張玉良

摘 要：文章提出了一種改進(jìn)的蛋白質(zhì)測定方法，包括以下步驟：（1）稱取一定量的樣品，加入到凱氏定氮專用消化管中，加入一定量的濃硫酸，待樣品浸泡0.5小時后，再加入硫酸鉀和硫酸銅，作為催化劑；（2）將裝有樣品的消化管放入消化爐中，逐漸升溫到450℃；（3）待消化液變成綠色澄清后，關(guān)閉消化爐；（4）待反應(yīng)液冷卻至室溫，在凱氏定氮儀上進(jìn)行蒸餾和滴定。文章改進(jìn)了濃硫酸、硫酸銅和硫酸鉀以及40%氫氧化鈉的用量，提高了反應(yīng)速度，減少了反應(yīng)時間，提高大批量生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)效益。

關(guān)鍵詞：蛋白質(zhì)；凱氏定氮；硫酸鉀和硫酸銅

1 技術(shù)背景

蛋白質(zhì)是人體所必需攝入的營養(yǎng)成分，人體必需攝入足夠量的蛋白質(zhì)才能保證正常運(yùn)行。準(zhǔn)確了解各種食物中蛋白質(zhì)含量意義重大。因此，檢測蛋白質(zhì)的含量是需求量較大的檢測業(yè)務(wù)，在大批量檢測中，減少檢測時間是當(dāng)務(wù)之急。而傳統(tǒng)的檢測方法和儀器一次只能檢測少量的樣品，且操作起來步驟繁多，需要技術(shù)人員時刻關(guān)注。易造成結(jié)果偏差。本文對傳統(tǒng)方法和儀器方法進(jìn)行了結(jié)合，通過適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)和調(diào)整，將催化劑硫酸鉀和硫酸銅和濃硫酸加入量改進(jìn)，縮短了檢測時間，減少了試劑用量，適用于大批量生產(chǎn)。

2 試劑

（1）濃硫酸；（2）硫酸銅；（3）硫酸鉀；（4）30%過氧化氫；（5）硼酸；（6）氫氧化鈉；（7）溴甲酚綠指示劑（1g/L溴甲酚綠乙醇溶液）；（8）甲基紅指示劑（1g/L甲基紅乙醇溶液）；（9）混合指示劑：1份甲基紅和5份溴甲酚綠溶液臨用混合；（10）鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度為0.1mol/L。

3 儀器設(shè)備

（1）凱氏定氮儀；（2）消化爐；（3）酸堿滴定管。

4 檢測步驟

（1）稱取0.5-1克樣品于消化管中，加入5克硫酸鉀，0.5克硫酸銅，輕搖消化管至樣品和藥品分布均勻，再量取10ml濃硫酸，觀察反應(yīng)是否劇烈。

（2）待初反應(yīng)不劇烈后，將消化管放入消化爐中，從100℃開始逐漸升溫至450℃。

（3）觀察反應(yīng)液變成綠色澄清后停止加熱，關(guān)閉消化爐。待溫度降至室溫時，向反應(yīng)液中加入2ml過氧化氫溶液，繼續(xù)加熱反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，冷卻。

蒸餾瓶中加入20%硼酸溶液20ml，3滴混合指示液，調(diào)整凱氏定氮儀冷凝管的高度，使冷凝管的下端插入吸收液面以下。提前配備好40%氫氧化鈉溶液，將堿管插入氫氧化鈉溶液中。取下消化管，放在凱氏定氮儀架上，開啟凱氏定氮儀開關(guān)，直至消化液變成黑色，液面離開冷凝管下端，再蒸餾1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部，停止蒸餾。

（4）取下吸收瓶，將吸收液轉(zhuǎn)入150ml容量瓶中，定容。準(zhǔn)確吸取25ml吸收液，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直至顏色由酒紅色變成綠色，pH 5.1。同時作試劑空白。

（5）計算結(jié)果

式中：X-蛋白質(zhì)含量，g/100g；

V1-滴定時消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；

V2-空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；

C-鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L；

f-吸收液稀釋倍數(shù)；

m-試樣的質(zhì)量，g；

0.014-標(biāo)準(zhǔn)滴定液相當(dāng)于氮的質(zhì)量，kg/mol；

F-氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，一般食物為6.25；純?nèi)榕c純?nèi)橹破窞?.38；面粉為5.70；玉米、高粱為6.24；花生為5.46；大米為5.95；大豆及其粗加工制品為5.71；大豆蛋白制品為6.25；肉與肉制品為6.25；大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83；芝麻、向日葵為5.30；復(fù)合配方食品為6.25。

本論文所用試劑的量與傳統(tǒng)國標(biāo)法試劑用量如表1。

從表1 可見，本論文可以節(jié)省大量檢測試劑，從而可以節(jié)約成本，符合企業(yè)經(jīng)濟(jì)效益。

本論文得到的測定結(jié)果與傳統(tǒng)國標(biāo)法得到的測定結(jié)果比較如表2。

從表2可見，改進(jìn)后的方法和傳統(tǒng)方法的結(jié)果誤差在1%之內(nèi)，結(jié)果準(zhǔn)確度高且穩(wěn)定。

5 結(jié)束語

本文對傳統(tǒng)方法和儀器方法進(jìn)行了結(jié)合，通過適當(dāng)?shù)馗倪M(jìn)和調(diào)整，將催化劑硫酸鉀和硫酸銅和濃硫酸加入量改進(jìn)，縮短了檢測時間，減少了試劑用量，適用于大批量生產(chǎn)。改進(jìn)后的測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性比較高。在大批量生產(chǎn)中，本文所述方法在節(jié)省試劑，減少檢測時間，增加準(zhǔn)確度上有較大的優(yōu)勢，可以作為企業(yè)檢測蛋白質(zhì)的可選方案。

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