張　煒，王英萍，馬守江，管麗麗

?

HPLC法測定復(fù)方川麥滴丸中阿魏酸的含量

張煒，王英萍，馬守江＊，管麗麗

［關(guān)鍵詞］復(fù)方川麥滴丸；阿魏酸；高效液相色譜法；質(zhì)量控制

［作者單位］264002山東煙臺(tái)，解放軍107醫(yī)院（張煒，王英萍，馬守江，管麗麗）

復(fù)方川麥滴丸是筆者所在醫(yī)院臨床應(yīng)用多年的經(jīng)驗(yàn)方，此方根據(jù)中醫(yī)學(xué)“急則治其標(biāo)”的治則組方，由川芎、當(dāng)歸、紅花、麥冬四味藥材組成，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效。用于治療心血瘀阻證的冠心病及心絞痛、冠脈硬化、胸悶、胸痛。本處方在經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，根據(jù)中醫(yī)活血化瘀理論及冠心病的發(fā)生、發(fā)展機(jī)理，中醫(yī)中藥對(duì)該病的治療原則，應(yīng)用正交設(shè)計(jì)法，以擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加血流量及增強(qiáng)心肌收縮力為指標(biāo)，篩選而成。

復(fù)方川麥滴丸中君藥川芎來源于傘形科植物川芎（Ligusticumnanxiong Hort）的干燥根莖，性味辛溫，歸心包、肝、膽經(jīng)。辛溫香竄，性善走散，上行下達(dá)，既活血，又行氣，有“血中氣藥”之稱。臣藥當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸（Angelica Sinensis（OLiv）Diels）的干燥根，性味甘、辛、溫，歸心、肝、脾經(jīng)［1］。有補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，活血止痛之功。與川芎為伍，使之功效倍增。麥冬為佐藥，使川芎活血祛瘀，溫經(jīng)行氣，通絡(luò)止痛而無耗津傷液之弊，緩解了川芎過溫過燥之性。阿魏酸是川芎、當(dāng)歸中的有效成分，具有多種生物活性，如抗氧化、抗血栓、降血脂、抗自由基、抗突變和防癌等作用［2－4］。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定該制劑中阿魏酸的含量，以此對(duì)該藥品的質(zhì)量進(jìn)行控制［5-10］，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　儀器與試劑

1.1儀器島津LC－10AT液相色譜儀，梅特勒－托利多電子天平。

1.2試劑阿魏酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110773－201012，純度：99.6%）；復(fù)方川麥滴丸（解放軍第107醫(yī)院制劑室，批號(hào)：110506、110507、110508）；甲醇為色譜純（天津博迪化工股份有限公司）；水為純化水；醋酸為分析純（煙臺(tái)雙雙化工有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Inertsil ODS－3 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相：5%醋酸－甲醇（75∶25）；流速1.2 ml/min；檢測波長320 nm；柱溫35℃，進(jìn)樣量：20 μl。在此色譜條件下，樣品中的阿魏酸能達(dá)到基線分離，陰性對(duì)照液中色譜峰對(duì)測定無干擾。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液取本品5丸，精密稱定，置小燒杯中，加0.05 mol/L鹽酸溶液10 ml，搖勻，定量移至分液漏斗中，加入乙酸乙酯50 ml（15、15、10、10 ml）分4次提取，合并乙酸乙酯液，用0.05 mol/L鹽酸溶液20 ml洗滌1次。水浴蒸干乙酸乙酯液，加甲醇溶解于25 ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，備用。結(jié)果見圖1 B。

2.2.2對(duì)照品溶液精密稱取阿魏酸對(duì)照品約6 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)液。精密量取標(biāo)準(zhǔn)液5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得阿魏酸對(duì)照品溶液（0.012 mg/ml），備用。結(jié)果見圖1A。

2.2.3陰性供試品溶液取不含當(dāng)歸、川芎藥材的樣品5丸，按供試品溶液的配制方法制備陰性供試品溶液，備用。結(jié)果見圖1C。

2.3線性關(guān)系考察精密吸取2.2.2項(xiàng)下的阿魏酸對(duì)照品溶液適量，制成濃度為0.015、0.018、0.021、0.024、0.027、0.030、0.033、0.036 mg/ml的系列樣品，分別進(jìn)樣20 μl，測定峰面積，以峰面積為X軸，濃度為Y軸作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝2.14×10－8X＋0.00052，相關(guān)系數(shù)r＝0.9987，線性范圍15～36 μg/ml。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液20 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測得峰面積分別為：562935、561138、562375、557878、557962，平均峰面積：560457.6，RSD＝0.43%，表明儀器精密度良好。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的供試品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定阿魏酸峰面積，平均峰面積為949727，RSD為1.05%，由此看出，提取及測定方法有較好的重復(fù)性。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果阿魏酸峰面積的RSD為0.44%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取三個(gè)已知濃度的供試品溶液各三份，再分別加入已知含量的阿魏酸對(duì)照品，對(duì)照品的加入量控制在供試品含量的80%、100%、120%，搖勻，備用。吸取加樣供試液20 μl，進(jìn)樣測定，結(jié)果見表1。

2.8樣品中阿魏酸含量測定按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下的色譜條件測定3批樣品（批號(hào)：110506、110507、110508），測得阿魏酸含量分別為0.1082 mg/丸、0.1024 mg/丸、0.0920 mg/丸。

圖1　高效液相色譜圖

表1　加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3　討論

3.1流動(dòng)相的選擇本試驗(yàn)選取了乙腈－水、甲醇－乙腈－水、乙腈－0.5%冰醋酸（28∶72）、乙腈－0.1%磷酸（17∶83）、5%醋酸－甲醇（75∶25）等多種流動(dòng)相進(jìn)行比較，并考察了不同流動(dòng)相、不同比例對(duì)各峰之間的分離度、峰形及出峰時(shí)間的影響，最終確定5%醋酸－甲醇（75∶25）作為流動(dòng)相，各峰之間分離效果好，柱效高。

3.2檢測波長的選擇經(jīng)紫外掃描，阿魏酸對(duì)照品的最大吸收波長為310 nm，在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，復(fù)方樣品中的阿魏酸在320 nm波長條件下與其他峰分離良好，且峰形較好，故筆者選擇320 nm作為復(fù)方川麥滴丸中阿魏酸的檢測波長。

3.3樣品處理過程阿魏酸為3－甲氧基－4羥基肉桂酸，能溶于醇、熱水和乙酸乙酯，故選擇乙酸乙酯為提取溶媒。阿魏酸在酸性環(huán)境下，在水中的溶解度降低，所以在實(shí)驗(yàn)中加入0.05 mol/L鹽酸溶液酸化成游離型，以利于乙酸乙酯的提取。經(jīng)實(shí)驗(yàn)用50 ml乙酸乙酯（15、15、10、10 ml）分4次提取即可使阿魏酸提取完全。為除去水中的雜質(zhì)，最后用0.05 mol/L鹽酸溶液20 ml洗滌1次，從圖譜可以看出雜質(zhì)峰很小。

參考文獻(xiàn)

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部［S］.北京中國醫(yī)藥科技出版社，2010：125.

［2］趙東平，楊文鈺，陳興福.阿魏酸的研究進(jìn)展［J］.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2008，19（8）：1839－1841.

［3］胡益勇，徐曉玉.阿魏酸的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展［J］.中成藥，2006，28（26）：253－255.

［4］馬逢時(shí)，李家明，李傳潤，等.阿魏酸衍生物及其生物活性［J］.藥學(xué)進(jìn)展，2008，32（8）：345－351.

［5］莊蘇，郭利民，鐘世華.高效液相色譜法測定活血止痛膠囊中阿魏酸的含量［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（5）：7－8.

［6］陳阿麗，楊永霞，梁生旺.高效液相色譜法測定婦康寧片中阿魏酸的含量［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（28）：71－73.

［7］朱德杰.高效液相色譜法測定女金丸中阿魏酸的含量［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（8）：1182－1183.

［8］唐力英，王祝舉，赫炎，等.高效液相色譜法測定當(dāng)歸中阿魏酸的含量［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，12（2）：14－15.

［9］李樹國.反相高效液相色譜法測定精制冠心顆粒中阿魏酸的含量［J］.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，34（1）：159－161.

［10］郝影霞，王逢春，王焱.高效液相色譜法測定活血清腦丸中阿魏酸的含量［J］.解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24（7）：29－31.

［2015-07-14收稿，2015-08-11修回］

［本文編輯：劉一洋］

［通訊作者］馬守江，Email：msj107@163.com

DOI：10.14172/j.issn1671-4008.2016.01.023

［中圖分類號(hào)］R914.1

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］B