唐　霜　周　丹　胡志琴　謝　惠

(中山市橫欄醫(yī)院，廣東 中山　528400)

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Chemerin及脂聯(lián)素在妊娠期糖尿病發(fā)病中的研究*

唐霜周丹胡志琴謝惠

(中山市橫欄醫(yī)院，廣東 中山528400)

摘要：目的通過(guò)測(cè)定Chemerin、脂聯(lián)素在正常妊娠婦女、妊娠期糖尿病患者不同孕期血清中的表達(dá)情況，探討Chemerin、脂聯(lián)素與妊娠期糖尿病發(fā)病有無(wú)相關(guān)性。方法選取本院2015年5月至2016年2月產(chǎn)檢的60例孕婦，其中妊娠期糖尿病患者 30例為實(shí)驗(yàn)組，正常妊娠30例為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均測(cè)定空腹Chemerin水平、脂聯(lián)素水平、胰島素水平及血糖水平。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組早孕期空腹Chemerin水平、胰島素抵抗較對(duì)照組明顯升高；中孕期空腹Chemerin水平、胰島素抵抗及血糖水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)；實(shí)驗(yàn)組脂聯(lián)素水平較對(duì)照組明顯減少(P<0.05)。結(jié)論妊娠期糖尿病孕婦較正常孕婦Chemerin水平明顯升高，脂聯(lián)素水平明顯下降，且在血糖有顯著差異之前即有明顯改變，對(duì)提前發(fā)現(xiàn)妊娠期糖尿病有一定臨床意義。

關(guān)鍵詞：妊娠期糖尿病, Chemerin水平,脂聯(lián)素

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是孕期最常見(jiàn)的代謝性疾病之一，其發(fā)病率在逐年上升，已成為危害母兒最常見(jiàn)的疾病之一，嚴(yán)重影響優(yōu)生優(yōu)育。GDM的預(yù)防和早期診治可以避免母兒的不良結(jié)局。目前GDM發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，現(xiàn)有文獻(xiàn)認(rèn)為其存在胰島素抵抗(insulin resistance,IR)和胰島素分泌功能不足，其中IR占主要地位[1]。IR是指一定量胰島素濃度不能影響預(yù)期的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和在靶組織(主要指肌肉、脂肪、肝組織)的生物反應(yīng)，正常妊娠期最主要的代謝變化是對(duì)胰島素抵抗作用增加，以及肝臟、肌肉、脂肪組織對(duì)胰島素敏感性下降，正常妊娠過(guò)程是一種生理性IR狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體不能分泌足夠胰島素來(lái)代償異常加重的IR時(shí)，即發(fā)生GDM。近年來(lái)脂肪細(xì)胞及其分泌因子成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)，其能通過(guò)旁分泌、內(nèi)分泌等途徑，參與胰島素在靶組織中的生物效應(yīng)，認(rèn)為脂肪細(xì)胞因子調(diào)節(jié)功能異常可能參與GDM的發(fā)生發(fā)展[2]。Chemerin與脂聯(lián)素(APN)同為脂肪細(xì)胞因子，與胰島素抵抗、糖代謝關(guān)系密切。國(guó)內(nèi)外大多數(shù)研究都是在GDM確診后再測(cè)定上述因子情況，而關(guān)于GDM診斷之前的各因子是否有變化這方面國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少。本課題通過(guò)了解GDM患者及正常妊娠孕婦不同孕期Chemerin、脂聯(lián)素的表達(dá)情況，探討Chemerin、脂聯(lián)素與GDM的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料選取2015年5月至2016年3月在我院產(chǎn)檢的60例孕婦，均排除心血管疾病、肝腎疾病、內(nèi)分泌及代謝疾病，均為自然受孕、單胎妊娠。其中GDM 30例為實(shí)驗(yàn)組，正常妊娠30例為對(duì)照組。所有病例均簽署知情同意書(shū)，兩組病例年齡、孕周、孕次、孕前體重指數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。門(mén)診產(chǎn)檢時(shí)，常規(guī)預(yù)留孕12～18周、孕24～28周孕婦空腹血清樣本3ml保存于-70 ℃冰箱，記錄身高、體重。隨機(jī)選擇確診GDM患者30例及正常妊娠婦女30例，調(diào)取其孕早期及孕中期血樣進(jìn)行檢測(cè)。

1.2GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)采用最新國(guó)際糖尿病協(xié)會(huì)和妊娠研究組(IADPSG)標(biāo)準(zhǔn)，24～28周進(jìn)行OGTT檢查，口服75g葡萄糖：空腹、1小時(shí)、2小時(shí)血糖分別為5.1，10.0，8.5mmol/L,任何一項(xiàng)結(jié)果大于或等于上述數(shù)值，均診斷GDM。

1.3技術(shù)路線(xiàn)以及工藝流程檢測(cè)方法：采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)法檢測(cè)血清中的Chemerin、脂聯(lián)素。空腹胰島素采用放射免疫分析技術(shù)。采用自動(dòng)生化儀測(cè)定空腹血糖水平。

1.3.1Chemerin、脂聯(lián)素操作步驟(1)包被：用包被液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為0.5～20 μg/ml，按100 μl/孔加入酶標(biāo)板，4℃包被過(guò)夜；(2)洗板：次日棄去孔內(nèi)液體，在紙巾上輕輕扣打以吸去殘留液體，加入洗滌液(約280～300 μl/孔)，漂洗2～3次，每次3～5min；(3)封閉：按200～250 μl/孔加入封閉液，室溫2～3h或37℃1～2h，也可4℃封閉過(guò)夜，然后棄去孔內(nèi)封閉液；(4)樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將待檢樣品(含未知抗原)稀釋至所需濃度；(5)標(biāo)準(zhǔn)液：用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至所需濃度(定性分析可省略本步驟)；(6)加樣：按排列順序依次加入50～100 μl/孔稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液、處理過(guò)的待檢樣品、陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照，室溫或37℃孵育30～60 min；(7)洗板：同步驟(2)；(8)加酶標(biāo)抗體：酶標(biāo)抗體的稀釋按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)，按50～100 μl/孔加入新鮮配制的酶標(biāo)抗體，室溫或37 ℃孵育1h；(9)洗板：同步驟(2)；(10)加底物液顯色：按100～150 μl/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光反應(yīng)15～30分 min;(11)終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入50 μl的終止液；(12)結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用裸眼觀(guān)察結(jié)果，反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可在酶標(biāo)儀上于450 nm(若以ABTS顯色，則410 nm)處測(cè)OD值。檢測(cè)時(shí)以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若樣品孔中的OD值大于陰性對(duì)照孔的2.1倍，即為陽(yáng)性。

1.3.2 空腹胰島素放射免疫分析的操作程序首先配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并各取一定體積；于其中加入一定量的標(biāo)記抗原和特異性的抗體；在一定條件下使之反應(yīng)平衡后，采用適當(dāng)方法將B與F分離；分別測(cè)量其放射性：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。對(duì)樣品中抗原的測(cè)定，則可在同樣條件下操作，在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得含量。

1.3.3 IR的評(píng)價(jià)根據(jù)空腹血糖及胰島素值按HOMA穩(wěn)態(tài)模型計(jì)算，HOMA-IR=FINS(μU/ml)×FBG(mmol/L)/22.5。

1.4注意事項(xiàng)所有病例采樣前均要求前晚禁食8～10 h，采取血樣均于北京時(shí)間8～9時(shí)進(jìn)行。收集血液標(biāo)本立刻分離出血清保存于-70 ℃冰箱；血清標(biāo)本使用時(shí)均在室溫(25℃)下解凍并確保樣品均勻充分解凍；所有實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)操作。為使結(jié)果準(zhǔn)確，所需指標(biāo)檢測(cè)由專(zhuān)人管理。

2結(jié)果

2.1兩組孕早期各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較實(shí)驗(yàn)組孕早期空腹Chemerin水平、胰島素抵抗較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，脂聯(lián)素水平較對(duì)照組明顯減少(P<0.05)，血糖水平兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1　兩組孕早期各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較±s)

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05

2.2兩組孕中期各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較實(shí)驗(yàn)組孕中期空腹chemerin水平、胰島素抵抗及血糖水平較對(duì)照組明顯升高(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組脂聯(lián)素水平較對(duì)照組明顯減少(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2　兩組孕中期各指標(biāo)數(shù)據(jù)比較±s)

注：與對(duì)照組比較：*P<0.05。

3討論

IR是GDM的病理生理基礎(chǔ)，IR的增加導(dǎo)致了妊娠并發(fā)癥GDM的發(fā)生[3]，研究表明GDM孕婦的IR程度和胰島素分泌能力均高于正常孕婦，但胰島素分泌能力的增加不能補(bǔ)償IR的增加，孕期胎盤(pán)催乳素、孕酮、雌二醇和胎盤(pán)生長(zhǎng)激素等均有拮抗胰島素的作用，且隨妊娠周期增長(zhǎng)而逐漸分泌增加，出現(xiàn)孕婦對(duì)胰島素敏感性下降，對(duì)胰島素需求增多，使胰島素處于相對(duì)不足而出現(xiàn)血糖升高。本研究發(fā)現(xiàn)GDM孕婦出現(xiàn)血糖明顯增加時(shí)，IR亦較正常孕婦明顯增多，且孕早期比較亦有顯著意義，表明GDM孕婦在出現(xiàn)血糖異常之前即存在IR增加的情況，進(jìn)一步說(shuō)明IR的增加導(dǎo)致了GDM的發(fā)生。

Chemerin作為近年新確認(rèn)的脂肪細(xì)胞因子，在脂肪組織、肺、肝臟、胰臟、腎上腺、卵巢、胎盤(pán)、皮膚等都有表達(dá)，在免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)、脂肪細(xì)胞分化成熟、脂肪代謝等方面均發(fā)揮作用，與血糖水平、肥胖、糖尿病和IR有密切關(guān)系。有研究對(duì)PCOS患者進(jìn)行體內(nèi)延長(zhǎng)的胰島素-葡萄糖輸注實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)Chemerin的合成和分泌在高胰島素水平刺激下升高，而在二甲雙胍干預(yù)后顯著下降，二甲雙胍是世界上公認(rèn)的改善和治療IR的一線(xiàn)用藥，故證實(shí)Chemerin與IR有著密切的相關(guān)性[4]。本研究發(fā)現(xiàn)GDM孕婦孕早期、孕中期Chemerin、IR均明顯高于正常孕婦，進(jìn)一步支持Chemerin同IR呈正相關(guān)性，且兩組孕婦孕早期即出現(xiàn)明顯差異，進(jìn)一步說(shuō)明GDM孕婦Chemerin水平在血糖出現(xiàn)異常之前已經(jīng)逐漸升高，表明Chemerin的表達(dá)與GDM存在一定的因果關(guān)系。

脂聯(lián)素是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)負(fù)性調(diào)節(jié)血糖的脂肪細(xì)胞因子，有增強(qiáng)胰島素敏感性的作用，是胰島素的一個(gè)增敏劑。隨著妊娠的進(jìn)展，孕婦胎盤(pán)中產(chǎn)生的催乳素、孕酮、雌二醇和胎盤(pán)生長(zhǎng)激素等增多，對(duì)胰島素抵抗增加，而脂聯(lián)素水平呈下降趨勢(shì)，本研究證實(shí)了這一觀(guān)點(diǎn)，正常孕婦孕早期和孕晚期脂聯(lián)素濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而GDM孕婦血脂聯(lián)素水平較正常孕婦明顯下降，因此認(rèn)為血脂聯(lián)素濃度下降是發(fā)生GDM的高危因素，有研究發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素的下降與胰島功能受損具有獨(dú)立相關(guān)性，另有研究發(fā)現(xiàn)，孕婦血脂聯(lián)素水平與孕齡、OGTT各點(diǎn)血糖值負(fù)相關(guān)，認(rèn)為脂聯(lián)素是GDM發(fā)病的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子，在GDM篩查試驗(yàn)中，可以用來(lái)排除GDM低危人群[5]。另有報(bào)道指出GDM患者早孕時(shí)血脂聯(lián)素含量已明顯低于正常孕婦，且脂聯(lián)素含量每降低1%，發(fā)生妊娠期糖尿病的概率增加20%。Retnakaran指出，脂聯(lián)素是衡量IR的重要指標(biāo)，是妊娠期IR發(fā)展為糖尿病的關(guān)鍵因素。因此，早期篩查血清脂聯(lián)素可提早發(fā)現(xiàn)GDM，脂聯(lián)素也有望成為GDM治療的新藥。本研究采用病例對(duì)照研究法，探討了正常妊娠孕婦及GDM孕婦血Chemerin、脂聯(lián)素水平及其孕期變化趨勢(shì)，并分析其相關(guān)因素，初步認(rèn)為妊娠期糖代謝異常孕婦發(fā)病前的Chemerin、脂聯(lián)素水平已有顯著改變，推測(cè)上述因子變化可能影響IR，從而導(dǎo)致妊娠期糖代謝異常。

參考文獻(xiàn)：

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*作者簡(jiǎn)介：唐霜(1969—)，女，湖南衡陽(yáng)人，本科，主要從事產(chǎn)科工作。

中圖分類(lèi)號(hào)：R714

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1004-7115(2016)07-0796-03

doi:10.3969/j.issn.1004-7115.2016.07.029

(收稿日期2016-03-08)