胡桂梅 葉國(guó)良 秦麗君

Stathmin和p27在胃癌演變過(guò)程中的表達(dá)變化及與Hp感染的關(guān)系

胡桂梅 葉國(guó)良 秦麗君

目的 觀察Stathmin和p27在胃癌演變過(guò)程中的表達(dá)變化，探討其與幽門(mén)螺桿菌（Hp）的關(guān)系。方法 選取本院胃癌手術(shù)標(biāo)本90例，胃鏡活檢標(biāo)本160例及同期行內(nèi)鏡下黏膜剝離術(shù)后病理證實(shí)為早期胃癌標(biāo)本56例，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)慢性胃炎黏膜（n=80）、上皮內(nèi)瘤變（n=80）、早期胃癌（n=56）和進(jìn)展期胃癌（n=90）組織中Stathmin和p27蛋白的表達(dá)水平。用14C呼氣試驗(yàn)和組織學(xué)改良Giemsa染色方法聯(lián)合檢測(cè)胃癌中Hp感染情況，分析Stathmin、p27與Hp感染的關(guān)系。結(jié)果 與胃炎組和上皮內(nèi)瘤變組相比，進(jìn)展期胃癌組Stathmin和p27的表達(dá)水平差異均存有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。在上皮內(nèi)瘤變組與胃炎組Stathmin表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而p27表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同胃癌分化類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、TNM分期及淋巴轉(zhuǎn)移與否者Stathmin和p27的表達(dá)水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。Hp感染者Stathmin蛋白表達(dá)增多，p27蛋白表達(dá)下降，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05)。結(jié)論 p27聯(lián)合Stathmin蛋白測(cè)定可以早期預(yù)測(cè)胃癌發(fā)生，更可以作為反映胃癌良惡性表型及預(yù)后的重要指標(biāo)。

胃癌 上皮內(nèi)瘤變 Stathmin p27 幽門(mén)螺桿菌

胃癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)生及演變進(jìn)展機(jī)制復(fù)雜。Stathmin是一種高度保守的胞質(zhì)磷酸蛋白，有改變細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)行為[1]。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)在多種腫瘤中Stathmin均有高水平表達(dá)，抑制其表達(dá)可以干擾惡性細(xì)胞的增殖[2]。p27是一種抑癌基因,在多種腫瘤包括胃癌中均發(fā)現(xiàn)該蛋白表達(dá)水平下降[3]。研究發(fā)現(xiàn),Stathmin和p27兩者相互作用，Stathmin能調(diào)節(jié)p27的細(xì)胞遷移作用[4]。本文探討Stathmin和p27在胃癌演變過(guò)程中的表達(dá)變化及其與幽門(mén)螺桿菌（Hp）感染的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取我院2011年6月至2014年6月胃癌手術(shù)標(biāo)本90例（進(jìn)展期胃癌組），患者中男58例，女32例，年齡37～78（59.7±9.4）歲。胃癌分期采用1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟制定的TNM分期法。所有胃癌病例均經(jīng)病理證實(shí),并附有完整的臨床病理資料，根據(jù)病理結(jié)果分為兩組，分別為高、中分化組50例，低、未分化組40例，患者術(shù)前均未接受化療或放療。選取同期胃鏡活檢標(biāo)本共160例，患者中男98例，女62例，年齡16～85（57.1±11.0）歲；慢性胃炎80例（慢性胃炎組），上皮內(nèi)瘤變80例（上皮內(nèi)瘤變組）。同年在我院行內(nèi)鏡下黏膜剝離（ESD）術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為早期胃癌標(biāo)本56例（早期胃癌組），患者中男38例，女18例，年齡35～72（58.9±8.6）歲。

1.2 試劑和方法 Stathmin單克隆抗體購(gòu)自德國(guó)ABD Serotec公司，p27單克隆抗體、SP試劑盒和DAB染色劑均購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。常規(guī)免疫組織化學(xué)SP法（具體步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行），DAB顯色，分別用已知的陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作陰性對(duì)照。Stathmin蛋白染色主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，p27染色主要定位于細(xì)胞核上，采用簡(jiǎn)單隨機(jī)化方法選擇10個(gè)高倍（×400）視野，根據(jù)染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率＜10%，1分；10%～50%，2分；＞50%，3分。腫瘤顯色深淺按基本不著色，0分；色淡，1分；色中，2分；色深，3分。計(jì)算兩者乘積，以得0分或1分為陰性，得2分、3分或4分為陽(yáng)性（＋），≥6分為強(qiáng)陽(yáng)性（＋＋）。所有切片均由2位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師經(jīng)仔細(xì)閱片2次，確保結(jié)果的可重復(fù)性。

1.3 Hp檢查 采用14C呼氣試驗(yàn)和組織學(xué)改良Giemsa染色方法聯(lián)合檢測(cè)Hp，兩項(xiàng)檢查結(jié)果均為陽(yáng)性者判定為Hp陽(yáng)性,全部為陰性者判定為Hp陰性,剔除兩種檢測(cè)方法結(jié)果不一致的病例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用校正χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Stathmin在各組中表達(dá)的陽(yáng)性率比較 見(jiàn)表1、圖1。

表1 Stathmin在各組中表達(dá)的陽(yáng)性率比較[例（%）]

圖1 Stathmin在各組中表達(dá)情況（a：慢性胃炎組Stathmin呈陰性表達(dá)；b：上皮內(nèi)瘤變組Stathmin呈陽(yáng)性表達(dá)；c：胃癌組Stathmin呈陰性表達(dá)；d：胃癌組Stathmin呈陽(yáng)性表達(dá)；免疫組化染色，×200）

由表1可見(jiàn)，進(jìn)展期胃癌組Stathmin的表達(dá)情況與慢性胃炎組、上皮內(nèi)瘤變組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=61.232、15.359，均P＜0.01），與早期胃癌組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.241，P＞0.05）。上皮內(nèi)瘤變組與胃炎組、早期胃癌組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 20.401、8.827，均P＜0.01）。

2.2 p27在各組中表達(dá)的陽(yáng)性率比較 見(jiàn)表2、圖2。

圖2 p27在各組中表達(dá)情況（a：慢性胃炎組p27呈陽(yáng)性表達(dá)；b：上皮內(nèi)瘤變組p27呈陽(yáng)性表達(dá)；c：胃癌組p27呈陰性表達(dá)；d：胃癌組p27呈陽(yáng)性表達(dá)；免疫組化染色，×100）

表2 p27在各組中表達(dá)的陽(yáng)性率比較[例（%）]

由表2可見(jiàn)，p27在慢性胃炎組、上皮內(nèi)瘤變組中的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.410，P＞0.05），與慢性胃炎組、上皮內(nèi)瘤變組相比，p27在進(jìn)展期胃癌組中的表達(dá)水平降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 47.985、33.632，均P＜0.05），但與早期胃癌組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.095，P＞0.05）。

2.3 Stathmin的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表3。

表3 Stathmin的表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

由表3可見(jiàn)，不同性別、年齡胃癌患者中Stathmin陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），在分化類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期方面陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），Hp感染者Stathmin陽(yáng)性率高于未感染者（P＜0.05）。

2.4 p27表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 見(jiàn)表4。

表4 p27表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

由表4可見(jiàn)，不同性別、年齡胃癌患者中p27陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），在分化類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期方面陽(yáng)性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），Hp感染者p27陰性率高于未感染者（P＜0.05）。

3 討論

胃癌是世界上最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，全球癌癥發(fā)病率位列第4位，病死率居癌癥死因的第2位[5]。胃癌的發(fā)生并不是單一因素引起的，是多種因素共同作用的結(jié)果，不僅與癌基因的激活和抑癌基因的失活有關(guān)，還與細(xì)胞的增殖基因作用密切相關(guān)。Stathmin是一種主要的微管不穩(wěn)定蛋白，通過(guò)調(diào)節(jié)微管系統(tǒng)的動(dòng)力學(xué)平衡，控制細(xì)胞周期，并以此改變細(xì)胞的增殖、分化、活性等生物學(xué)行為，其表達(dá)情況與腫瘤細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移有關(guān)[6]。Jeon等[7]對(duì)226例彌漫型胃癌研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin表達(dá)與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期、脈管浸潤(rùn)及腫瘤復(fù)發(fā)均呈正比，認(rèn)為Stathmin的表達(dá)可作為評(píng)估胃癌預(yù)后的指標(biāo)和胃癌治療靶向基因。本研究結(jié)果顯示，Stathmin在胃癌中表達(dá)陽(yáng)性率高，多呈陽(yáng)性或強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，與上皮內(nèi)瘤變組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；其表達(dá)強(qiáng)度在腫瘤分化類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理參數(shù)中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，Stathmin的表達(dá)可預(yù)測(cè)胃癌發(fā)生可能，其高表達(dá)在胃癌的預(yù)后及發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮了重要作用。

p27作為細(xì)胞周期負(fù)性調(diào)節(jié)因子，具有阻止細(xì)胞通過(guò)G1/S期轉(zhuǎn)換的“關(guān)卡”作用，從而抑制細(xì)胞增殖導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[8]。國(guó)外Aoyagi等[9]對(duì)75例胃癌研究中發(fā)現(xiàn)p27陰性者的淋巴轉(zhuǎn)移率明顯高于p27陽(yáng)性者，p27陽(yáng)性者的病變侵犯漿膜率明顯低于p27陰性者，p27陰性者的平均增殖細(xì)胞核抗原指數(shù)明顯高于p27陽(yáng)性者，p27陽(yáng)性者的生存指數(shù)明顯高于p27陰性者。本研究結(jié)果顯示，p27在胃炎及上皮內(nèi)瘤變中蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均較高，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而在胃癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率顯著下降；胃癌中p27的表達(dá)強(qiáng)度在腫瘤分化類(lèi)型、浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理參數(shù)中差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在分化差或未分化、漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期晚的胃癌中p27表達(dá)強(qiáng)度降低。因此，認(rèn)為p27的表達(dá)可作為預(yù)測(cè)胃癌預(yù)后的指標(biāo)。

1994年WHO國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)將Hp列為人類(lèi)Ⅰ類(lèi)致癌因子，相關(guān)研究證實(shí)Hp感染是胃癌發(fā)生的最重要危險(xiǎn)因素之一，70%的胃癌發(fā)生與Hp感染有關(guān)[10]。研究認(rèn)為Hp可通過(guò)調(diào)節(jié)G蛋白耦合的阿片受體→抑制p27啟動(dòng)因子的組胺乙?；饔谩鷓27表達(dá)下降[11]；同時(shí)長(zhǎng)期慢性Hp感染可使p27的胞漿錯(cuò)位,使其從抑癌轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗虼偈刮赴┑陌l(fā)生、發(fā)展[12]。Baldassarre等[13]研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin可以直接與p27結(jié)合，抑制Stathmin的表達(dá)和微管解離活性，從而降低肉瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲性，而p27不僅與Stathmin結(jié)合，還可抑制Stathmin活性，促進(jìn)微管穩(wěn)定，使細(xì)胞不遷移；同時(shí)p27也可影響細(xì)胞形態(tài)和活性，其與Stathmin表達(dá)平衡在細(xì)胞骨架和細(xì)胞行為中起決定性作用[14]。最近Watanabe等[15]研究發(fā)現(xiàn)，Stathmin與p27結(jié)合，從而抑制p27功能，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，同時(shí)提高了腫瘤細(xì)胞的抗藥性。本研究發(fā)現(xiàn)，在Hp陽(yáng)性的胃癌中p27表達(dá)明顯下降，而Stathmin表達(dá)明顯增多。我們推測(cè)，Hp感染可能通過(guò)影響p27表達(dá)，從而促使Stathmin的表達(dá)增加。

綜上所述，Stathmin和 p27相互作用，p27聯(lián)合Stathmin測(cè)定能早期預(yù)測(cè)胃癌發(fā)生，甚至作為反映胃癌良、惡性表型及預(yù)后的重要指標(biāo)。

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Changes of stathmin and p27 expression in evolution of gastric cancer and their relation to infection of Helicobacter pylori

HU Guimei,YE Guoliang,QIN Lijun.Department of Gastroenterology,the Affiliated Hospital of Medical School of Ningbo University, Ningbo 315020,China

Objective To study the expression of the stathmin and p27 protein in the gastritis,intraepithelial neoplasia and gastric cancer and their relation to Helicobacter pylori(Hp)infection. Methods Immunohistochemical method were employed to detect stathmin and p27 protein expressions in gastritis,gastric intraepithelial neoplasia and gastric cancer specimen.The 14C-urea breath test and methylene blue method were used to detect Hp infection.The correlation of stathmin and p27 expression with Hp infection was analyzed. Results Compared with gastritis and gastric intraepithelial neoplasia,the expression of the stathmin and p27 in the gastric cancer were significantly increased(P＜0.05).There was significant difference in stathmin expression between gastritis and intraepithelial neoplasia,but no difference in p27 expression between two groups.The expression of the stathmin and p27 protein was correlated with degree of differentiation,depth of invasion,lymph node metastasis,and TNM stage of gastric carcinoma.The expressions of stathmin and p27 were significantly correlated with Hp infection (P＜0.05). Conclusion Stathmin and p27 may be involved in the pathogenesis and progression of gastric cancer,indicating they might be a potential target for screening of early gastric cancer.

Gastric cancer Intraepithelial neoplasia Stathmin p27 H.pylori

2015-10-20）

（本文編輯：馬雯娜）

315020 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科

葉國(guó)良，E-mail:ndfyygl@163.com