周玉瑩++葉益微++涂滿標(biāo)++王晶

摘 要：建立風(fēng)味發(fā)酵乳中三氯蔗糖含量的測定方法，并對國標(biāo)法的前處理進(jìn)行優(yōu)化。采用高效液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器，Agilent ZORBAX SB-C18（150mm*4.6mm，5μm）色譜柱，柱溫：40℃，流速：1ml/min，流動相：水：乙腈=85：15（V/V），蒸發(fā)管溫度：50℃，氣體流量2.0ml/min，放大倍數(shù)：1倍。采用此方法，工作曲線線性范圍：0.1-0.8mg/ml，相關(guān)系數(shù)：R2=0.9995，回收率：92%-95%，精密度（n=6）：0.85%，方法快速、準(zhǔn)確，可以適用于風(fēng)味發(fā)酵乳中三氯蔗糖含量的檢測。

關(guān)鍵詞：三氯蔗糖；高效液相色譜；蒸發(fā)光散射檢測器；風(fēng)味發(fā)酵乳

中圖分類號：TS202.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-2064（2017）05-0195-02

三氯蔗糖（TGS），又稱蔗糖素、蔗糖精。三氯蔗糖是以蔗糖為原料經(jīng)氯化作用而制得的，外觀為白色粉狀晶體，甜味特性非常接近蔗糖，甜度是蔗糖的600倍，極易溶于水、乙醇和甲醇，微溶于乙酸乙酯。由于它能量低，是肥胖癥、心血管病和糖尿病患者理想的甜味劑[1]。我國衛(wèi)生部2014年發(fā)布的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定，三氯蔗糖在風(fēng)味發(fā)酵乳中最大允許使用量為0.3g/kg[2]。GB22255-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中三氯蔗糖的測定》中推薦高效液相色譜儀與示差檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器配合使用檢測食品中三氯蔗糖的含量[3]，但方法中步驟過于繁瑣，同時造成回收率偏低[4-8]。本實(shí)驗針對國標(biāo)中前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，改進(jìn)后的實(shí)驗方法能夠快速、準(zhǔn)確的測定風(fēng)味發(fā)酵乳中三氯蔗糖的含量。

1 材料與方法

1.1 試劑和標(biāo)準(zhǔn)品

乙腈（色譜純）、超純水、乙酸鉛、三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品。

1.2 儀器

安捷倫高效液相色譜儀1260、格雷斯蒸發(fā)光散射檢測器ELSD3300、渦旋式混合器、高速離心機(jī)、超聲波清洗器、IKA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.3 色譜條件

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18柱子（150mm*4.6mm，5μm）。

進(jìn)樣體積：20μL，流速：1ml/min，柱溫：40℃，流動相：水：乙腈=85：15（V/V）。

蒸發(fā)光散射檢測器條件：蒸發(fā)管溫度：50℃，氣體流量2.0ml/min，放大倍數(shù)：1倍。

1.4 樣品前處理

稱取5g風(fēng)味發(fā)酵乳樣品于50ml離心管中，加入5ml水，渦旋混合器上震蕩30s。加入15ml乙腈和2ml乙酸鉛（22g/L），震蕩30s，超聲30min。以7000r/min離心5min，將上清液移至雞心瓶中，沉淀物中加入10ml75%乙腈水溶液，渦旋震蕩混合均勻，以7000r/min離心5min，重復(fù)提取2次，將上清液合并至雞心瓶中。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上用70℃水浴蒸干，殘渣用3ml超純水溶解，置于5ml容量瓶內(nèi)定容，靜置后溶液過0.45μm水系濾膜，濾液上機(jī)檢測。

1.5 測定

1.5.1 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液配制

準(zhǔn)確稱取50mg三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，混合均勻，此時三氯蔗糖濃度為1mg/ml，儲備液置于4℃冰箱中保存。

1.5.2 三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

吸取1ml、2ml、5ml、8ml三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)貯備液于10ml容量瓶中，用水定容至刻度，混合均勻，此時三氯蔗糖的標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度分別為0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.5mg/ml，0.8mg/ml。三氯蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖如圖1。

1.5.3 樣品測定

取前處理后的濾液20μL進(jìn)樣，進(jìn)行高效液相色譜分析，通過保留時間確定三氯蔗糖的色譜峰，根據(jù)外標(biāo)法用峰面積進(jìn)行定量分析。三氯蔗糖樣品溶液色譜圖如圖2。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的優(yōu)化

本實(shí)驗中采用乙腈與乙酸鉛配合作為風(fēng)味發(fā)酵乳的蛋白沉淀劑，國標(biāo)法中使用的是甲醇，乙酸鋅-亞鐵氰化鉀混合沉淀劑，對比來看，乙腈比甲醇對蛋白質(zhì)的沉淀效果更好，乙酸鋅-亞鐵氰化鉀作為沉淀劑會造成基線波動，整個色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定，同時會引入雜質(zhì)峰，因此選用對基線影響較小的乙酸鉛作為沉淀劑。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 流動相的選擇

實(shí)驗中采用了不同體積比的水-乙腈對樣品進(jìn)行分離，結(jié)果表明，水-乙腈（85：15，V/V）為流動相時，三氯蔗糖在7min內(nèi)出峰并且能夠與雜質(zhì)峰得到有效的分離，峰形比較理想。

2.2.2 溫度的選擇

實(shí)驗中有兩部分溫度的設(shè)置，一部分是柱溫箱的溫度，此處設(shè)置了40℃，給樣品溶液和流動相一個預(yù)加熱，以便于后續(xù)到達(dá)蒸發(fā)管后能夠快速的蒸發(fā)。另一部分蒸發(fā)管的溫度設(shè)置為50℃，由于流動相中是高含水量的流動相，因此相應(yīng)的蒸發(fā)溫度會比高有機(jī)流動相的高，保證氣溶膠中揮發(fā)性成分在加熱的不銹鋼漂移管中完全蒸發(fā)。

2.3 回歸方程與相關(guān)系數(shù)

根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測器原理，以三氯蔗糖濃度的log對數(shù)（X）為橫坐標(biāo)，峰面積的log對數(shù)（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到對數(shù)方程：Y=1.3796X+3.9584，相關(guān)系數(shù)為0.9995。

2.4 精密度試驗

同一樣品在相同條件下連續(xù)分析6次，測定結(jié)果如表1，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.85%。

2.5 回收率試驗

取風(fēng)味發(fā)酵乳樣品進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗，結(jié)果如表2所示。

3 結(jié)語

本實(shí)驗建立了風(fēng)味發(fā)酵乳中三氯蔗糖的檢測方法，并優(yōu)化了蛋白沉淀劑，流動相比例以及蒸發(fā)管溫度，有效的減少了雜質(zhì)對三氯蔗糖色譜峰的干擾，同時提高了實(shí)驗效率，使得三氯蔗糖樣品分離在7min內(nèi)能夠完成。綜上所述，本實(shí)驗方法可以應(yīng)用于風(fēng)味發(fā)酵乳中三氯蔗糖的測定。

參考文獻(xiàn)

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