?

谷氨酸鈉測定的探討

賴谷氨酸鈉的國家檢測標準為GB/T8967-2007，所采用的方法是價格昂貴的非水滴定法。由于這種非水滴定法系采用冰乙酸為介質、高氯酸作標準滴定液、α-萘酚苯基甲醇作為指示劑，不但價格昂貴具有強烈的腐蝕性，而且終點顏色變化不明顯，影響觀察與終點判定，從而影響檢測結果。筆者根據(jù)長期實踐，探索出用凱氏定氮法及加入甲醛進行滴定的方法來檢測賴氨酸。

原理 凱氏定氮法：L-谷氨酸鈉分子式為C5H18NNaO4?H2O，分子量為187.13。與蛋白質相比，它是一種比較容易被分解而且非常容易溶解的的有機物，在高溫的濃硫酸溶液中，容易定量轉化生成（NH4）2SO4，然后用鹽酸標準溶液進行滴定。

把樣品加入水中，然后加入5%的硫酸銅溶液并加熱蛋白質沉淀出來。然后把它易溶解性賴氨酸通過水溶解進行分離，然后慢性濾紙進行過濾，濾液也同樣硫酸鉀、硫酸鉀、硫酸進行消化，冷卻定容，吸取試液加入濃氫氧化鈉溶液進行蒸餾，冷卻后用硼酸溶液吸收用鹽酸標液進行滴定，從而得出樣品非谷氨酸鈉的含量。

甲醛加入滴定法：從2.1的谷氨酸鈉結構可以看出，由于其氨基酸具有酸堿兩種性質，可以將其溶解之后用氫氧化鈉標準溶液滴定到PH8.2之后加入甲醛以固定氨基，使溶液顯示酸性，用氫氧化鈉標準溶液滴定就可以測定谷氨酸鈉的含量。

凱氏定氮法檢測步驟 谷氨酸鈉檢測步驟：準確稱取試樣0.5g～1g，放人250mL凱氏燒瓶中，放入兩粒玻璃珠，硫酸鉀0.5g硫酸銅0.1g混勻，再加入10mL硫酸于500mL凱氏長頸燒瓶中放入兩粒玻璃珠，輕搖后加入小漏斗，將瓶以45°角放入有通風毒氣櫥并有石棉網的電爐上，小心加熱。等瓶內容物澄清之后加大火力繼續(xù)消化1h，冷卻，分三至四次轉移至250mL容量瓶中，冷卻，搖勻，定容。吸取50mL試液從上面的小玻璃杯于凱氏定氮蒸餾儀反應室，加入15mL 400g/L氫氧化鈉溶液，再用蒸餾水10mL清洗小玻璃杯，用可調節(jié)式電爐進行加熱蒸餾，冷卻液體用裝有20g/L的硼酸吸收液的燒杯溶解吸收，待吸收液體變色后蒸餾5min后使冷卻管尖端再繼續(xù)蒸餾1min，并用蒸餾水清洗冷凝管下端口于，用0.1mol/L的鹽酸標準溶液進行用玻棒攪拌滴定，待吸收液變成暗紅色后為終點，記錄其消耗體積記錄其體積為V2。

3.2 谷氨酸鈉結果計算

式中，X1—樣品中谷氨酸鈉的含量，%； a1—樣品試液的稀釋倍數(shù)；

V1—樣品吸收液消耗鹽酸標液體積，mL； m1—樣品質量，g；

V0—樣品空白消耗鹽酸標液體積，mL； C1—鹽酸標液深度，mol/L。

6.52—氮換算成谷氨酸鈉的系數(shù)；

甲醛加入滴定法檢測步驟 在空調與除濕機控制溫度20±2℃環(huán)境的實驗室里，根據(jù)樣品氨基酸含稱取已經粉碎的樣品5～50g（精確至0.0002g），加水100mL，開動磁力攪拌器攪拌30min之后轉移至250.0mL容量瓶之中，定容至刻度，過濾于燒杯之中等待檢測。

在空調與除濕機控制溫度20±2℃環(huán)境的實驗室里，吸取濾液（4.1）50mL，開動磁力攪拌器，用氫氧化鈉標準溶液［c（NaOH）=0.05mol/L］滴定至酸度計指示pH=8.2記下消耗氫氧化鈉標準滴定溶液（（0.05mol/L）的毫升數(shù)，可計算樣品總酸含量〕。加入10.0mL甲醛溶液，混勻。再用氫氧化鈉標準滴定溶液（0.05mol/L）繼續(xù)滴定至pH=9.2，記下消耗氫氧化鈉標準滴定溶液（0.05mol/ L）的毫升數(shù)V1。同時取80mL水，先用氫氧化鈉溶液（0.05mol/L）調節(jié)pH為8.2，再加入10.0mL甲醛溶液，用氫氧化鈉標準滴定溶液（0.05mol/L）滴定至pH=9.2，同時做試劑空白試驗V0。

式中，X—樣品中氨基酸含量（以氮計），%；

V2—樣品消耗的氫氧化鈉標準溶液的體積，mL；V0—空白消耗的氫氧化鈉標準溶液的體積，mL；

0.014-1.00mL氫氧化鈉標準滴定溶液［c（NaOH）=1.000mol/L］相當于氮的質量，g；

C2—氫氧化鈉標準滴定溶液濃度，mol/L；

6.52—氮換算成谷氨酸鈉的系數(shù)； m1—樣品質量，g。

□ 重慶市永川食品藥品檢驗所趙壯志 陳娜 揭定華 吳修亮 馬力 王震