晏曉清，曹 丹，張艷芳，何新安，李玉強(qiáng)

黃岡大別山檢測(cè)認(rèn)證有限公司

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定植物油中BaP、BHT、BHA、TBHQ的含量

晏曉清，曹 丹，張艷芳，何新安，李玉強(qiáng)

黃岡大別山檢測(cè)認(rèn)證有限公司

建立同時(shí)測(cè)定植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的固相萃取-高效液相色譜分析方法。樣品溶解后固相萃取凈化，C18色譜柱分離，甲醇和水為等度洗脫，DAD檢測(cè)。最佳條件下，方法的回收率為80.0%～110.0%。該方法所用設(shè)備耗材常見，操作簡(jiǎn)單、成本低，可用于植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ的測(cè)定。

固相萃??；反相高效液相色譜；植物油

BHA（叔丁基羥基茴香醚）、BHT（二叔丁基羥基甲苯）、TB?HQ（特丁基對(duì)苯二酚）是我國(guó)允許在食品中使用的3種常見抗氧化劑,可中斷油脂氧化過(guò)程,達(dá)到抗氧化、防酸敗、防變色的目的。過(guò)量攝入會(huì)對(duì)人體的肝、脾、肺等器官產(chǎn)生不利影響。苯并（a）芘（BaP）是油脂生產(chǎn)工藝的副產(chǎn)物，其在人體內(nèi)的代謝物二羥環(huán)氧苯并芘是直接的強(qiáng)致癌物。

HPLC測(cè)定植物油中BHA、BHT、TBHQ、BaP的方法很多，但大部分都是將抗氧化劑、BaP分開檢測(cè)。四種物質(zhì)一起分析的，近年來(lái)也有報(bào)道。前處理用到昂貴的凝膠滲透色譜，成本較高。

本實(shí)驗(yàn)擬采用固相萃取法對(duì)樣品進(jìn)行凈化，HPLC法對(duì)植物油中的BaP、BHA、BHT、TBHQ同時(shí)測(cè)定，以建立一種操作簡(jiǎn)單、快速、成本低廉的植物油中BaP、BHA、BHT、TBHQ同時(shí)測(cè)定的分析方法。

1、材料與方法

1.1 主要儀器和試劑：

Agilent 1200液相色譜儀（DAD），固相萃取小柱ProElut ALN22g/60mL，超聲波震蕩器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；固相萃取儀。

BaP（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，100mg/L）、BHA（純度97.0%）、BHT（純度99.5%）、TBHQ（純度99.0%），乙腈、正己烷、甲醇、乙酸乙酯均為色譜純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱SpursilTM C18，5μm，250×4.6mm；流動(dòng)相甲醇：水=95：5，柱溫30℃；進(jìn)樣量10μL；波長(zhǎng)230nm。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

分別準(zhǔn)確稱取500.0mgBHA、BHT、TBHQ于100mL容量瓶中,甲醇溶解、定容為5.0mg/mL的儲(chǔ)備液，4℃保存。各取四種單一儲(chǔ)備液混合，甲醇稀釋至50mL配置成混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，濃度為：BHA、BHT、TBHQ5.00mg/L,BaP 2.00 mg/L。

1.2.3 樣品處理

提取：用玻璃燒杯稱取0.4g試樣（精確到1mg），用5mL正己烷溶解稀釋，待凈化。

凈化：30mL正己烷活化小柱后，上樣，50mL（乙腈：正己烷1: 1）混合溶劑洗脫（分層不影響結(jié)果），收集淋洗液，濃縮后定容至1mL,過(guò)濾膜后待測(cè)。

2、結(jié)果與分析

2.1 淋洗液的選擇

先后嘗試用正己烷和乙酸乙酯、正己烷和甲醇、正己烷和乙腈分別按照1:1、1:2、1:3、1:4的比例混合作為淋洗液，經(jīng)方法分析后回收率見表1（未在表中列出者回收率過(guò)低）。最終選取乙腈：正己烷1:1為淋洗液。

表1 BHA、BHT、TBHQ、BaP的回收率

2.2 色譜條件的選擇

當(dāng)采用流動(dòng)相甲醇-水（97:3）洗脫時(shí)，TBHQ與BHA部分重疊；甲醇-水90:10時(shí)，TBHQ與BHA完全層疊。甲醇-水95:5，兩者可完全分開，如圖1。

圖1 4種目標(biāo)化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC色譜圖

3、結(jié)論

建立了固相萃取凈化，HPLC-DAD同時(shí)檢測(cè)植物油中BaP和3種抗氧化劑（BHA、BHT、TBHQ）的方法。樣品經(jīng)溶解、固相萃取凈化，HPLC等度洗脫，HPLC-DAD同時(shí)分析出植物油中四種化學(xué)物質(zhì)含量。所用設(shè)備耗材常見，且操作簡(jiǎn)單、成本低，利于應(yīng)用推廣。