酶免疫法的敏感度為97.2%，特異度為96.5%，均高于金標(biāo)免疫法的敏感度96.9%，特異度88.9%，說明酶免疫法比金標(biāo)免疫法的敏感程度更高。有報道表明[5]，酶免疫法靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，可用于乙型肝炎的明確診斷；金標(biāo)免疫法由于顯示出與酶免疫法密切的相關(guān)性，亦能較準(zhǔn)確檢測乙肝表面抗原，且該方法簡單易行，大多數(shù)可以肉眼觀察到實驗現(xiàn)象，操作快捷，因此一定程度上也可以指導(dǎo)臨床研究備。

綜上所訴，酶免疫法和金標(biāo)免疫法都可以應(yīng)用于乙肝五項檢測中，且酶免疫法效果優(yōu)于金標(biāo)免疫法，實驗數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，值得臨床推薦，但操作過程繁瑣，影響因素較多，適合批量檢測。金標(biāo)法快速簡便，可立即出結(jié)果，無需儀器設(shè)診，適合急診。臨床可以根據(jù)工作需要進行選用。

[1] 李家明. 慢性乙型病毒性肝炎患者的臨床五項檢驗結(jié)果分析[J]. 中外醫(yī)學(xué)研究,2014,34(2):66-67.

[2]云春鳳,陳競,楊春，等. 酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法檢測25-羥基維生素D的一致性[J]. 衛(wèi)生研究,2015,03(4):435-439.

[3]倪紅霞. 乙肝病毒母嬰傳播的病毒變異規(guī)律與乙肝疫苗免疫保護效果研究[D].第二軍醫(yī)大學(xué),2013，28(7):77-81

[4]張曉春,陸燕蓉. 標(biāo)記免疫技術(shù)的研究進展[J]. 中國衛(wèi)生檢驗雜志,1999,02(8):64-67.

[5]胡麗華. 乙肝兩對半測試卡快速檢測血清乙肝三系應(yīng)用及評價[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,12(7):1433.

10.3969/j.issn.2095-9559.2017.02.020

2095—9559(2017)02—2926—02

2016-08-03