劉　濤，伍利華，黃　英，李鵬程，張文文，徐玉玲

（1.成都大學，四川成都610106；2.四川新中方醫(yī)藥科技股份有限公司，四川廣元628000）

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基于光譜法的清腦復(fù)神液指紋圖譜研究

劉濤1，伍利華1，黃英2，李鵬程1，張文文1，徐玉玲1

（1.成都大學，四川成都610106；2.四川新中方醫(yī)藥科技股份有限公司，四川廣元628000）

摘要：為建立清腦復(fù)神液的紫外及紅外指紋圖譜評價方法，采用紫外可見分光光度計和紅外光譜儀分別測定20批清腦復(fù)神液，建立清腦復(fù)神液的對照紫外及紅外指紋圖譜，并采用相關(guān)系數(shù)法計算清腦復(fù)神液樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度。在紫外指紋圖譜中，含量符合規(guī)定的樣品，其紫外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.995以上，而含量不符合規(guī)定的4批樣品，則相似度＜0.993；紅外指紋圖譜中，含量符合規(guī)定的樣品，其紅外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.990以上，而含量不符合規(guī)定的4批樣品，則相似度＜0.980。該方法可用于腦復(fù)神液的質(zhì)量評價，其相似度值的大小可作為清腦復(fù)神液質(zhì)量的評價指標。

關(guān)鍵詞：清腦復(fù)神液；質(zhì)量評價；紫外指紋圖譜；紅外指紋圖譜

0　引言

清腦復(fù)神液載于WS3-B-1838——1994《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》[1]（第九冊），是由人參、黃芪、當歸、鹿茸（去皮）、菊花、薄荷、黃芩、黃柏等48味藥材組成。具有清心安神，化痰醒腦，活血通絡(luò)的功效，臨床用于治療神經(jīng)衰弱，失眠，頑固性頭痛，腦震蕩后遺癥所致頭痛、眩暈、健忘、失眠等癥[1]。中藥指紋圖譜是指中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后采用一定的分析手段，得到能夠標示其化學特征的色譜圖或光譜圖[2]。目前指紋圖譜技術(shù)已成為國際公認的中藥及其復(fù)方質(zhì)量控制的重要手段[3]，同時對中草藥的適用性也得到了越來越多發(fā)達國家的認可[4-5]。目前，部頒標準僅建立了大黃酚與丹參酮IIA的薄層鑒別，本課題在前期研究中，增加了枳殼、葛根、赤芍的薄層鑒別項以及鹽酸小檗堿、總黃酮的含量測定項。然而，清腦復(fù)神液為中藥大復(fù)方品種，僅幾項薄層鑒別及兩項含量測定，還不足以確保其質(zhì)量。為更好地監(jiān)控和評價本品的質(zhì)量，本研究采用紫外及紅外指紋圖譜的分析方法，計算清腦復(fù)神液樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜的相似度[6]，以期探索清腦復(fù)神液的紫外及紅外指紋圖譜與其質(zhì)量之間的內(nèi)在聯(lián)系，建立清腦復(fù)神液的紫外及紅外指紋圖譜質(zhì)量評價方法，為大復(fù)方中藥的質(zhì)量控制研究提供新的思路和手段。

1　儀器與材料

UV-2300型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；PE spectrum 2紅外光譜儀（天津博天勝達科技發(fā)展有限公司）；FW-5壓片機（天津博天勝達科技發(fā)展有限公司）；瑪瑙研缽；溴化鉀（光譜純，天津市光復(fù)精細化工研究所）。

清腦復(fù)神液20批，均來自四川中方制藥有限公司。本課題前期對其鹽酸小檗堿及總黃酮含量進行了測定，并規(guī)定了限度。其中16批樣品符合規(guī)定（批號為131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131152，140337，140338，140339，140341，140342，140344，其中131117，131126，131252，140337含量較高），4批樣品不符合規(guī)定（批號為140340，140343，140345，140346）。

2　方法與結(jié)果

2.1紫外指紋圖譜

2.1.1測試條件

以15%的乙醇調(diào)整基線并作為參比液進行紫外光譜測定，設(shè)定掃描波長為200～900 nm，掃描速度200nm/min，狹縫寬1.5nm，采樣間隔1nm，自動切換波長340nm。

2.1.2精密度試驗

同一批清腦復(fù)神液（批號：140337），取1份按照“2.1.1”項下的測試條件連續(xù)測定6次，所得紫外譜線在298，338，465，550，650nm處吸光度的RSD%分別為1.76%，0.69%，0.39%，1.93%，1.88%，均＜3%，表明儀器精密度良好。

2.1.3穩(wěn)定性試驗

取同一清腦復(fù)神液（批號：140337）按照“2.1.1”項下的測試條件，每隔1h測定1次，結(jié)果5 h內(nèi)所得紫外譜線在298，338，465，550，650 nm處吸光度的RSD%分別為1.74%，0.66%，1.73%，1.55%，1.93%，均＜3%，表明樣品在5h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.4重復(fù)性試驗

同一批清腦復(fù)神液（批號：140337），取6份按照“2.1.1”項下的測試條件測定，所得紫外譜線在298，338，465，550，650 nm處吸光度的RSD%分別為1.98%，0.92%，1.82%，1.56%，1.67%，均＜3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.5清腦復(fù)神液紫外光譜采集

取20批清腦復(fù)神液樣品，按照“2.1.1”項下的測試條件分別測定，其紫外光譜疊加圖如圖1所示。

圖1　20批清腦復(fù)神液紫外光譜疊加圖

2.1.6對照紫外指紋圖譜的建立

在進行相似度分析之前，先建立清腦復(fù)神液的對照紫外指紋圖譜，選擇在前期研究中含量符合規(guī)定的10批樣品（批號為：131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131252），以其吸收強度的平均值為對照指紋圖譜的吸收強度，最終得到的紫外圖譜如圖2所示。

圖2　清腦復(fù)神液對照紫外指紋圖譜

2.1.7樣品指紋圖譜相似度分析

將清腦復(fù)神液樣品的紫外圖譜與得到的對照紫外指紋圖譜進行相似度分析，采用相關(guān)系數(shù)法[7-8]進行計算，結(jié)果見表1?？梢钥闯?，采用相關(guān)系數(shù)法計算的相似度大小與樣品的質(zhì)量狀況密切相關(guān)。前期研究中，含量符合規(guī)定的樣品，其紫外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.995以上，且含量較高的4批樣品，其相似度均在0.999以上，而含量不符合規(guī)定的4批樣品，則其相似度＜0.993。

表1　清腦復(fù)神液紫外指紋圖譜相似度分析結(jié)果1）

2.2紅外指紋圖譜

2.2.1測試條件

用膠頭滴管取清腦復(fù)神液樣品一滴于瑪瑙研缽中，揮干，加入0.3g溴化鉀，研磨均勻，取適量研細后的粉末平鋪于紅外壓片模具中，以15 MPa壓力壓制2min，將制備好的樣片置于紅外光譜儀中測定紅外光譜，測定區(qū)域為450～4000cm-1。

2.2.2精密度試驗

同一批清腦復(fù)神液（批號：140338），取1份按照“2.2.1”項下的方法制備并連續(xù)測定6次，所得紅外譜線在3 392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm-1處透光率的RSD分別為2.06%，1.99%，1.45%，1.98%，2.38%，均＜3%，表明儀器精密度良好。

2.2.3穩(wěn)定性試驗

取同一清腦復(fù)神液（批號：140338）按照“2.2.1”項下方法制得供試片，放入干燥器內(nèi)保存，每隔1 h測定1次，結(jié)果5h內(nèi)所得紅外譜線在3392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm-1處透光率的RSD分別為1.76%，2.41%，2.05%，1.78%，1.68%，均＜3%，表明樣品在5h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4重復(fù)性試驗

同一批清腦復(fù)神液（批號：140338），取6份并分別按照“2.2.1”項下的方法壓片后測定，所得紅外譜線在3 392，2 391，1 646，1 394，1 054 cm-1處透光率的RSD分別為2.36%，2.01%，1.65%，1.58%，1.98%，均＜3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5清腦復(fù)神液紅外光譜采集

取20批清腦復(fù)神液樣品，按照“2.2.1”項下方法制備并分別測定，其紅外光譜疊加圖如圖3所示。

圖3　20批清腦復(fù)神液紅外光譜疊加圖

2.2.6對照紅外指紋圖譜的建立

在進行相似度分析之前，先建立清腦復(fù)神液的對照紅外指紋圖譜，選擇在前期研究中含量測定符合規(guī)定的10批樣品（批號為：131117，131118，131121，131122，131123，131124，131126，131128，131129，131252），以其吸收強度的平均值為對照指紋圖譜的吸收強度，最終得到的紅外圖譜如圖4所示。

圖4　清腦復(fù)神液對照紅外指紋圖譜

2.2.7樣品指紋圖譜相似度分析

將清腦復(fù)神液樣品的紅外圖譜與得到的對照紅外指紋圖譜進行相似度分析，采用相關(guān)系數(shù)法進行計算，結(jié)果見表2。前期研究中，含量符合規(guī)定的樣品，其紅外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.990以上，且含量較高的4批樣品，其相似度均在0.998以上；而含量不符合規(guī)定的4批樣品，其相似度則＜0.980，與紫外指紋圖譜相似度分析結(jié)果一致。

3　結(jié)束語

中藥指紋圖譜是基于對中藥物質(zhì)群整體作用的認識，可以較充分地反映出中藥復(fù)雜混合體系中各種化學成分分布的整體狀況，已廣泛應(yīng)用于中藥的質(zhì)量評價[9-10]。目前建立中藥指紋圖譜的方法主要有紫外光譜法[11]、紅外光譜法[12]、核磁共振法[13]、液相色譜法[14]、氣相色譜法[15]、毛細管電泳法[16]等。

表2　清腦復(fù)神液紅外指紋圖譜相似度分析結(jié)果

紫外光譜可反映出中藥中化學組分π→π*、n→π*及n→σ*等化學鍵信息，由于不同的中藥體系紫外吸收曲線具有不同指紋特征，故紫外光譜指紋圖譜可用于中藥及其制劑的質(zhì)量鑒別[6]。本試驗將清腦復(fù)神液樣品的紫外圖譜與得到的對照紫外指紋圖譜進行相似度分析，結(jié)果顯示，在前期研究中，含量符合規(guī)定的樣品，其紫外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.995以上，且含量較高的4批樣品，其相似度均在0.999以上，而含量不符合規(guī)定的4批樣品，其相似度則＜0.993?？梢姴捎米贤庵讣y圖譜對清腦復(fù)神液進行分析，其結(jié)果可以反映出樣品的質(zhì)量狀況，因此可應(yīng)用紫外指紋圖譜對清腦復(fù)神液質(zhì)量進行評價。

中藥紅外光譜可看作是多個純物質(zhì)的疊加，不同的中藥都有獨特的紅外光譜特征，因此紅外光譜在中藥中有較高的鑒別價值，只要復(fù)方中藥的質(zhì)和量上保持相對穩(wěn)定，紅外光譜就有一定的客觀性和可重復(fù)性[8]。本試驗將清腦復(fù)神液樣品的紅外圖譜與得到的對照紅外指紋圖譜進行相似度分析，結(jié)果，在前期研究中，含量符合規(guī)定的樣品，其紅外圖譜與對照圖譜的相似度均在0.990以上，且含量較高的4批樣品，其相似度均在0.998以上，而含量不符合規(guī)定的4批樣品，其相似度則＜0.980，與紫外指紋圖譜相似度分析結(jié)果一致。因此可采用紅外指紋圖譜對清腦復(fù)神液的質(zhì)量進行評價。

本研究中，盡管20批清腦復(fù)神液的紫外及紅外指紋圖譜的相似度均在0.9以上，且都比較相近，然而在前期研究中含量不符合規(guī)定的4批樣品與符合規(guī)定的樣品還是有較明顯的差別，這可能與生產(chǎn)中原藥材的質(zhì)量以及投料中缺藥有關(guān)，因此采用紫外及紅外指紋圖譜對清腦復(fù)神液的質(zhì)量控制具有一定的意義。

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（編輯：莫婕）

Study on the spectrum fingerprints of Qingnaofushen oral liquid

LIU Tao1，WU Lihua1，HUANG Ying2，LI Pengcheng1，ZHANG Wenwen1，XU Yuling1
（1. Chengdu University，Chengdu 610106，China；2. Sichuan Xinzhongfang Pharmaceutical Technologies Inc.，Guangyuan 628000，China）

Abstract:To establish the evaluation methodology of Qingnaofushen oral liquid by ultraviolet and infrared fingerprints，the ultraviolet and infrared diagrams for 20 batches of Qingnaofushen oral liquid were measured through an ultraviolet visible spectrophotometer and an infrared spectrometer. Then established the ultraviolet and infrared fingerprints by using common pattern and calculated the similarity by using correlation coefficient method. The similarity between the ultraviolet fingerprints and the control fingerprints of qualified samples was above 0.995 whereas that of the four unqualified batches was below 0.993. The similarity between the infrared fingerprints and the control fingerprints of the qualified samples was higher than 0.990 while that of the four unqualified batches was lower than 0.980. It is thus demonstrated that this method can be used to evaluate the quality of Qingnaofushen oral liquid and the similarity can be regarded as an evaluating indicator.

Keywords:Qingnaofushen oral liquid；quality evaluation；ultraviolet fingerprints；infrared fingerprints

作者簡介：劉濤（1976-），男，四川南充市人，研究員級高級工程師，博士，主要從事中成藥新藥開發(fā)及再評價工作。

基金項目：四川省經(jīng)信委產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究與開發(fā)基金項目（20141124）；四川省科技廳科技支撐計劃項目（2014SZ0139）

收稿日期：2015-09-14；收到修改稿日期：2015-10-20

doi：10.11857/j.issn.1674-5124.2016.02.014

文獻標志碼：A

文章編號：1674-5124（2016）02-0063-04