陳　群，羅文沈，吳愿如，吳雪梅

(深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518112)

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·論著·

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測的臨床可報(bào)告范圍的建立及評(píng)價(jià)

陳群，羅文沈，吳愿如，吳雪梅

(深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518112)

摘要:目的分析德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的靈敏度(FS)、最大允許稀釋度(MAD)、分析測量范圍(AMR)等，并建立ALT臨床可報(bào)告范圍(CRR)，為臨床提供可靠檢測結(jié)果。方法參照美國臨床和試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP6-A文件，選用覆蓋廠家聲明AMR的高、低值患者混合標(biāo)本配制系列等間距不同濃度標(biāo)本進(jìn)行ALT重復(fù)測定2次，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行AMR多項(xiàng)式回歸分析；選用5份較低濃度標(biāo)本進(jìn)行日間重復(fù)測定ALT，以相應(yīng)的變異系數(shù)與檢測均值關(guān)系確定FS；選用3份高濃度ALT標(biāo)本用生理鹽水進(jìn)行不同倍數(shù)稀釋后再測定，計(jì)算回收率，確定MAD，并結(jié)合FS建立CRR。結(jié)果應(yīng)用德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀檢測血清ALT的AMR為5.50～847.50 U/L，F(xiàn)S為3.698 U/L，MAD為1∶8，CRR為3.698～6 780.000 U/L。結(jié)論應(yīng)用德賽診斷試劑采用Beckman Dxc800生化儀進(jìn)行血清ALT檢測的AMR較廠家聲明的寬；所建立的CRR可滿足臨床常規(guī)需要。

關(guān)鍵詞:丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；評(píng)價(jià)研究；臨床可報(bào)告范圍

根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)化組織頒布的《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專項(xiàng)要求》(ISO15189)和中國《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》，對自建系統(tǒng)的主要方法學(xué)性能應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證或評(píng)價(jià)，證實(shí)其能達(dá)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)后才能用于臨床檢測。定量檢測項(xiàng)目需進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，包括準(zhǔn)確度、精密度、靈敏度(FS)、特異度、可報(bào)告范圍(CRR)和參考區(qū)間等[1]。本研究主要參照美國臨床和試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP6-A文件和文獻(xiàn)[2-4]對本試驗(yàn)室檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的自建系統(tǒng)的FS、最大允許稀釋度(MAD)、分析測量范圍(AMR)進(jìn)行研究，并由此建立CRR，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1儀器與試劑Beckman Dxc800生化分析儀、德賽ALT生化試劑(批號(hào)07120/00001206)和校準(zhǔn)品(591009910064)、Randox質(zhì)控品(批號(hào)27601、27602)等。

1.2試驗(yàn)操作及標(biāo)本要求對各種試驗(yàn)、儀器均嚴(yán)格遵守各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。確保儀器處于良好狀態(tài)。應(yīng)用Beckman Dxc800生化分析儀，使用德賽ALT生化試劑，經(jīng)校準(zhǔn)并質(zhì)控在控。試驗(yàn)所用標(biāo)本均來本院臨床科室，要求新鮮、膽紅素小于684 μmmol/L、無脂濁及溶血。

1.3AMR試驗(yàn)參照CSLI EP6-A文件，收集高ALT水平患者混合血清，要求超過廠家線性范圍20%～30%，離心后取上清液作為高值標(biāo)本(H)；以同樣方法收集低ALT水平患者混合血清作為低值標(biāo)本(L)。將H和L按20L+0H、19L+1H、18L+2H、17L+3H、16L+4H、15L+5H、14L+6H、12L+8H、10L+10H、8L+12H、6L+14H、5L+15H、4L+16H、3L+17H、2L+18H、1L+19H、0L+20H的配比關(guān)系配制得到17份試驗(yàn)標(biāo)本(A1～17)。每份標(biāo)本重復(fù)測定2次。記錄檢測結(jié)果。各種操作標(biāo)本采集后1 d內(nèi)完成。

1.4FS試驗(yàn)收集5個(gè)低濃度標(biāo)本分別標(biāo)記為B1～5(接近廠家線性范圍下限，B1經(jīng)56 ℃水浴60 min處理)，然后分裝，-21 ℃保存；每天1批，每批重復(fù)測定2次，連續(xù)測定10 d。FS指日間重復(fù)變異系數(shù)(CV)為20%時(shí)對應(yīng)檢驗(yàn)限樣品具有的平均濃度。

1.5MAD及CRR試驗(yàn)收集3個(gè)高濃度標(biāo)本(C1～3)，用生理鹽水分別進(jìn)行2、4、8、16倍稀釋，然后進(jìn)行檢測。記錄實(shí)測值。計(jì)算稀釋回收率(稀釋后實(shí)測值×100%/稀釋后預(yù)期值)，在90%～110%范圍內(nèi)確定MAD。CRR指患者標(biāo)本經(jīng)稀釋、濃縮或其他處理后向臨床所能報(bào)告的結(jié)果范圍。CRR下限為FS，上限為AMR上限×MAD。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行重復(fù)性誤差和多項(xiàng)式回歸分析[5-6]。設(shè)定重復(fù)性和線性允許誤差分別為5%和10%。重復(fù)性誤差分析公式：

2結(jié)果

2.1AMR試驗(yàn)結(jié)果A1～17標(biāo)本檢測CVr=2.46%，<5%設(shè)定目標(biāo)。以加入H相對量為X與實(shí)測均值為Y進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析得最適多項(xiàng)式為二次，與一次方程偏倚分析中A1、A2點(diǎn)超過設(shè)定10%允許偏差，在5.500～858.000 U/L呈非線性。經(jīng)繪制散點(diǎn)圖觀察到A17點(diǎn)存在明顯偏差后舍掉該點(diǎn)再進(jìn)行回歸修正分析得直接判斷為線性，見圖1。最適為一次多項(xiàng)式Y(jié)=44.687X+4.874，確定AMR為5.500～847.500 U/L。A1～A17標(biāo)本檢測結(jié)果見表1。

圖1　以H相對加入量為X軸與實(shí)測均值為

試驗(yàn)標(biāo)本測量結(jié)果1測量結(jié)果2測量均值差值A(chǔ)1(20L+0H)565.50-1A2(19L+1H)434142.002A3(18L+2H)959896.50-3A4(17L+3H)141138139.503A5(16L+4H)182176179.006A6(15L+5H)227232229.50-5A7(14L+6H)278272275.006A8(12L+8H)365362363.503A9(10L+10H)453465459.00-8A10(8L+12H)548555551.50-7A11(6L+14H)631622626.509A12(5L+15H)670663666.507A13(4L+16H)722728725.006A14(3L+17H)760752756.008A15(2L+18H)815822818.50-7A16(1L+19H)851844847.507A17(0L+20H)853863858.00-10

2.2FS試驗(yàn)結(jié)果將B1～5標(biāo)本重復(fù)檢測的CV(%)與實(shí)測均值作回歸分析得出最適方程為Y=-0.226X+8.218。將20%代入該方程得出FS為3.698 U/L。B1～5標(biāo)本檢測結(jié)果見表2。

表2　　B1～5標(biāo)本檢測結(jié)果

2.3MAD及CRR試驗(yàn)結(jié)果用生理鹽水作稀釋介質(zhì)時(shí)確定的MAD為1∶8，C1～3標(biāo)本檢測結(jié)果見表3。結(jié)合FS為3.698 U/L，AMR上限為847.500 U/L，MAD為1∶8，確定CRR為3.698～6 780.000 U/L。

表3　　C1～3標(biāo)本檢測結(jié)果

3討論

眾所周知，ALT是一項(xiàng)主要反映肝功能受損的靈敏指標(biāo)，輕微肝損傷即可明顯升高。臨床很多肝臟疾病均可導(dǎo)致血清ALT明顯升高，時(shí)常會(huì)超過1 000 U/L，甚至超出現(xiàn)有測定方法的測量范圍。故對ALT檢測系統(tǒng)分析性能的驗(yàn)證分析非常重要。目前，關(guān)于參考CLSI-EP系列文件，使用德賽診斷生化試劑采用Beckman Dxc800生化分析儀進(jìn)行血清ALT檢測的自建系統(tǒng)的分析性能驗(yàn)證和評(píng)價(jià)研究較少見，特別是臨床可報(bào)告范圍的建立和分析相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道更為罕見。而該分析性能是廣大檢驗(yàn)工作者最終能否向臨床發(fā)出可靠檢驗(yàn)報(bào)告的重要指標(biāo)之一。

本研究在AMR建立的研究中參照CLSI-EP6-A文件要求，采用了由高值和低值混合標(biāo)本按比例配成的覆蓋廠家聲明分析測量范圍(4～550 U/L)的17份等間距的不同濃度標(biāo)本，在所得數(shù)據(jù)線性偏倚分析中發(fā)現(xiàn)，A1、A2點(diǎn)偏倚超過設(shè)定10%允許偏差，說明其引入的誤差不能被接受。經(jīng)繪制散點(diǎn)圖直接觀察到A17點(diǎn)存在明顯線性偏倚，去掉A17點(diǎn)后進(jìn)行修正回歸處理得出最適為一次方程，在A1～16點(diǎn)范圍內(nèi)呈線性，從而確定AMR為5.50～847.50 U/L，較

李俊立等[4]報(bào)道的數(shù)據(jù)范圍窄，較田峰[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)范圍寬，可能與本研究使用的儀器、試劑、具體操作方法不同有關(guān)。

在探討FS時(shí)直接采用一系列低濃度患者標(biāo)本，與采用系列稀釋低濃度樣品的方法比較[8]，可避免由于稀釋操作或基質(zhì)效應(yīng)可能引起的各種誤差。

雖然本研究所建立的AMR較廠家聲明的數(shù)據(jù)范圍寬，但在臨床常規(guī)檢測中還是存在相當(dāng)多的超出847.500 U/L的標(biāo)本，還需進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后處理。這就涉及用何種稀釋介質(zhì)和最大允許稀釋度的問題。本研究參照試劑說明書，直接采用生理鹽水作為稀釋介質(zhì)。結(jié)果顯示，MAD為1∶8，且發(fā)現(xiàn)隨稀釋倍數(shù)增大所得回收率也增大。而朱愛萍等[9]報(bào)道用生理鹽水稀釋時(shí)在1∶3倍以內(nèi)與原倍血清測定結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)，且隨稀釋倍數(shù)增大所得回收率逐漸降低，筆者推測以上差異除與本研究采用不同的試劑、儀器、質(zhì)量管理目標(biāo)要求有關(guān)外，與試驗(yàn)所用的稀釋介質(zhì)引起基質(zhì)效應(yīng)的關(guān)系更大[10]。與姚少羽等[3]報(bào)道的結(jié)果也有區(qū)別，可能與本研究測定方法學(xué)不同有關(guān)。通過確定MAD，為在日常操作時(shí)對高水平標(biāo)本的稀釋提供了可靠依據(jù)。本研究結(jié)合FS、AMR和MAD，最后建立的CRR為3.698～6 780.000 U/L，可滿足臨床常規(guī)需要。

綜上所述，本研究通過分析德賽診斷生化試劑采用Beckman Dxc800生化分析儀進(jìn)行血清ALT檢測的自建檢測系統(tǒng)的AMR和CRR等相關(guān)性能，確定了該項(xiàng)目在本試驗(yàn)室日常檢測工作中的準(zhǔn)確性。同時(shí)也提醒廣大檢驗(yàn)工作者不同試驗(yàn)室檢測系統(tǒng)具體的分析性能也不同，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)對其進(jìn)行驗(yàn)證，以確保檢測結(jié)果可靠性[11]。

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Establishment and evaluation on the clinical reportable rang of serum alanine aminotransferase

ChenQun，LuoWenshen,WuYuanru,WuXuemei

(DepartmentofClinicalLaboratory,theSecondPeople'sHospitalofLonggang,ShenZhen,Guangdong518112,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the functional sensitivity, maximum allowable dilution, analytical measurement range and clinical reportable rang of the serum alanine aminotransferase (ALT) detected by Beckman Dxc800 automatic analyzer with the DiaSys diagnostic biochemistry reagent kits.MethodsAccording to the EP6-A document published in 2004 by American Clinical and Laboratory Standards Institution(CLSI),these samples with equal interval, proportional prepared with the low levels serum and the high levels serum and their concentration exceeding the range claimed by manufacture, were detected twice each.The results were registered and analyzed by the SPSS19.0 statistic software with polynomial regression analysis to determine the analytical measurement range. Five samples at the low concentration,which were prepared previously, were detected repeat at day interval. And the functional sensitivity was determined with combining the coefficient of variation and the average value. Three samples,diluted to different dilution ratio with physiological saline, were detected. The dilution recovery rate, which was required in the range of 90%-110%,was calculated to establish the clinical reportable rang by combining the Functional Sensitivity. ResultsThe analytical measurement range of the serum ALT detected by Beckman Dxc800 analyzer was 5.50-847.50 U/L,the runctional sensitivity was 3.698 U/L,the maximum allowable dilution was 1∶8 and the clinical reportable rang was 3.698-6 780.0 U/L.ConclusionThe analytical measurement range of the serum ALT detected by Beckman Dxc800 analyzer with the DiaSys diagnostic biochemistry reagent kits, was wider than that of being claimed by manufacture,the clinical reportable rang could meet the need of clinic.

Key words:alanine aminotransferase;evaluation study;clinical reportable rang

(收稿日期：2015-10-07)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.031

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)03-0362-03

作者簡介：陳群，男，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室技師管理研究。