宋　寧，張蜀瀾，胡朝軍，鄧垂文，李　萍，白依娜，李麗君，董曉娟，吳子燕，甘曉丹，史艷萍，李永哲，張奉春

(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，風(fēng)濕病學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100730)

抗磷脂抗體(antiphospholipid antibodies，APLs)是一組作用于磷脂、磷脂結(jié)合蛋白或兩者復(fù)合物的自身抗體。APLs對抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome，APS)的診斷、鑒別診斷具有重要的臨床意義。根據(jù)2006年悉尼國際分類標(biāo)準(zhǔn)[1]，APS診斷的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)包括IgG型和(或)IgM型的抗心磷脂抗體(anticardiolipin antibodies，ACL)和抗β2糖蛋白I(anti-β2-Glycoprotein I，anti-β2GPI)抗體，以及狼瘡抗凝物(lupus anticoagulant，LA)。由于APLs存在顯著異質(zhì)性，檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化程度較低，不同實(shí)驗(yàn)室間檢測結(jié)果一致性較差，在一定程度上限制了APLs檢測的臨床應(yīng)用和對于APS診治結(jié)果的進(jìn)一步認(rèn)識[2]。為了解全國APLs檢測現(xiàn)狀，驗(yàn)證各臨床實(shí)驗(yàn)室檢測質(zhì)量，本研究對2013年全國116家臨床實(shí)驗(yàn)室APLs(ACL、anti-β2GPI)檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以發(fā)現(xiàn)問題，改進(jìn)并提高APLs檢測質(zhì)量。

材料和方法

對象

由衛(wèi)生公益性行業(yè)科研專項(xiàng)“風(fēng)濕免疫病診療關(guān)鍵技術(shù)臨床推廣及轉(zhuǎn)化應(yīng)用研究”項(xiàng)目組發(fā)布關(guān)于開展2013年全國實(shí)驗(yàn)室自身抗體檢測比對通知，實(shí)驗(yàn)室自愿報名參加本次多中心抗磷脂抗體的檢測。

方法

比對品的制備：比對品由“項(xiàng)目組”研制，收集自身免疫性疾病患者血清，盡量減少混合血清；所有血清進(jìn)行過濾滅菌預(yù)處理，保證運(yùn)輸穩(wěn)定性；采用第三方質(zhì)控血清進(jìn)行結(jié)果控制，采用市場主流試劑供應(yīng)商進(jìn)行聯(lián)合檢測，選取各項(xiàng)目所有試劑檢測結(jié)果一致的血清配制成高中低范圍組合的比對品。

樣品發(fā)放與回報：抗磷脂抗體包含ACL和抗β2GPI抗體，共計(jì)1組5支血清。比對樣品編號如下：樣品201、202、203、204和205，其中201、203和204為ACL抗體和抗β2GPI抗體雙陽性，樣品202和205為雙陰性。比對品經(jīng)快遞郵寄至各報名參加的實(shí)驗(yàn)室，在規(guī)定時間內(nèi)完成樣品檢測并對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)回報至項(xiàng)目組，以提高效率及減少文本報告差錯。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用Excel軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。因檢測比對樣品的方法不同，僅對定性結(jié)果采用正確率(回報結(jié)果正確實(shí)驗(yàn)室數(shù)/參加該項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室總數(shù))進(jìn)行描述性評價。

陽性符合率=回報陽性結(jié)果實(shí)驗(yàn)室數(shù)之和/回報各陽性比對品質(zhì)評結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室總數(shù)×100%，陰性樣品符合率=回報陰性結(jié)果實(shí)驗(yàn)室數(shù)之和/回報各陰性比對品質(zhì)評結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室總數(shù)×100%。符合率大于80%，認(rèn)為檢測結(jié)果較理想。

結(jié)　　果

實(shí)驗(yàn)室分布

全國參加APLs室間比對的實(shí)驗(yàn)室共116家，主要集中在北京、廣東、山東；遍布4個直轄市，24個省自治區(qū)(表1)，可以代表全國抗磷脂抗體的檢測情況。其中，三級甲等綜合醫(yī)院97家(83.6%)，三級其他等級綜合醫(yī)院7家(6.0%)，二級甲等醫(yī)院4家(3.5%)，企業(yè)實(shí)驗(yàn)室8家(6.9%)。

ACL抗體和抗β2GPI抗體比對品檢測結(jié)果

參加ACL抗體(表2)和抗β2GPI抗體檢測的實(shí)驗(yàn)室分別為107家和63家。ACL抗體及抗β2GPI抗體比對品檢測結(jié)果陽性符合率分別為96.6%和98.4%，陰性符合率分別為99.5%和100%。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是檢測ACL抗體和抗β2GPI抗體的主要方法，但采用ELISA方法檢測ACL抗體并回報定量結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室僅有66家，占回報結(jié)果實(shí)驗(yàn)室總數(shù)的61.7%(66/107)。63家實(shí)驗(yàn)室檢測抗β2GPI抗體均采用ELISA方法，其中比對樣品201、202、203、205符合率均為100%(63/63)，比對樣品204符合率為95.2%(60/63)。另外，對不同ELISA試劑廠家檢測ACL抗體定量結(jié)果進(jìn)行比較(表3)，檢測結(jié)果波動較大。

表1　2013年參加全國抗磷脂抗體檢測的實(shí)驗(yàn)室分布

討　　論

APLs作為APS診斷的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，已在臨床中廣泛應(yīng)用。由于APLs檢測方法、試劑等標(biāo)準(zhǔn)化程度較低，從而導(dǎo)致APLs在不同實(shí)驗(yàn)室間的檢測結(jié)果差異較大。在1項(xiàng)多中心研究中，5種不同的ACL抗體和抗β2GPI抗體檢測試劑(包括ELISA和化學(xué)發(fā)光法)間的一致性較差[3]。澳大利亞病理家學(xué)會2009至2011年的室間質(zhì)評結(jié)果顯示，LA(dRVVT法)的一致性較好(變異系數(shù)為10%～20%)，其余APLs檢測的變異系數(shù)可高達(dá)50%～100%[4]。因此，了解國內(nèi)APLs的檢測情況，建立室間質(zhì)量評價體系，對促進(jìn)不同實(shí)驗(yàn)室之間檢測結(jié)果的可比性、提高國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室APLs檢測的整體水平具有重要意義。

本次全國APLs比對分析中，ACL抗體檢測結(jié)果的陽性符合率為96.6%，陰性符合率為99.5%；抗β2GPI抗體檢測結(jié)果的陽性符合率為98.4%，陰性符合率為100%。ELISA作為目前國內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室檢測ACL抗體、抗β2GPI抗體的主要方法，在本次比對中分別占96.3%(103/107)、100%(63/63)，但ACL抗體僅有66家實(shí)驗(yàn)室回報了定量檢測結(jié)果。對采用5家不同試劑廠商提供的ELISA定量檢測ACL抗體的結(jié)果分析中，變異系數(shù)為31.0%～90.0%。分析原因可能與包被抗原的濃度、抗原的純化工藝、蛋白質(zhì)或磷脂的污染、緩沖液的離子濃度及人工操作等有關(guān)。因此，為加強(qiáng)ACL抗體和抗β2GPI抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)化，2004年第四屆歐洲抗磷脂抗體論壇[5]、第13屆抗磷脂抗體國際大會[4]都對APLs檢測提出相應(yīng)的要求和檢測共識，如APLs每個檢測樣品需復(fù)孔檢測、推薦使用外部質(zhì)控品驗(yàn)證檢測質(zhì)量、標(biāo)準(zhǔn)曲線采用多點(diǎn)定標(biāo)、可接受的批內(nèi)和批間變異系數(shù)為20%。同樣，引入新的APLs檢測方法，如自動化程度高、重復(fù)性好的化學(xué)發(fā)光及多功能液態(tài)懸浮芯片等技術(shù)，將有力于推進(jìn)APLs檢測的標(biāo)準(zhǔn)化。然而，本研究116家實(shí)驗(yàn)室中僅有57家(49.1%)同時參加ACL抗體和抗β2GPI抗體的檢測；且本次全國比對研究未對APLs的各亞型進(jìn)行分析，根據(jù)2006年APS悉尼國際分類標(biāo)準(zhǔn)，IgG、IgM型的ACL抗體和抗β2GPI抗體均為APS的診斷標(biāo)準(zhǔn)。但由于以往一直認(rèn)為IgG型APLs與疾病相關(guān)性更強(qiáng)[6]。并且由于國內(nèi)未單獨(dú)設(shè)置針對APLs不同亞型的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)，因此目前國內(nèi)較多臨床實(shí)驗(yàn)室僅僅開展IgG型或多克隆的IgG/IgM/IgA型APLs檢測。而不同亞型的APLs對APS的診斷效能和臨床表現(xiàn)(如血栓事件、病態(tài)妊娠等)具有不同的價值[7-11]。因此，同時檢測不同亞型的APLs有助于APS的診斷、及時診療等。

表2　不同方法檢測抗心磷脂抗體符合率

表3　不同廠家酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒檢測抗心磷脂抗體結(jié)果比較

a以中位數(shù)(最小值～最大值)表示；b以均數(shù)(最小值～最大值)表示；廠家4樣品僅被應(yīng)用2次，c為實(shí)際檢測值；NA：實(shí)驗(yàn)室樣品數(shù)量小無法進(jìn)行變異系數(shù)統(tǒng)計(jì)

綜上所述，通過本次APLs的全國室間質(zhì)評，了解APLs在各臨床實(shí)驗(yàn)室的檢測現(xiàn)狀，發(fā)現(xiàn)了存在的問題。如何實(shí)現(xiàn)APLs檢測標(biāo)準(zhǔn)化是一個亟需解決的問題。

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