王浩斌，沈　燕，張鳳岐

Study on drug resistance and drug resistance mechanism

of Acinetobacter baumannii in department of respiration ward

Wang Haobin,Shen Yan,Zhang Fengqi

(Affiliated First Hospital of Zhengzhou University,Henan 450052 China)

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呼吸科病房鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性及耐藥機(jī)制研究

王浩斌，沈燕，張鳳岐

Study on drug resistance and drug resistance mechanism

of Acinetobacter baumannii in department of respiration ward

Wang Haobin,Shen Yan,Zhang Fengqi

(Affiliated First Hospital of Zhengzhou University,Henan 450052 China)

摘要:[目的]分析我院呼吸科病房鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥現(xiàn)狀，探討其耐藥機(jī)制。[方法]應(yīng)用法國(guó)梅里埃VITEK2 微生物鑒定和藥物敏感系統(tǒng)對(duì)分離自呼吸科病房的86株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥物敏感分析；PCR法檢測(cè)Ⅰ類整合子分布情況。[結(jié)果]鮑曼不動(dòng)桿菌在痰液中的檢出率為80.23%，尿液8.14%，分泌物5.81%，血液3.49%，引流液2.33%；鮑曼不動(dòng)桿菌敏感率較高的是頭孢哌酮舒巴坦(100.00%)、米諾環(huán)素(100.00%)，其次是多黏菌素B(98.8%)、替加環(huán)素(97.7%)、亞胺培南(89.5%)，對(duì)氨芐西林的耐藥率為100.00%；Ⅰ類整合子在臨床分離的鮑曼不動(dòng)桿菌中檢出率較高。[結(jié)論]鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性強(qiáng)，耐藥譜廣，臨床上應(yīng)加強(qiáng)對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的實(shí)時(shí)檢測(cè)和預(yù)防控制。應(yīng)采取綜合措施如加強(qiáng)手衛(wèi)生知識(shí)的培訓(xùn)教育，提高手衛(wèi)生的依從性，加強(qiáng)痰液、分泌物等體液的引流，合理使用抗菌藥物等，以降低鮑曼不動(dòng)桿菌醫(yī)院感染的發(fā)生率。

關(guān)鍵詞:鮑曼不動(dòng)桿菌；耐藥性；整合子；耐藥機(jī)制；呼吸科

鮑曼不動(dòng)桿菌(Acinetobacter baumannii，AB)是不動(dòng)桿菌屬中最常見的革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界、人類的皮膚及呼吸道等處。該菌在醫(yī)院環(huán)境中分布廣泛并可長(zhǎng)期存活，在醫(yī)務(wù)工作人員手和各種醫(yī)療用具上的檢出率較高，是醫(yī)院(院內(nèi))感染的重要條件致病菌之一。由于抗生素的廣泛使用，鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性逐漸增加[1]。為了解呼吸科病房鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性，本研究對(duì)86例分離自該病區(qū)的鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥情況進(jìn)行分析，并采用PCR方法檢測(cè)其Ⅰ類整合子攜帶情況，以期探討鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制。

1材料與方法

1.1菌株來源86株鮑曼不動(dòng)桿菌來自2013年9月—2014年1月我院呼吸科病房病人的痰液、血液、引流液等86份標(biāo)本的分離培養(yǎng)中獲得。86株菌株在標(biāo)本中的分布見表1。

表1　86株鮑曼不動(dòng)桿菌的標(biāo)本來源

1.2細(xì)菌鑒定與藥物敏感實(shí)驗(yàn)細(xì)菌分離培養(yǎng)嚴(yán)格按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行，細(xì)菌鑒定與藥物敏感試驗(yàn)采用法國(guó)梅麗埃VITEK系統(tǒng)進(jìn)行。多重耐藥菌判斷標(biāo)準(zhǔn)按照2010年美國(guó)等對(duì)多藥耐藥菌共同提出的關(guān)于MDROs國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化定義建議(草案)[2]實(shí)行。用ATCC27853 銅綠假單孢菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn)全程質(zhì)量控制。

1.3方法

1.3.1模板質(zhì)粒DNA的提取采用吸附柱法提取細(xì)菌DNA，所有模板OD260/OD280比值均在1.8~1.9之間。

1.3.2Ⅰ類整合酶基因與ISCR1的檢測(cè)采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)Ⅰ類整合酶基因和ISCR1。 IntI1 擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s,52 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸10 min。引物序列見表2。

表2　PCR引物序列

1.3.3PCR產(chǎn)物分析取5 μL產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳，紫外成像儀拍照觀察。

2結(jié)果

2.1鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)抗菌藥物的耐藥情況(見表3)

表3　鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)抗菌藥物的耐藥情況(n=86)

2.2IntI1的檢測(cè)86株鮑曼不動(dòng)桿菌中IntI1陽(yáng)性菌56株，陽(yáng)性率65.1%；電泳結(jié)果如圖1。

圖1　PCR產(chǎn)物電泳圖

2.3Ⅰ類整合子陽(yáng)性菌株與陰性菌株耐藥情況比較(見表4)86株細(xì)菌中Ⅰ類整合子陽(yáng)性株多重耐藥率(3類或以上藥物)為87.5%，陰性株為26.7%，Ⅰ類整合子陽(yáng)性株的多重耐藥率顯著高于陰性株，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，說明Ⅰ類整合子的存在與多重耐藥性關(guān)系密切。

表4　整合子陽(yáng)性與陰性鮑曼不動(dòng)桿菌

3討論

鮑曼不動(dòng)桿菌是臨床常見的病原菌，近年來其耐藥性呈逐漸增加趨勢(shì)，其中多重耐藥、泛耐藥性更增加了臨床治療難度。國(guó)內(nèi)外曾報(bào)道過鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥株的暴發(fā)流行[3-6]，其耐藥及耐藥性播散機(jī)制也成為研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)。質(zhì)粒、整合子等可移動(dòng)遺傳元件通過介導(dǎo)耐藥基因的水平傳播導(dǎo)致細(xì)菌耐藥。整合子是一類重要的耐藥基因傳播元件，憑借其位點(diǎn)重組成分和整合酶基因成分將不同的耐藥基因盒整合在一起，介導(dǎo)耐藥基因在染色體、質(zhì)粒及轉(zhuǎn)座子之間的移動(dòng)，從而導(dǎo)致耐藥基因在不同細(xì)菌間的播散，引起細(xì)菌多重耐藥。整合子基本結(jié)構(gòu)包括5’CS、3’CS及二者之間的可變區(qū)。5’CS包括編碼整合酶的基因、整合子重組位點(diǎn)和可變區(qū)啟動(dòng)子；可變區(qū)可攜帶不同種類的耐藥基因盒，如：氨基糖苷類、甲氧芐啶類、β-內(nèi)酰胺類、氯霉素類等；3’CS包含qacE和sul1，分別編碼對(duì)季銨鹽類化合物和磺胺類耐藥。本調(diào)查分析后發(fā)現(xiàn)Ⅰ類整合子陽(yáng)性株多重耐藥性強(qiáng)于Ⅰ類整合子陰性株，說明Ⅰ類整合子在鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥性的形成中發(fā)揮重要作用。近兩年研究者發(fā)現(xiàn)插入序列共同區(qū)(ISCR1)作為重要的遺傳元件之一，也參與形成細(xì)菌多重耐藥性，ISCR以串聯(lián)形式與整合子相連，ISCR1與Ⅰ類整合子形成的復(fù)雜性Ⅰ類整合子值得研究。本病區(qū)86株鮑曼不動(dòng)桿菌80.23%來自痰標(biāo)本。提示該菌主要引起住院病人的下呼吸道感染，這與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7-8]。

醫(yī)院內(nèi)污染的器械及工作人員的手都可以是鮑曼不動(dòng)桿菌的傳播媒介[9-10]，提示應(yīng)加強(qiáng)診療器械的消毒滅菌，嚴(yán)格執(zhí)行手衛(wèi)生，提高手衛(wèi)生的依從性,阻斷傳播途徑，盡量避免鮑曼不動(dòng)桿菌的傳播對(duì)病人造成的傷害。

參考文獻(xiàn)：

[1]Gaynes R，Edwards JR.Overview of nosocomial infections caused by gram negative bacilli[J].Clin Infect Dis,2005,41(6):848-854．

[2]Magiorakos AP，Srinivasan A,Carey RB,etal.Multidrug-resistant,extensively drug-resistant and pandrug-resistant bacteria:an international expert proposal for interim standard definitions for acquired resistance[J].Clinical Microbiology and Infection，2012,18(3):268-281.

[3]Chen YS,Lin HH,Wu CH,etal.Colonization of a medical center in Southern Taiwan by epidemic strains of carbapenem and multidrug resistant Acinetobacter baumannii and the genetic organization of their Integrons[J].Jpn J Infect Dis，2009,62(2):155-157.

[4]Park S,Kim HS,Lee KM,etal.Molecular and epidemiological characterization of carbapenem-resistant acinetobacter baumannii innon-tertiary Korean hospitals[J].Yonsei Med J,2013，54(1)：177-182.

[5]張亞英，姜亦虹，沈黎,等．重癥監(jiān)護(hù)病房4例泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌肺部感染暴發(fā)[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20(12)：1794-1796.

[6]王輝,劉穎梅,陳民鈞,等.鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥機(jī)制的研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào),2003,25(5)：567-572.

[7]劉文思，易春梅，鄒明祥.2006年湘雅醫(yī)院鮑曼不動(dòng)桿菌臨床感染分布和耐藥性分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2007，14(6):1718-1720.

[8]黎敏,魯衛(wèi)平.鮑氏不動(dòng)桿菌感染分布及耐藥性變遷分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2008，37(3):264-265.

[9]Raka L.Lowbury lecture 2008：infection control and limited resources-searching for the best solutions[J].J Hosp Infect,2009,72：292-298．

[10]Mariwick C，Davey P.Care bundles:the holy grail of infections risk management in hospital[J].Curr Opin Infect Dis,2009,22:364-369.

(本文編輯李亞琴)

收稿日期：(2015-01-13；修回日期：2015-12-14)

作者簡(jiǎn)介王浩斌，主管護(hù)師，本科，單位：450052，鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院(內(nèi)科醫(yī)學(xué)部)；沈燕、張鳳岐單位：450052，鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院。

基金項(xiàng)目國(guó)家臨床重點(diǎn)?？平ㄔO(shè)項(xiàng)目。

中圖分類號(hào)：R471

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.034

文章編號(hào)：1009-6493(2016)01A-0105-03