方潔，李春芳，馬春雷，陳亮

中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所國家茶樹改良中心，農(nóng)業(yè)部茶樹生物學與資源利用重點實驗室，浙江 杭州 310008

茶樹GGPS基因家族的克隆、生物信息學和表達分析

方潔，李春芳，馬春雷，陳亮*

中國農(nóng)業(yè)科學院茶葉研究所國家茶樹改良中心，農(nóng)業(yè)部茶樹生物學與資源利用重點實驗室，浙江 杭州 310008

牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合酶（Geranylgeranyl diphosphate synthase, GGPS）是萜類合成途徑的結(jié)構(gòu)酶，對植物生長發(fā)育具有重要意義。本研究通過RACE和RT-PCR方法克隆得到5條潛在的茶樹GGPS序列，分別命名為 CsGGPS1-4和 CsGGPS9，其中 CsGGPS9存在 3條等位基因，分別是 CsGGPS9-1、CsGGPS9-2和CsGGPS9-3，在系統(tǒng)進化樹上與其他基因分成兩支。蛋白質(zhì)序列分析表明，茶樹 GGPS家族成員都具有polyprenyl_synt結(jié)構(gòu)域，不存在信號肽序列。亞細胞定位預測結(jié)果顯示，CsGGPS1、CsGGPS2和 CsGGPS4定位在葉綠體上，CsGGPS3和CsGGPS9定位在線粒體上。通過Swiss Model進行三維建模，結(jié)合“three-floor”模型對茶樹 GGPS家族成員的功能進行預測，預測結(jié)果顯示，CsGGPS1、CsGGPS2和 CsGGPS4是 GGPS；CsGGPS3是異源二聚體形式的牻牛兒基焦磷酸合酶的小亞基；CsGGPS9的催化主產(chǎn)物是碳鏈數(shù)大于 30的異戊烯基焦磷酸。qRT-PCR分析表明，CsGGPS1整體表達豐度較低，僅在一芽二葉中表達量稍高；CsGGPS2在茶樹各個組織中均有表達，在花中表達量最高，且花發(fā)育過程中表達量先上升后下降；CsGGPS3在葉和幼根中的表達量高于花，花發(fā)育過程中表達平穩(wěn)；CsGGPS4在茶樹各個組織中表達量數(shù)值相近，在花發(fā)育過程中表達量變化趨勢與CsGGPS2相同；CsGGPS9的表達量在成熟葉中顯著低于幼嫩葉片。

茶樹；牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合酶；三維結(jié)構(gòu)模型；表達分析

牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸合酶（Geranylgeranyl diphosphate synthase，GGPS）是萜類合成途徑的結(jié)構(gòu)酶，它催化烯丙基底物﹝二甲基烯丙基焦磷酸（Dimethylallyl diphosphate，DMAPP，C5）、牻牛兒基焦磷酸（Geranyl diphosphate，GPP，C10）或法尼基焦磷酸（Farnesyl diphosphate，F(xiàn)PP，C15）﹞與活性元件異戊烯基焦磷酸（Isopentenyl diphosphate，IPP，C5）聚合形成萜類合成前體牻牛兒基牻牛兒基焦磷酸（Geranylgeranyl diphosphate，GGPP，C20）。GGPP進一步在萜類合成下游酶的作用下合成雙萜（赤霉素、葉綠醇）、四萜（類胡蘿卜素）及多萜化合物。GGPS是異戊烯基焦磷酸合酶基因家族的成員，在植物中以基因家族的形式存在。擬南芥（Arabidopsis thaliana）基因組中存在12個預測為GGPS的基因，是GGPS家族成員數(shù)目最多的植物。其中，AtGGPS1-4和AtGGPS11經(jīng)實驗驗證是真正的GGPS，AtGGPS5為假基因，AtGGPS6、AtGGPS7、AtGGPS9、AtGGPS10為牻牛兒基法 尼 基 焦 磷 酸 合 酶 （ Geranylfarnesyl diphosphate synthase，GFPS）基因，AtGGPS8為聚異戊二烯焦磷酸合酶（Polyprenyl diphosphate synthase，PPPS）基因，AtGGPS12為異源二聚體形式的牻牛兒基焦磷酸合酶的小亞基（Small subunit of geranyl diphosphate synthase，GPS.SSU）基因[1]。為解釋 GGPS家族的產(chǎn)物鏈長決定機制，Wang等[1]結(jié)合前人研究成果和擬南芥中酶產(chǎn)物鏈長不同的GGPS家族成員的晶體結(jié)構(gòu)分析結(jié)果提出了“three-floor”模型。在茶樹（Camellia sinensis）中 GGPS的研究不多，有報道它參與茉莉酸甲酯（Methyl jasmonate，MeJA）和紫外線B（Ultraviolet-B，UV-B）處理的響應過程和葉片 白化過 程[2-4]。茶樹中 GGPP 導向（GGPP-derived）的萜類化合物對成品茶的品質(zhì)具有重要影響。茶葉中類胡蘿卜素在加工過程中轉(zhuǎn)化為紫羅酮，是茶香氣的重要組成部分[5]，葉綠醇作為葉綠素的組分，是綠茶干茶色澤的呈色物質(zhì)。

本研究通過RACE和RT-PCR方法得到了5條潛在的茶樹GGPS序列及其中1條的3條等位基因序列，采用生物信息學方法分析了茶樹 GGPS家族的氨基酸序列并預測了其亞細胞定位，利用模擬的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)和“three-floor”模型預測了蛋白的功能，同時研究了茶樹 GGPS在不同組織部位的表達模式，為全面解析茶樹GGPS家族成員的生化和生理功能奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

于國家種質(zhì)杭州茶樹圃采集龍井43的一芽二葉（包含芽、第一葉、第二葉等各部分）、成熟葉、幼根、花蕾、半開花和全開花等組織器官。從3株茶樹取樣作為3個生物學重復，1個樣品在每株茶樹上取5小份混合，取樣后隨即放入液氮，然后置于－80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 RACE克隆和基因全長克隆

從轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選出注釋為 GGPS的EST序列，根據(jù) Uniprot網(wǎng)站上 Blast結(jié)果將其分為ORF完整和不完整的序列。對ORF不完整的EST序列設計特異引物（表1）。采用康為全能型植物RNA試劑盒提取龍井43一芽二葉總RNA，利用Clontech SMARTer RACE cDNA Amplification Kit采取巢式PCR的方式對 ORF不完整的序列進行擴增。將擴增序列與已獲得的 EST序列進行拼接，獲得具有完整ORF的基因序列。

表1 RACE PCR引物Table 1 Primer sequences for RACE PCR

表2 基因全長克隆引物和熒光定量PCR引物Table 2 Primer sequences for cloning GGPS gene family in tea plant and qRT-PCR analysis

采用 PrimeScriptⅡ1st strand cDNA Synthesis Kit合成 cDNA。根據(jù)基因序列查找ORF并設計引物驗證基因全長（表2）。基因全長克隆反應體系為：Premix PrimeSTAR? HS DNA Polymerase 25 μL、cDNA 1 μL、上下游引物（10 μmol L–1）各1 μL，加水至終體積50 μL。反應程序：94℃預變性3 min；94℃變性45 s，55℃退火55 s，72℃延伸2 min，30個循環(huán)；72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物使用1.2%的瓊脂凝膠進行電泳，回收目的基因條帶（Axygene AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒），將回收產(chǎn)物連接到T載體上（Takara pMDTM18-T Vector Cloning Kit），轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5α感受態(tài)細胞（Takara），隨后進行菌落PCR鑒定陽性克隆，委托上海華津公司進行測序。

1.3 生物信息學分析

利用測序所得核苷酸序列，通過NCBI ORF Finder（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ orffinder）在線工具對序列進行ORF查詢，并推導氨基酸序列。在Clustalx 2.0軟件中對多序列比對后，利用MEGA 5.2軟件輸出系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建結(jié)果。利用在線工具ProtParam（http://web.expasy.org/ protparam）、Pfam（http://pfam.xfam.org）、SignalP 4.1（http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP）、TargetP 1.1 server（http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP）等對茶樹GGPS的基本理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、信號肽和亞細胞定位進行預測。利用Swiss Model（https://www.swissmodel.expasy.org）模擬蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)，并結(jié)合“three-floor”模型預測蛋白的功能。

1.4 茶樹GGPS家族的組織表達模式分析

提取龍井43一芽二葉、芽、第一葉、第二葉、成熟葉、幼根、花蕾、半開花和全開花的總 RNA。采用 Takara PrimeScriptTMRT Reagent Kit合成cDNA。實時熒光定量PCR試驗按照Takara SYBRPremix Ex TaqⅡ(Tli RNaseH Plus)試劑盒說明書操作。根據(jù)測序得到的基因序列和內(nèi)參基因GAPDH的序列設計引物，見表2。熒光定量反應體系為：SYBR Premix Ex Taq 10 μL、上下游引物（10 μmol L–1）各0.8 μL、ROX Dye II 0.4 μL、cDNA 2 μL，加水至終體積20 μL。反應程序為：95℃預變性30 s；95℃預變性5 s，60℃退火34 s，40個循環(huán)；溶解曲線1個循環(huán)。每份樣品設置 3個技術(shù)性重復，采用2-ΔΔCT方法分析基因的表達水平，將CsGGPS1在芽中的表達量設為1，計算茶樹GGPS家族成員在茶樹各個組織的相對表達量。利用IBM SPSS Statistics 19軟件在P＜0.01的條件下對數(shù)據(jù)進行顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

表3 茶樹GGPS基因家族克隆和生物信息學分析Table 3 Molecular cloning and bioinformatics analysis of GGPS gene family in tea plant

2.1 茶樹GGPS家族的克隆

用Nanodrop 2000和凝膠電泳檢測提取的龍井43一芽二葉RNA的質(zhì)量，結(jié)果顯示RNA純度和完整性符合要求。將RACE克隆得到的序列與EST序列拼接，得到ORF完整的基因序列。以反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，利用ORF引物擴增得到目的基因片段，測序驗證茶樹GGPS家族的ORF長度和編碼氨基酸數(shù)等信息見表 3。茶樹GGPS家族成員的 ORF長度為 936～1 293 bp，編碼氨基酸個數(shù)為311～430，與擬南芥中同源基因的序列相似性為39%～78%，覆蓋度為68%～95%。

2.2 茶樹GGPS家族的生物信息學分析

利用MAGE5.2軟件以最大似然法對茶樹GGPS家族成員和擬南芥GGPS家族成員的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1），除CsGGPS9外茶樹中其他 GGPS成員與擬南芥中 GGPS家族成員聚成一支，推測CsGGPS9可能具有與其他成員不同的功能。在聚成一支的茶樹GGPS中，CsGGPS1和CsGGPS2與AtGGPS7序列相似性最高，CsGGPS3和 CsGGPS4與AtGGPS6和AtGGPS10的序列相似性最高，在功能上可能有相似之處。然而擬南芥中功能相同的 GGPS并不都聚在一起，所以茶樹GGPS家族成員的功能還需進一步分析。

圖1 茶樹GGPS與擬南芥GGPS家族的系統(tǒng)發(fā)育分析Fig. 1 The phylogenetic assay of the amino acid sequences of GGPS family in tea plant andArabidopsis thaliana

圖2 茶樹GGPS家族的三維結(jié)構(gòu)模型Fig. 2 3D structure models of GGPS family in tea plant

如表3所示，蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析表明，茶樹GGPS家族成員的分子量在34.2～47.2 kD，理論等電點為5.59～7.14；CsGGPS2、CsGGPS3和CsGGPS4不穩(wěn)定指數(shù)略高，表明蛋白是不穩(wěn)定的，其余蛋白是穩(wěn)定的；CsGGPS1和CsGGPS9-2平均疏水性為正值，為疏水性蛋白，其余為親水性蛋白。蛋白結(jié)構(gòu)域預測結(jié)果顯示，茶樹GGPS都具有異戊烯基焦磷酸合酶家族的特征結(jié)構(gòu)域——polyprenyl_synt結(jié)構(gòu)域。除CsGGPS3外，茶樹GGPS序列中都含有兩個富含天冬氨酸的保守區(qū)域 DDx2-4D（The fi rst aspartate rich motif，F(xiàn)ARM，x可以是任意氨基酸）和 DDxxD（The second aspartate rich motif，SARM）。茶樹GGPS不存在信號肽序列，為非分泌蛋白。亞細胞定位預測結(jié)果表示，CsGGPS1、CsGGPS2和CsGGPS4定位于葉綠體，而 CsGGPS3和CsGGPS9定位于線粒體。結(jié)合 Blast結(jié)果和CsGGPS3的氨基酸序列分析結(jié)果推測其為構(gòu)成異源二聚體形式的 GPS的小亞基。CsGGPS2和CsGGPS4存在對異源GPS大小亞基互作必不可少的富半胱氨酸模體 CXXXC（Cysteine rich motif，CRM，x可以是丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸或絲氨酸），均定位在質(zhì)體上，可能是構(gòu)成異源二聚體形式的 GPS的大亞基。對蛋白三維模型的分析發(fā)現(xiàn)茶樹 GGPS家族成員的主體由 α螺旋構(gòu)成（圖 2）。同茶樹中其他成員一樣，CsGGPS3含有10個α螺旋，由于GPS.SSU單獨無生化功能，不對其催化功能進行預測。從碳鏈的疊加圖中可以看出 CsGGPS1、CsGGPS2和CsGGPS4的主體結(jié)構(gòu)非常相似，而CsGGPS9與它們大體結(jié)構(gòu)相似。根據(jù)“three-floor”模型，α螺旋D、E和F構(gòu)成的空穴是GGPS結(jié)合烯丙基底物的反應穴，反應穴內(nèi)三層 floor位點上的氨基酸側(cè)鏈大小決定產(chǎn)物的鏈長[1]。CsGGPS1、CsGGPS2、CsGGPS4和CsGGPS9在三層 floor位點對應的氨基酸見表 4。由于CsGGPS1、CsGGPS2和CsGGPS4在floor1位點存在1個側(cè)鏈較大的氨基酸Met，故推測其主產(chǎn)物為GGPP，而CsGGPS9在各層floor位點中均不存在側(cè)鏈較大的氨基酸，推測其主產(chǎn)物是碳鏈長度大于30的異戊烯基焦磷酸。2.3 茶樹GGPS家族的組織表達模式分析

茶樹GGPS家族在一芽二葉、成熟葉、幼根和花等組織部位中表達情況顯示（圖3），茶樹GGPS家族成員在各個組織部位中都有表達，表達豐度存在差異。CsGGPS1表達量較低，僅在一芽二葉中表達量稍高；CsGGPS2表達量較高，在花中表達量明顯高于其他組織，在花發(fā)育過程中表達量先增加后減少；CsGGPS3在葉片和幼根中的表達量高于花，在花發(fā)育過程中表達較平穩(wěn)；CsGGPS4在茶樹各組織部位表達量相近，在花發(fā)育過程中的表達量變化趨勢與CsGGPS2相同；CsGGPS9在幼嫩葉片中的表達量顯著高于成熟葉片，而在新梢中芽、第一葉和第二葉的表達量依次升高（圖4）。

表4 CsGGPS1、CsGGPS2、CsGGPS4和CsGGPS9在三層floor位點對應的氨基酸Table 4 The amino acids in the site of three floors of CsGGPS1, CsGGPS2, CsGGPS4 and CsGGPS9

3 討論

圖3 CsGGPS家族成員在茶樹不同組織中的表達Fig. 3 The expression of CsGGPS gene family in different tissues

圖4 CsGGPS9在茶樹葉片不同發(fā)育階段的表達情況Fig. 4 The expression ofCsGGPS9in tea leaves of different developmental stages

GGPS利用烯丙基底物和IPP合成GGPP，隨后 GGPP可作為植物初生代謝和次生代謝的底物參與合成萜類化合物。GGPP導向的萜類化合物雖然在植物中含量較低，但是它們廣泛參與到植物的生長發(fā)育過程中。例如赤霉素對植物生長的調(diào)節(jié)作用，葉綠醇和類胡蘿卜素對植物的光合作用至關重要。部分GGPS還可與GPS.SSU結(jié)合，調(diào)節(jié)代謝流從GGPP導向的化合物轉(zhuǎn)向 GPP導向的化合物，如揮發(fā)性單萜，進而影響茶樹病蟲害防御，花發(fā)育過程和成品茶的香氣。用MeJA和UV-B處理茶樹后，GGPS表達上調(diào)，說明它可能參與到茶樹抵御脅迫的過程中[2-3]。目前GGPS在茶樹中的研究十分有限，僅有 1條基因序列（GenBank：KU892076.1）和部分表達數(shù)據(jù)。本研究克隆得到了5條潛在的CsGGPS家族序列，為全面解析茶樹GGPS基因家族的工作奠定了基礎，同時綜合生物信息學、組織表達模式分析數(shù)據(jù)和最新的產(chǎn)物鏈長決定模型對其生化功能進行了預測，對接下來的功能驗證工作具有指導意義。

本研究分析茶樹 GGPS家族成員的氨基酸序列時發(fā)現(xiàn)除屬于 GPS.SSU的 CsGGPS3外，各成員都具有兩個保守的富天冬氨酸模體FARM和SARM。Tarshis等[6]利用鳥類法尼基焦磷酸合酶的晶體結(jié)構(gòu)推測異戊烯基焦磷酸合酶利用 FARM結(jié)合烯丙基底物，而 IPP則是與 SARM結(jié)合。這種觀點隨后流行了很多年，直到帶有配合基的異戊烯基焦磷酸合酶的晶體結(jié)構(gòu)被解析出來，研究人員才明確兩個ARM通過3個鎂離子形成的鎂橋與烯丙基底物結(jié)合，影響產(chǎn)物鏈長[7-8]。Wallrapp等[9]研究發(fā)現(xiàn)GGPS蛋白三維結(jié)構(gòu)中α螺旋D、E、F構(gòu)成的反應穴是酶結(jié)合烯丙基底物的部位，構(gòu)成反應穴的螺旋上的氨基酸側(cè)鏈殘基會影響產(chǎn)物的鏈長。在前人提出的“one-floor”和“two-floor”模型的基礎上，Wang等[1]提出了“three-floor”模型。本研究結(jié)合這一模型和 Blast結(jié)果對除 CsGGPS3外的茶樹GGPS家族成員的催化功能進行預測，預測結(jié)果顯示，CsGGPS1、CsGGPS2和CsGGPS4由于在floor 1的位點存在側(cè)鏈殘基較大的氨基酸Met，因此催化主產(chǎn)物為 GGPP，是真正的GGPS；而CsGGPS9在三層floor位點的氨基酸的側(cè)鏈都較小，主產(chǎn)物是碳鏈數(shù)大于30的異戊烯基焦磷酸，結(jié)合Blast結(jié)果推測其可能是茄尼基焦磷酸合酶（Solanesyl diphosphate synthase，SPS）。SPS的催化產(chǎn)物茄尼基焦磷酸（Solanesyl diphosphate，SPP，C45）是泛醌類中間產(chǎn)物茄尼醇的合成前體[10]。

GGPS的生理生化功能與其組織表達特性和亞細胞定位密切相關。在番茄中，花和果中特異表達的GGPS參與類胡蘿卜素的合成，葉片中特異表達的 GGPS參與蟲害誘導揮發(fā)物(E,E)-4,8,12-三甲基-1,3,7,11-十三碳四烯(TMTT)的合成[11-12]。擬南芥中，定位于線粒體的GGPS1利用GPP合成赤霉素[13]，定位于質(zhì)體的GGPS11是光合作用的核心，其合成的GGPP被大量用于合成葉綠醇、類胡蘿卜素等化合物[14]。本研究推測CsGGPS1、CsGGPS2和CsGGPS4的催化功能相同，但在茶樹各個組織部位的表達豐度存在差異。CsGGPS1的表達量較低，它可能參與了一些特別的代謝過程；CsGGPS2的表達量較高，推測它參與到一些初生代謝的過程中；CsGGPS4表達量在茶樹各個組織中數(shù)值接近，可能參與一些基本的代謝過程。植物中 GPS.SSU單獨無生化功能，它通過與GGPS單體結(jié)合，形成異源二聚體形式的GPS，調(diào)節(jié)植物體內(nèi)代謝流由GGPP導向的化合物轉(zhuǎn)為 GPP導向的化合物[15]。CsGGPS3在茶樹各個組織中均有表達，在花發(fā)育過程中表達平穩(wěn)，它編碼的蛋白存在CRM，但不含ARM，結(jié)合Blast結(jié)果推測其為GPS.SSU，參與GPP導向的化合物的合成。CsGGPS2存在富半胱氨酸模體，定位于葉綠體，基因在茶樹的各個組織部位中均廣泛表達，尤其在花發(fā)育過程中大量表達，與擬南芥中能與GGPS12互作的GGPS11的結(jié)構(gòu)特征、亞細胞定位和基因表達模式相符，推測可能是與GPS.SSU互作的GGPS，參與GPP導向的化合物的合成，如茶樹花中的揮發(fā)性單萜。CsGGPS4的結(jié)構(gòu)特征、亞細胞定位及基因在花發(fā)育過程中表達量變化趨勢與CsGGPS2的相同，但其基因表達量在茶樹各個組織中數(shù)值接近，推測它不參與 GPP導向的化合物的合成。CsGGPS9在成熟葉中的表達量顯著低于幼嫩葉片，而在新梢中芽、第一葉和第二葉的表達量依次增加。CsGGPS9的催化主產(chǎn)物推測為茄尼基焦磷酸，可能參與葉片中電子傳遞鏈組分質(zhì)體醌和泛醌的合成。目前茶樹GGPS家族的研究還很淺顯，其各個成員的催化功能、在茶樹生長發(fā)育和抵御脅迫中發(fā)揮的具體作用以及調(diào)控方式還需進一步探究。

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Molecular Cloning, Bioinformatics and Expression Analysis of GGPS Gene Family in Tea Plant

FANG Jie, LI Chunfang, MA Chunlei, CHEN Liang*

Tea Research Institute of the Chinese Academy of Agricultural Sciences, National Center for Tea Improvement/Key Laboratory of Tea Biology and Resources Utilization, Ministry of Agriculture, Hangzhou 310008, China

Geranylgeranyl diphosphate synthase (GGPS) is a constitutive enzyme in the terpenoid biosynthesis pathway and plays an important role in plant growth. Five putative gene sequences of GGPS were cloned by RACE and RT-RCR, and named as CsGGPS1-4 and CsGGPS9, respectively. Three allelic variants (CsGGPS9-1, CsGGPS9-2 and CsGGPS9-3) were detected for CsGGPS9, and phylogenetic analysis indicated CsGGPS9 was different from the others. Protein sequence analysis revealed that all CsGGPSs had a conserved polyprenyl_synt domain but no N-terminal signal peptide. Subcellular location predication showed that CsGGPS1, CsGGPS2 and CsGGPS4 might be located in chloroplast while CsGGPS2 and CsGGPS4 might be located in mitochondria. The 3D model of CsGGPSs were predicted by Swiss Model and combined with the ‘three floor’ model indicated that CsGGPS1, CsGGPS2 and CsGGPS4 were bona fide GGPS. CsGGPS3 was the small subunit of heterodimer GPS. Although CsGGPS9 shared a similar structure with the others, the main product of it could be isopentenyl pyrophosphatewith chain length longer than 30. The qRT-PCR analysis showed that CsGGPS1 had low expression levels in all tissues except the ‘two and a bud’. By contrast, CsGGPS2 was highly expressed in all tissues with the highest levels in flowers, where in the expression levels increased first and then decreased during flower blooming. CsGGPS3 exhibited higher expression levels in the leaves and tender root than the flower. The expression levels of CsGGPS4 were similar in different tissues, with the same pattern as CsGGPS2 during flower blooming. CsGGPS9 was significantly higher expressed in the young leaves than the mature leaves.

tea plant (Camellia sinensis), geranylgeranyl diphosphate synthase, 3D structure model, expression analysis

S571.1；Q52

A

1000-369X（2017）02-130-09

2016-09-14

2016-10-28

國家茶葉產(chǎn)業(yè)技術(shù)項目（CARS-023）、中國農(nóng)業(yè)科學院科技創(chuàng)新工程（CAAS-ASTIP-2014-TRICAAS）

方潔，女，碩士研究生，主要從事茶樹資源育種研究。*通訊作者：liangchen@tricass.com