王慶，薛天樂

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

葉敏

(貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700)

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谷精草總黃酮抑制亞硝化反應(yīng)活性研究

王慶，薛天樂

(亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽 亳州 236800)

葉敏

(貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700)

[摘要]目的：觀察谷精草總黃酮抑制亞硝化反應(yīng)活性。方法：采用超聲提取法對谷精草總黃酮進(jìn)行提取，通過分光光度法測定谷精草總黃酮抑制亞硝化反應(yīng)活性。結(jié)果：當(dāng)谷精草總黃酮濃度達(dá)到16.5μg/mL時，對亞硝胺合成的阻斷率為80.9%，當(dāng)谷精草總黃酮濃度達(dá)到13.5μg/mL時，對亞硝酸鈉清除率最大，達(dá)到73.2%。結(jié)論：谷精草總黃酮具有較強的抑制亞硝化反應(yīng)活性。

[關(guān)鍵詞]谷精草；總黃酮；抑制；亞硝化反應(yīng)

惡性腫瘤嚴(yán)重威脅著人類的健康，亞硝胺類化合物是一類強致癌原，能引起包括胃癌、肝癌在內(nèi)的多種器官的腫瘤 ，減少或阻斷亞硝胺的生成是預(yù)防惡性腫瘤的重要措施之一[1]。有研究表明，從植物中提取的某些黃酮類化合物對亞硝化反應(yīng)有抑制作用，因此成為抗癌新藥研究的一個熱點[2]。

谷精草是谷精草科(Eriocaulaceae)植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern的干燥帶花莖的頭狀花序，在我國分布范圍較廣，江蘇、安徽、浙江、江西、福建等省區(qū)均有種植[3]。谷精草味辛、甘，性平，具有祛風(fēng)散熱、明目退翳的功效[4]。谷精草主要含有黃酮及其苷類、有機(jī)酸、植物甾醇等化學(xué)成分[5]，其中黃酮類化學(xué)成分含量較高，本實驗對谷精草總黃酮提取物抑制亞硝化反應(yīng)活性進(jìn)行了研究，希望為谷精草的開發(fā)提供依據(jù)。

1材料與儀器

1.1材料

谷精草(購于安徽省毫州市三義堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)王效山教授鑒定為谷精草科(Eriocaulaceae)植物谷精草Eriocaulon buergerianum Koern的干燥帶花莖的頭狀花序)、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(購于中國藥品生物制品檢定所)、無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、硫酸亞鐵、檸檬酸、磷酸二氫鈉、對氨基苯磺酸、a-萘胺、N-1-萘乙二胺鹽酸鹽等(均為分析純)。

1.2儀器

圓盤粉碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、循環(huán)水式真空泵、HS-3120超聲波清洗機(jī)、UV-9200型紫外可見分光光度計等。

2方法與結(jié)果

2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精稱50.0mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加入60%的乙醇溶解并定容到250mL容量瓶中。精確吸取0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于25mL容量瓶中，加入0.05g/mL亞硝酸鈉溶液0.2mL，搖勻后放置6min，加入0.1g/mL 硝酸鋁溶液0.2mL，搖勻后放置6min，加入1.0mol/L氫氧化鈉溶液2.0mL，再用60%乙醇溶液定容至刻度，搖勻，放置15min。在波長為510nm處測定吸光度，并以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]。

2.2谷精草總黃酮的提取

圖1　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

將谷精草烘干后粉碎成粗粉,取谷精草粗粉若干，石油醚回流脫脂6h，晾干備用。精確稱取脫脂晾干后的谷精草粗粉4.06g置于平底燒瓶中，加入60%乙醇100mL，超聲提取25min，超聲溫度60℃，將提取液進(jìn)行抽濾、洗滌，減壓濃縮，定容到50mL容量瓶中，再從中精密吸取5mL溶液定容到250mL容量瓶中，測量吸光度(A=0.39)[6]。

2.3谷精草提取液總黃酮濃度的含量測定

將吸光度A=0.39帶入線性回歸方程中，計算出谷精草提取液中黃酮的濃度(250mL容量瓶)為0.037mg/mL。

2.4谷精草總黃酮提取液對亞硝胺阻斷作用

分別取pH3.0檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液10.0mL置于12只25mL比色管中，分別加入1.0mmol/L NaNO21.0mL、1.0mmol/L二甲胺1.0mL，然后分別加入谷精草總黃酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0mL，將反應(yīng)體系分別用蒸餾水稀釋至刻度，在37℃水浴下恒溫1h后，用移液管分別吸取1.0mL該溶液加到7cm2的培養(yǎng)皿中，分別加入0.5%的Na2CO3溶液0.5mL，在254nm紫外燈照射15min，取出后分別加1%對氨基苯磺酸溶液1.5mL、0.1%a-萘胺1.5mL，加蒸餾0.5mL，搖勻放置15min后，用分光光度計在525nm處分別測吸光度值，計算阻斷率[7～9]:

阻斷率=[(A0-AX)÷A0]×100%

(1)

式中，A0為未加提取液的比色管中NaNO2的吸光度；AX為加提取液的比色管中NaNO2的吸光度。

結(jié)果如表1、圖2。由表1和圖2可以看出，谷精草總黃酮提取液對亞硝胺的阻斷活性較強，隨著濃度的上升，其對亞硝胺的阻斷率呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，當(dāng)總黃酮提取液濃度達(dá)到16.5μg/mL時，阻斷率為80.9%。

圖2　谷精草總黃酮對亞硝胺的阻斷結(jié)果

加入提取液量/mLA0AX阻斷率/%10.2250.19712.420.2250.17920.430.2250.14436.040.2250.11250.250.2250.08860.960.2250.06969.370.2250.05774.780.2250.05177.390.2250.04679.6100.2250.04480.4110.2250.04380.9

2.5谷精草總黃酮提取液對亞硝酸鈉清除作用

分別吸取谷精草總黃酮提取液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0mL于12只25mL比色管中，再分別加入10.0mL檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶(pH=3.0)、50mg/L NaNO2溶液1.0mL，在37℃水浴下恒溫1h。分別加入0.4%的對氨基苯磺酸溶液2.0mL，搖勻，5min后加入0.2%的N-1-萘乙二胺鹽酸鹽溶液1.0mL，分別用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15min后用分光光度計在540nm處測吸光度值，計算清除率[7～9]:

清除率=[(A0-AX)÷A0]×100%

(2)

式中，A0為未加提取液的比色管中NaNO2的吸光度；AX為加提取液的比色管中NaNO2的吸光度。

結(jié)果見表2、圖3。由表2和圖3可知，谷精草總黃酮提取液濃度達(dá)到13.5μg/mL時對亞硝酸鈉清除率最大，為73.2%，表明谷精草總黃酮可以有效清除亞硝酸鈉。當(dāng)濃度達(dá)到13.5μg/mL以上時，清除率基本不再增加。

圖3　谷精草總黃酮對亞硝酸鈉清除作用

加入提取液量/mLA0AX清除率/%10.7460.62216.720.7460.40346.030.7460.32656.340.7460.29760.250.7460.24167.760.7460.21870.870.7460.21271.680.7460.20572.590.7460.20073.2100.7460.20372.8110.7460.20173.1

3結(jié)語

超聲輔助提取可使植物細(xì)胞破壁，提取率高，速度快，耗能低。本實驗利用超聲輔助提取法考察了谷精草總黃酮提取液對亞硝胺合成的阻斷率和亞硝酸鈉的清除作用，結(jié)果表明，谷精草總黃酮提取液具有較強的抑制亞硝化反應(yīng)活性，當(dāng)總黃酮濃度達(dá)到16.5μg/mL時，其對亞硝胺合成的阻斷率為80.9%，濃度為13.5μg/mL時，對亞硝酸鈉清除率最大，為73.2%。隨著濃度的上升，谷精草總黃酮提取液在0～16.5μg/mL的范圍內(nèi)抑制亞硝化反應(yīng)活性呈現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系。

谷精草種植廣泛，價廉易得，其總黃酮提取液具有顯著的抑制亞硝化反應(yīng)活性，可作為一種新型抗癌劑進(jìn)行開發(fā)，應(yīng)用前景廣闊。

[參考文獻(xiàn)]

[1]于慧,宋愛云,丁蘭萍,等.惡性腫瘤病因研究進(jìn)展[J].河南腫瘤學(xué)雜志，2003，16(5)：388～390.

[2]張慶樂,吳守林,張麗青,等.植物黃酮在抑制亞硝化反應(yīng)中的應(yīng)用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，28(6)：733～734.

[3] 溫小琴.谷精草及其偽品鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥,2001,12(4):300.

[4] 孫克,繆珠雷.《本草綱目》中的谷精草的原植物[J].醫(yī)古文知識,2002,19(2):32.

[5] 張菲,王斌.谷精草屬植物的化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展[J].中成藥，2014，36(11):2372～2376.

[6] 馮麗娟,陳芳,孫智勇,等. 超聲波法提取谷精草中總黃酮的條件優(yōu)化[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，26(6):84～86.

[7] 吳春.杜仲提取物對亞硝化反應(yīng)的抑制作用[J].食品科技,2005,23(6):34～37.

[8] 吳佳,解成喜.石榴皮總黃酮的提取工藝及抑制亞硝化反應(yīng)[J].食品科學(xué)，2011，32(2):112～114.

[9] 傅茂潤,陳慶敏,茅林春.黃花菜提取物對亞硝化反應(yīng)的抑制能力研究[J].食品科學(xué)，2009，30(15) ：114～119.

[編輯]一凡

82 A Study of Inhibition Activity of Total Flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on Nitrosation

Wang Qing，Xue Tianle

(BozhouVocationalandTechnicalCollege，Bozhou236800,China)

Ye Min

(GuizhouUniversityofEngineeringScience,Bijie551700，China)

Abstract：Objective：To observe inhibition activity of total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on nitrosation Methods：The total flavonoids of Eriocaulon buergerianum had been extracted by ultrasonic extraction, and then spectrophotometry had been used to measure inhibition activity of the total flavonoids from Eriocaulon buergerianum Koern on nitrosation.Results：The results showed that when the concentration of total flavonoids reached 16.5μg/mL, the blocking rate of nitrosamine synthesis was as high as 80.9%; when the concentration of total flavonoids reached 13.5μg/mL, the clearance of sodium nitrite was highest, 73.2%. Conclusion：The total flavononid of Eriocaulon buergerianum Koern has significant acitivity to inhibit nitrosation and clear sodium nitrite.

Key words:Eriocaulon buergerianum Koern; total flavonoids; inhibition; nitrosation

[中圖分類號]R965

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號]1673-1409(2016)12-0082-03

[作者簡介]王慶(1982-)，女，講師，碩士，主要從事天然藥物活性成分分離純化研究工作；通信作者：薛天樂，84181713@qq.com。

[基金項目]安徽省高等學(xué)校自然科學(xué)重點課題(KJ2015A358)；亳州市中藥科技創(chuàng)新團(tuán)隊(BZ2013zzb06)。

[收稿日期]2015-12-27

[引著格式]王慶，薛天樂，葉敏.谷精草總黃酮抑制亞硝化反應(yīng)活性研究[J].長江大學(xué)學(xué)報(自科版)，2016，13(12)：82～84.