初云霞山東省臨沂市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂　276000

?

免疫層析法和被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體抗體的臨床應(yīng)用比較

初云霞
山東省臨沂市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂276000

[摘要]目的對(duì)比評(píng)價(jià)肺炎支原體抗體免疫層析法和被動(dòng)凝集法的臨床應(yīng)用。方法選擇2015年1～6月來(lái)我院就診疑似肺炎支原體感染的患者2884例,對(duì)其進(jìn)行被動(dòng)凝集法和免疫層析法兩種方法的檢測(cè)，評(píng)價(jià)分析結(jié)果。結(jié)果被動(dòng)凝集法的總陽(yáng)性35.0%（1009/2884），免疫層析法的總陽(yáng)性率為29.3%（845/2884），總陽(yáng)性率被動(dòng)凝集法較免疫層析法高5.7%。結(jié)論被動(dòng)凝集法敏感性高于免疫層析法。免疫層析法具有操作簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn)，但對(duì)有些免疫低下抗體產(chǎn)生不足時(shí)或接受免疫抑制治療的患者，血清學(xué)抗體檢測(cè)容易漏診,造成假陰性結(jié)果。被動(dòng)凝集法檢測(cè)的抗體水平是各種亞型抗體的總和，不僅檢測(cè)抗體滴度，還能判斷是現(xiàn)癥感染或是既往感染，為支原體肺炎的早期診斷、治療提供重要的依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]肺炎支原體；兒童肺炎；免疫層析法；被動(dòng)凝集法

呼吸道感染為兒科常見(jiàn)的疾病，肺炎支原體（my coplasma pneumoniae，MP）是兒童呼吸道感染的主要病原體之一，并且是社區(qū)獲得性肺炎（CAP）非典型病原體中的主要致病菌，占肺炎發(fā)病率的15%～20%[1]，占非細(xì)菌性肺炎的50%。由呼吸道侵入，引發(fā)呼吸道感染綜合征，嚴(yán)重者引起肺外并發(fā)癥如腦膜炎、心肌炎及肝功能損傷等。感染人群多為嬰幼兒和青少年，全年均可發(fā)病，以冬春季節(jié)居多。特別是兒科患者中肺炎支原體引起的感染近年來(lái)呈上升趨勢(shì)[2]。由于支原體無(wú)細(xì)胞壁，對(duì)青霉素、頭孢菌素等作用于細(xì)胞壁的抗生素不敏感，臨床癥狀和肺部體征又缺乏特異性，因此，盡快明確對(duì)支原體肺炎的診斷，對(duì)避免抗生素的濫用具有重要意義。本文收集自2015年1～6月來(lái)我院就診的患兒2884例，進(jìn)行免疫層析法和被動(dòng)凝集法的對(duì)比，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2015年1～6月來(lái)我院就診疑似肺炎支原體感染患者2884例，其中男1682例，女1202例，年齡3個(gè)月～13歲。

1.2試劑

肺炎支原體IgM抗體（免疫層析法）檢測(cè)試劑盒由山東省濰坊市康華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。肺炎支原體總抗體（被動(dòng)凝集法）檢測(cè)試劑盒由富士瑞必歐株式會(huì)社生產(chǎn)。

1.3標(biāo)本

標(biāo)本采集后盡快分離血清，其中免疫層析法可用血清、血漿和全血（抗凝劑可以采用EDTA、枸椽酸鈉、肝素或草酸鈉）。

1.4方法

免疫層析法和被動(dòng)凝集法；每個(gè)標(biāo)本均同時(shí)進(jìn)行凝集法和免疫層析法檢測(cè)。

1.4.1免疫層析法在試劑加樣端先加30 μL血清，后加80 μL樣本稀釋液，10～20 min時(shí)觀察結(jié)果，20 min后結(jié)果無(wú)效。

1.4.2被動(dòng)凝集法用一支經(jīng)校準(zhǔn)的滴管，向第一孔中滴加100 μL（25 μL/滴×4滴）血清稀釋液，向第2至第8孔（或更多）中各滴加25 μL血清稀釋液。首先用微量移液管向第一孔中加25 μL樣品。然后用加樣器從第1～8孔進(jìn)行對(duì)倍稀釋。在第2孔中加25 μL未致敏粒子，更換滴管后在第3～8（或更多）孔中加25 μL致敏粒子。同時(shí)設(shè)立陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔。用平板混合器混勻30 s，加蓋，室溫（15℃～30℃）靜置3 h，判定結(jié)果。結(jié)果以滴度表示（標(biāo)本稀釋倍數(shù)范同：1：40～1：2560），臨界值為1：160[3]。以血清稀釋結(jié)果滴度在1：160或以上，可判定為肺炎支原體新近感染。在我國(guó)2006年兒童社會(huì)獲得性肺炎（CAP）管理指南（試行）中規(guī)定了MP感染的免疫學(xué)檢測(cè)診斷標(biāo)準(zhǔn)：持續(xù)高滴度MP－IgM（＞1∶160）或恢復(fù)期抗體滴度較急性期4倍或以上變化[4]。與國(guó)外學(xué)者研究相符[5]。需要注意的是：試驗(yàn)前試劑要恢復(fù)室溫，未致敏粒子和致敏粒子一定要充分混勻，以免影響結(jié)果判定。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，兩種方法總陽(yáng)性率的比較采用行×列表進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2884例患兒用兩種方法檢測(cè)肺炎支原體抗體總陽(yáng)性率的比較，見(jiàn)表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩種方法檢測(cè)肺炎支原體抗體總陽(yáng)性率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，從表1看出被動(dòng)凝集法的總陽(yáng)性率高于免疫層析法5．7%，兩種方法在1：80（或弱陽(yáng)性）占7．3%～9．2%，與相關(guān)資料相符，正常人可能存在肺炎支原體，但滴度<1：160[6]。因此建議臨床醫(yī)生間隔2周再次檢測(cè)患者體內(nèi)的支原體滴度，上升并≥1：160時(shí)，可明確診斷，有利于及時(shí)、合理地抗感染治療。

表1　兩種方法檢測(cè)肺炎支原體抗體總陽(yáng)性率的比較[n(%)]

3　討論

肺炎支原體是存在于人和動(dòng)物及植物體內(nèi)的最小的不易著色無(wú)細(xì)胞壁的原核微生物，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖[7]，其形態(tài)多種多樣，大小介于病毒和細(xì)菌之間，可通過(guò)除菌過(guò)濾器。傳染源為帶菌者和患者，經(jīng)飛沫空氣傳播，侵入呼吸道黏膜可導(dǎo)致氣道損傷，使纖毛破壞，纖毛運(yùn)動(dòng)減弱而出現(xiàn)呼吸道癥狀和肺部感染等[8]。支原體的潛伏期在2～3周，被支原體感染后大約在7 d可出現(xiàn)IgM型抗體，3周左右達(dá)到高峰，是急性期感染的標(biāo)志，一般持續(xù)3～6個(gè)月。IgG和IgA出現(xiàn)的比IgM要晚。當(dāng)被感染的患者有癥狀時(shí)抗體已達(dá)到最高水平[9，10]。臨床科學(xué)的方法是觀察患者體內(nèi)的抗體滴度變化，以便及時(shí)掌握病情發(fā)展變化，指導(dǎo)臨床合理有效地使用抗生素。

目前診斷MP感染的方法主要有培養(yǎng)法、PCR法和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)。MP培養(yǎng)特異性高，是診斷MP感染的金標(biāo)準(zhǔn)[11]。培養(yǎng)法缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)、培養(yǎng)條件高、操作復(fù)雜、并且陽(yáng)性率低，不適合MP的早期診斷。而快速培養(yǎng)法雖然將MP培養(yǎng)時(shí)間縮短至24 h，因其陽(yáng)性率低也受到了限制。PCR法有很高的敏感性，但假陽(yáng)性率高，質(zhì)控不嚴(yán)格容易導(dǎo)致污染[12]。因此，血清學(xué)方法是診斷MP感染的主要方法[13]。

免疫層析法采用金標(biāo)記免疫滲濾技術(shù)，檢測(cè)血清中的IgM抗體。當(dāng)支原體感染人體后，與免疫系統(tǒng)相互作用，引起人體免疫功能發(fā)生改變[14]。重癥患者可能不一定出現(xiàn)IgM抗體，免疫功能低下患者、窗口期抗體未產(chǎn)生或抗體含量較低的情況會(huì)造成免疫檢驗(yàn)無(wú)效，出現(xiàn)假陰性，發(fā)生漏診。而且免疫層析法在應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)溶血和黃疸標(biāo)本會(huì)干擾顯色背景，影響結(jié)果的判定，弱陽(yáng)性結(jié)果多見(jiàn)。免疫層析法的弱陽(yáng)性符合我國(guó)2006年兒童社會(huì)獲得性肺炎（CAP）管理指南（試行）中規(guī)定了MP感染的免疫學(xué)檢測(cè)診斷標(biāo)準(zhǔn)。

凝集法是目前支原體檢測(cè)中最主要方法[15]。凝集法在特異性免疫凝集原理基礎(chǔ)上應(yīng)用最新開(kāi)發(fā)的明膠離子和肺炎支原體純化抗原。明膠離子上沒(méi)有抗原性決簇，無(wú)生物活性，對(duì)于血清成分的物理吸附作用小，非特異性反應(yīng)減少，敏感度高[16]。而且被動(dòng)凝集法通過(guò)對(duì)血清進(jìn)行倍比稀釋，做到血清中MP抗體效價(jià)進(jìn)行半定量測(cè)定，血清抗體滴度的高低與患兒病情程度呈正相關(guān)[17]。有利于臨床區(qū)分現(xiàn)癥感染與既往感染。適合早期肺炎支原體感染的診斷及治療效果的監(jiān)測(cè)。

因此，對(duì)于這兩種方法，免疫層析法具有方便、快速便于復(fù)查的特點(diǎn)，但是特異度和靈敏度稍差，陽(yáng)性率偏低。被動(dòng)凝集法檢測(cè)的抗體水平是各種亞型抗體的總和[18]。只要患者體內(nèi)含有IgG、IgM、IgA三種抗體中的一種或幾種被動(dòng)凝集法均可檢測(cè)出來(lái)，所以本次試驗(yàn)被動(dòng)凝集法陽(yáng)性率高于免疫層析法。當(dāng)被動(dòng)凝集法滴度在1：160或以上時(shí)，免疫層析法才會(huì)出現(xiàn)比較快而明顯的陽(yáng)性結(jié)果。被動(dòng)凝集法陽(yáng)性率高于免疫層析法。

綜上所述，被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體抗體敏感性高于免疫層析法。兩種方法均可用于臨床早期支原體感染的輔助診斷，聯(lián)合應(yīng)用為臨床提供更客觀、更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，減少臨床漏診和誤診的發(fā)生，提高支原體感染的診斷符合率。

[參考文獻(xiàn)]

[1]劉又寧，陳民鈞，趙鐵梅，等.中國(guó)城市成人社區(qū)獲得性肺炎665例病原學(xué)多中心調(diào)查[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2006，29（1）：3－8．

[2]張麗中，周燕，高潔，等.呼吸道感染患者肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)醫(yī)藥與臨床，2013，6（6）：808－809．

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)感染學(xué)組.成人肺炎支原體肺炎診治專家共識(shí)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2010，33 （9）：643-645.

[4]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)呼吸學(xué)組、兒童社區(qū)獲得性肺炎管理指南（試行）（下）[J].中華兒科雜志，2007，45（3）：223－230．

[5]Kim NH，Lee JA，Eun BW，et al.Comparison of polymerase chainreaction and the indirect particle agglutination antibody test for the diagnosis of Mycoplasma pneumoniae pneumonia in childrenduring two outbreaks[J].Pediatr Infect Dis J，2007，26（10）：897-903.

[6]阮麟.396例肺炎患兒肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（28）：60．

[7]葉煉，鄧益斌，王芳，等.655例兒童肺炎支原體感染情況分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，12（12）：1676-1677.

[8]方玉紅，崔曉明.嬰幼兒社區(qū)獲得性肺炎支原體肺炎的臨床特征[J].中醫(yī)兒科雜志，2014，10（10）：34－36．

[9]余欣，陳志央，陳怡博.1788例兒童血清肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2012，24（S1）：748-749.

[10]蔣卉男，楊璐，李瑾.肺炎支原體感染病原學(xué)診斷研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用兒科雜志，2011，26（S）：631－633．

[11]趙閱，孫紅妹.肺炎支原體實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)現(xiàn)狀及發(fā)展[J].國(guó)際呼吸雜志，2009，29（5）：304－308．

[12]張慧華，趙燕飛.肺炎支原體測(cè)定的血清學(xué)方法比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2008，23（2）：137－141．

[13]郭建軍.肺炎支原體3種方法的比較分析[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)雜志，2015，2（10）：1788－1789．

[14]汪燕、王昊、王雪方，等.肺炎支原體感染患兒免疫功能變化及意義[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（1）：126－127．

[15]宋敏，李波，胡海燕，等.萬(wàn)州區(qū)4783例兒童血清肺炎支原體抗體結(jié)果檢測(cè)分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（10）：1391－1392．

[16]鄭玉平，張杰，周逸琴.被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體抗體的結(jié)果分析[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11（21）：1720-1721.

[17]易萍，周逢洽，劉偉光.肺炎支原體IgM檢測(cè)在小兒呼吸道疾病診斷中的應(yīng)用[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2014，5（21）：579-580.

[18]張化濤，張磊.196例呼吸道感染患兒血清中肺炎支原體抗體滴度測(cè)定及意義[J].山東醫(yī)藥，2010，50（27）：68．

·病理醫(yī)學(xué)·

Comparisonoftheclinicalapplicationofimmunochromatographic method and passive agglutination method for testing mycoplasma pneumoniae antibody

CHU Yunxia
Department of Clinical Laboratory,Linyi Women and Children Hospital in Shandong Province,Linyi276000,China

[Abstract]Objective To compare and evaluate the clinical application of immunochromatographic method and passive agglutination method for mycoplasma pneumoniae antibody.Methods A total of 2884 patients susceptible of the infection of mycoplasma pneumoniae who were admitted to our hospital from January to June 2015 were selected.They were given the tests of passive agglutination method and immunochromatographic method,and the analysis results were evaluated.Results The total positive rate of passive agglutination method was 35.0%(1009/2884),and the total positive rate of immunochromatographic method was 29.3%(845/2884).The total positive rate of passive agglutination method was 5.7%higher than that of immunochromatographic method.Conclusion The sensitivity of passive agglutination method was higher than immunochromatographic method.The immunochromatographic method has the features of convenient and rapid operation,but the serological antibody test is likely to cause missed diagnosis for patients with low immunity and insufficient antibody production or patients receiving immunosuppressive therapy,so that false negative results may occur.The antibody level tested by passive agglutination method is the sum of various sub-antibody,which not only tests antibody titer,but it is also able to judge current infection or previous infection,providing important basis for early diagnosis and treatment of mycoplasma pneumonia.

[Key words]Mycoplasma pneumoniae antibody;Children pneumoniae;Immunochromatographic method;Passive agglutination method

[中圖分類號(hào)]R375.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

[文章編號(hào)]1673-9701（2016）04-0118-03

收稿日期：（2015-10-13）