□孫威振 南陽理工學(xué)院生化學(xué)院

香芹中總黃酮提取工藝

□孫威振 南陽理工學(xué)院生化學(xué)院

黃酮類化合物作為一種作用十分明顯的自由基清除劑，能夠抑制細(xì)菌生長，保持維生素C在人體內(nèi)含量 的穩(wěn)定性，在醫(yī)藥、保健、食品方面中有著廣泛的應(yīng)用。本研究通過設(shè)計(jì)香芹黃酮類化合物提取實(shí)驗(yàn)，研究香芹葉中黃酮類化合物的提取方法，并測定其含量，探討香芹的利用價(jià)值。

香芹是傘型的草本植物，在全國各地廣泛種植，是居民日常生活常用的食材，也是世界上用的最廣的一種草藥。香芹中所含的黃酮類化合物具有降血壓、防止動(dòng)脈硬化、抗衰老等作用。

實(shí)驗(yàn)原料的準(zhǔn)備

本實(shí)驗(yàn)所用的香芹由輔導(dǎo)老師臧晉陪同采購自于南陽市農(nóng)貿(mào)市場，用自來水清洗，取葉片，經(jīng)60 ℃烘干后，粉碎過40目，貯存于棕色玻璃干燥器中，備用。

香芹葉中總黃酮提取的工藝流程

原料的預(yù)處理

從棕色瓶取出經(jīng)過粉碎后的香芹葉，用一定量的石油醚進(jìn)行脫脂，倒出濾液，晾干，保存于干燥瓶中，備用。

總黃酮的測定

1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

用萬分之一電子天平精確稱量0.015 0 g蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，倒入50 mL燒杯中，加入一定量的60%乙醇，將燒杯置于超聲波儀中使其快速溶解，使用冷水對目標(biāo)溶液進(jìn)行冷卻，將目標(biāo)溶液轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中進(jìn)行定容，充分混勻，該標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液濃度0.3 mg/mL。

用同一支吸量管吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別移入7只25 mL容量瓶中,每瓶中加入一管膠頭滴管的30%乙醇，搖勻后用移液管分別準(zhǔn)確加入5% NaNO20.75 mL，充分震蕩，靜置6 min后用移液管分別滴加0.75 mL 10%硝酸鋁溶液，充分震蕩，靜置6 min后，再分別加入10mL 4%氫氧化鈉溶液，充分震蕩，最后用乙醇定容7只容量瓶，充分震蕩后靜置12 min，在波長為510 nm處進(jìn)行不同濃度溶液的吸光度測量并記錄。建立平面直角坐標(biāo)系，吸光度為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)橫坐標(biāo)，將測定的數(shù)據(jù)進(jìn)行繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)方程為y=12.375x-0.001 9,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方程繪制當(dāng)R2=0.999 7的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

總黃酮的提取

用萬分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g倒入50 mL圓底燒瓶中，加入一定濃度的乙醇，放到設(shè)置好指定溫度的水浴鍋中，回流，一段時(shí)間后，取出，等溶液冷到室內(nèi)溫度，把回流液抽濾，再把抽濾后的溶液過濾，用玻璃棒引流到100 mL容量瓶中，并加入同樣濃度的乙醇定容。

單因素實(shí)驗(yàn)

1 乙醇濃度對香芹葉總黃酮得率的影響

用萬分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g置入5O mL圓底燒杯中，然后用不同濃度的乙醇溶液，以10%為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增,分別配置40%～80% 5種不同濃度的乙醇，然后將這5種不同濃度的乙醇每次用一種濃度加入到70 ℃的水浴鍋中，在回流裝置下提取時(shí)間為1 h結(jié)束后取出，冷卻到室內(nèi)溫度后，抽濾再過濾,將過濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同濃度的乙醇溶液對其進(jìn)行定容。將該容量瓶內(nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測定。

2 提取時(shí)間對香芹葉總黃酮得率的影響

用萬分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g置入5O mL圓底燒杯中，向其中加入60 mL濃度為60%的乙醇溶液，并在水溫為70 ℃的水浴鍋中進(jìn)行回流操作，在操作過程中需要按照不同的時(shí)間進(jìn)行提取，以0.5 h為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增，從0.5～2.5 h中選擇5個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行回流，回流結(jié)束后取出，冷卻到室內(nèi)溫度后抽濾再過濾,過濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同濃度的乙醇溶液對其進(jìn)行定容。將該容量瓶內(nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測定。

3 提取溫度對香芹葉總黃酮得率的影響

用萬分之一電子天平準(zhǔn)確稱取香芹葉粉末1.000 0 g倒入50 mL圓底燒杯中，加入60 mL 60%乙醇，具體來講以10 ℃為基礎(chǔ)進(jìn)行遞增，分別在50～90 ℃ 5個(gè)不同環(huán)境下的水浴鍋中進(jìn)行回流，在對其進(jìn)行1 h的處理之后完成回流操作，并且將其取出，冷卻到室內(nèi)溫度后抽濾再過濾，過濾操作后得到的溶液置入100 mL容量瓶中，再使用同濃度的乙醇溶液進(jìn)行定容。將該容量瓶內(nèi)的溶液取1 mL置入25 mL容量瓶中，根據(jù)試驗(yàn)的相關(guān)要求對這1 mL溶液也進(jìn)行試劑添加并進(jìn)行吸光度數(shù)值測定。

正交實(shí)驗(yàn)

通過單因素實(shí)驗(yàn)確定較為合理的因素范圍，比較各單因素條件影響，從提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度3個(gè)單因素條件中，分別選取3組較優(yōu)數(shù)據(jù)條件。設(shè)計(jì)L9（33）正交實(shí)驗(yàn)，探究芹菜葉中乙醇回流提取工藝，獲得最優(yōu)工藝條件，并驗(yàn)證最佳工藝提取條件。

結(jié)論與分析

本實(shí)驗(yàn)在本系輔導(dǎo)老師的指導(dǎo)下，筆者通過對乙醇濃度、提取時(shí)間、提取溫度這三個(gè)因素對提取香芹葉中總黃酮的影響,使用乙醇回流法提取法提取香芹葉總黃酮。建立在單因素實(shí)驗(yàn)的條件上,在乙醇濃度為70%、提取時(shí)間1.5 h、溫度80℃這個(gè)最適宜的反應(yīng)條件中,整個(gè)提取過程得到的總黃酮率是18.47 mg /g。