季方茹，宋元清，雷力力，沈慶明，荊洪英

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江佳木斯154003;2.雞西市人民醫(yī)院藥劑科，黑龍江雞西158100)

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CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應(yīng)的關(guān)系①

季方茹1，宋元清2，雷力力1，沈慶明1，荊洪英1

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科，黑龍江佳木斯154003;2.雞西市人民醫(yī)院藥劑科，黑龍江雞西158100)

摘要:目的:觀察分析CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應(yīng)發(fā)生率的關(guān)系。方法:選擇2013－01～2015－09經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)檢查確診為乳腺癌130個(gè)病例作為入選試驗(yàn)對(duì)象，檢測(cè)其CYP3A4* 1G基因型并觀察、收集、記錄其不良反應(yīng)發(fā)生情況，分析患者的不良反應(yīng)發(fā)生和基因多態(tài)性的相關(guān)性。結(jié)果: CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應(yīng)發(fā)生率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論: CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應(yīng)發(fā)生率沒有關(guān)聯(lián)。

關(guān)鍵詞:CYP3A4* 1G ;基因多態(tài)性;紫杉醇;不良反應(yīng)

近年來隨著藥物基因組學(xué)的發(fā)展，藥物基因多態(tài)性與藥物療效和不良反應(yīng)的關(guān)系越來越被重視，相關(guān)的研究也很多，很多研究成果已被批準(zhǔn)應(yīng)用到臨床中，對(duì)指導(dǎo)臨床合理用藥，達(dá)到精準(zhǔn)醫(yī)療起了很重要的作用。在細(xì)胞色素P450酶(CYP)的研究中，CYP1B1和CYP3A4作為新的藥物靶點(diǎn)日益受到關(guān)注［1］。基于CYP1B1和CYP3A4在多種腫瘤組織中(前列腺、結(jié)直腸等)［2］特異性高表達(dá)，而在相應(yīng)的正常組織中不表達(dá)這一特點(diǎn)，認(rèn)為CYP1B1和CYP3A4為一個(gè)抗癌治療、耐藥逆轉(zhuǎn)的新靶點(diǎn)。紫杉醇是目前治療卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌的有效藥物。然而，與其他抗腫瘤藥物一樣，由于紫杉醇的骨髓抑制作用、心血管毒性、神經(jīng)毒性、肝臟毒性及胃腸道反應(yīng)等不良反應(yīng)個(gè)體差異的存在，在一定程度上限制了它的應(yīng)用。筆者對(duì)我院腫瘤科應(yīng)用紫杉醇注射液治療乳腺癌的130例患者，進(jìn)行了基因型檢測(cè)和其不良反應(yīng)觀察、收集、統(tǒng)計(jì)和分析，研究二者的關(guān)聯(lián)性，為臨床醫(yī)生使用紫杉醇時(shí)減少不良反應(yīng)的發(fā)生提供依據(jù)。

1　儀器與材料

1.1儀器

Thermo公司微量移液器;日本島津公司AUW220D電子分析天平;美國Bio－Rad公司S1000 Thermal Cycler PCR儀、PowerPac Universal通用型電泳儀、ChemiDoc XRS凝膠成像系統(tǒng);上海滬譽(yù)貿(mào)易有限公司H2500R－2高速冷凍離心機(jī)。

1.2試藥

Fermentas公司生產(chǎn)的Genomic DNA Purification Kit、Star pcr Taq、100 bp DNA Ladder、Oli I內(nèi)切酶。CYP3A4* 1G擴(kuò)增引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，DNA測(cè)序由生工生物工程(上海)股份有限公司北京測(cè)序部完成。紫杉醇注射液: 5mL: 30mg哈藥集團(tuán)生物工程有限公司生產(chǎn)。

1.3研究對(duì)象、血樣采集方法及給藥方法

選擇經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)檢查確診為乳腺癌的病例作為入選試驗(yàn)對(duì)象，預(yù)計(jì)生存期不少于6個(gè)月，1個(gè)月內(nèi)未用任何藥物作過抗腫瘤治療，血常規(guī)及肝、腎功能、心電圖相關(guān)檢查正常者。檢測(cè)CYP3A4* 1G位點(diǎn)基因型，根據(jù)基因型將患者分為CC型(野生純合子) ; CT + TT型(雜合子+突變純合子) 2組，然后按患者體表面積計(jì)算每個(gè)患者靜脈輸注紫衫醇注射液的劑量(175mg/m2)，入選的患者不再同時(shí)使用其他抗腫瘤藥。給藥方法:用紫杉醇前30min靜脈滴注地塞米松注射液20mg，及雷尼替丁200mg，同時(shí)肌注50mg異丙嗪，紫杉醇注射液用專用輸液管靜脈滴入，時(shí)間不少于3h，每3周一次。每一療程4次。

2　方法

2.1 CYP3A4* 1G基因檢測(cè)

上游引物5＇...AATAGAAAGCAGATGAACCAGAGCC...3＇，下游引物5＇...CACCCTGATGTCCAGCAGAAACT...3＇; PCR組分及條件: Maxima Hot Start Green PCR Master Mix (2X) 12.5μL，上、下游引物各1μL，模板DNA 1μL，雙蒸水9.5μL; 94℃預(yù)變性4min，94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸5min。酶切及電泳: 10 ×green buffer 2μL，PCR產(chǎn)物10μL，Rsa I內(nèi)切酶1.0μL，雙蒸水17μL;水浴37℃，酶切5 min，水浴65℃，滅活5min。使用2.0%瓊脂糖凝膠電泳30min，電壓140V。

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度為287bp。限制性內(nèi)切酶RsaI酶切后判斷基因型，當(dāng)出現(xiàn)215和72bp兩個(gè)片段時(shí)為CC純合子型，當(dāng)出現(xiàn)287，215和72bp三條片段時(shí)為CT型雜合子，當(dāng)只有287bp一條片段時(shí)為TT型純合子。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)焦磷酸測(cè)序方法驗(yàn)證。

2.2不良反應(yīng)觀察時(shí)限

第一次用藥開始至療程結(jié)束后15d。

2.3不良反應(yīng)判斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)我國國家藥物不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心采用的判斷方法［3］

3　結(jié)果

3.1基因測(cè)序結(jié)果

按2.1方法進(jìn)行試驗(yàn)并經(jīng)焦磷酸測(cè)序驗(yàn)證，兩種方法檢測(cè)結(jié)果，兩者完全相符。CYP3A4* 1G擴(kuò)增酶切見圖1，焦磷酸測(cè)序見圖2。

M為50bp DNA Marker; 1、2、8、9泳道為CC型野生純合子，4、5、6泳道為CT型雜合子，3、7泳道為TT型突變純合子。圖1　CYP3A4* 1G擴(kuò)增酶切后電泳結(jié)果圖

圖A、B、C分別為CC、CT、TT基因型，突變位點(diǎn)在189位圖2　CYP3A4* 1G 3種基因型毛細(xì)管電泳測(cè)序圖

3.2基因型分布與不良反應(yīng)

2013－01～2015－09共收集符合要求的作紫杉醇化療的乳腺癌患者血樣130例，經(jīng)檢測(cè)，CC型59例，CT型65例，TT型6例，由于TT基因型例數(shù)太少，因而將CT型與TT型合并計(jì)算，其基因型分布及不良反應(yīng)情況經(jīng)卡方檢驗(yàn)見表1。

表1　CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇不良反應(yīng)關(guān)系發(fā)生率

由表1可見，兩組不良反應(yīng)差異沒有顯著性(P＞0.05)。

4　討論

我國的乳腺癌患者逐年上升，如何在化療時(shí)減少不良反應(yīng)的發(fā)生是醫(yī)生和藥師的責(zé)任。有文獻(xiàn)報(bào)道紫杉醇血藥濃度與腫瘤治療效果及不良反應(yīng)有關(guān)［4］。而CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇藥物代謝無關(guān)［5］。本研究顯示CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇的不良反應(yīng)也無關(guān)。因此我們應(yīng)從其他方面研究個(gè)體血藥濃度與腫瘤治療效果及不良反應(yīng)的關(guān)系，通過其他措施的應(yīng)用來探討和減少不良反應(yīng)的發(fā)生，比如可以進(jìn)一步探討用紫杉醇注射液之前，用止吐藥與減輕患者的不良反應(yīng)的關(guān)系，以此來降低不良反應(yīng)的發(fā)生率、提高患者的生存質(zhì)量，延長生存期。

參考文獻(xiàn):

［1］肖昌瓊，周宏瀕.細(xì)胞色素P450藥物氧化酶基因多態(tài)性與乳腺癌易感性研究進(jìn)展［J］.中國腫瘤，2009，18(1) : 38

［2］Maria P，Elisa G，Aldo C，et al.Cytochrome 450 1B1 (CYP1B1) polymorphisms associated with response to docetaxel in Castration－resistant prostate cancer (CRPC) patients［J］.BMC Cancer，2010 (10) : 511

［3］李俊主編.臨床藥理學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2013: 150

［4］劉加濤，孫國平，陳小歡，等.紫杉醇用于非小細(xì)胞肺癌的藥代動(dòng)力學(xué)與療效、毒性反應(yīng)的關(guān)系研究［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(9) : 1253

［5］荊洪英，國玉芝.CYP3A4* 1G基因多態(tài)性與紫杉醇血藥濃度的關(guān)系研究［J］.中國藥房，2015，26(8) : 1063－1065

(收稿日期:2015－12－17)

通訊作者:荊洪英(1965～)女，黑龍江雞西人，碩士，主任藥師，碩士研究生導(dǎo)師。E－mail : Wjinghongying@126.com

作者簡(jiǎn)介:季方茹(1963～)女，黑龍江望奎人，學(xué)士，主管藥師。

基金項(xiàng)目:①2013年度黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，編號(hào): 12531683。

中圖分類號(hào):R285

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

文章編號(hào):1008－0104(2016) 02－0007－02