程 昊

工作單位：030001山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

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RhoC蛋白在口腔鱗狀細胞癌中表達及意義

程 昊

工作單位：030001山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院

【摘要】目的 探討RhoC對于口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展以及侵襲的作用。方法 采用免疫組織化學(xué)法檢測72例口腔鱗癌組織和17例正?？谇唤M織標本。結(jié)果 在口腔鱗癌組織中RhoC蛋白表達相對正?？谇唤M織顯著升高。RhoC蛋白的表達隨著組織病理學(xué)分級的降低，臨床分期為晚期的，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中RhoC蛋白的表達明顯增高。其表達的強弱與性別、年齡、腫瘤部位無明顯相關(guān)性。結(jié)論 RhoC蛋白在口腔鱗狀細胞癌中的表達水平與組織的病理學(xué)分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】口腔鱗狀細胞癌；RhoC蛋白；表達

發(fā)生于口腔頜面部的癌癥80%以上的口腔癌為鱗狀細胞癌（OSCC），其來源于惡變的上皮組織。惡性度高，浸潤型生長、容易以頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，有文獻報道轉(zhuǎn)移率為60%～70%，術(shù)后患者五年生存率為50-60%。做好診斷治療，提高治愈率，延長患者的壽命以及生活質(zhì)量有重要意義。Rho（Ras homologue）全稱是Ras相似物，屬于小分子G蛋白超家族。1985年，從海兔體內(nèi)克隆出來。

本次實驗通過免疫組化SP法檢測RhoC蛋白在OSCC組織里的表達水平，通過實驗數(shù)據(jù)分析，探討RhoC蛋白在OSCC組織內(nèi)表達的臨床意義，為OSCC的診斷、治療和預(yù)后提供思路。

1　材料和方法

1.1標本來源

山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院2010年1月～2014年10月年間收治的經(jīng)手術(shù)切除口腔鱗癌組織標本72例，正?？谇唤M織標本17例（包括癌旁正常組織10例）。其中39例男性，33例女性，年齡22 ～84歲。根據(jù)世界衛(wèi)生組織口腔粘膜癌和癌前病損的組織分型（WHO，1997）［1］，實驗用OSCC標本分為一級（高分化）43例，二級（中分化）18例，三級（低分化）11例。

參考國際抗癌聯(lián)盟（UICC）2002年第六版TNM分期，72例OSCC標本分期結(jié)果：I期19例，II期27例，III期23例，IV期3例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，無轉(zhuǎn)移49例。

1.2主要試劑核試驗方法

一抗RhoC兔抗人多克隆抗體，北京博奧森。二抗Polink-1一步法聚合物免疫組化檢測劑，北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司pv-6000。二氨基聯(lián)苯胺（DAB顯色劑），北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。二甲苯溶液、無水酒精、梯度酒精溶液，3%雙氧水、蒸餾水、鹽酸酒精溶液、蘇木素溶液，伊紅溶液、PBS溶液由山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院病理科配制。

1.3結(jié)果判定

RhoC為胞漿顯色，呈棕黃色。免疫組化染色分析陽性對照為已知RhoC陽性標本，陰性對照為PBS替代一抗，請兩位高年資病理科醫(yī)師幫助閱片，按鏡下（x400）視野內(nèi)陽性細胞的染色深度，和所占面積百分數(shù)計分。面積小于5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，50%以上為3分。為著色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。累計分數(shù)不超過2分的判定為陰性，3以上為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，對比RhoC在OSCC組織和正常口腔組織的表達率，結(jié)合患者的臨床病理數(shù)據(jù)采用χ2檢驗，取P<0.05有統(tǒng)計意義。

2　結(jié)果

實驗顯示RhoC在OSCC組織中的陽性率為61.1%，明顯高于正常組織的17.6%（χ2=10.425，P<0.001）具有統(tǒng)計學(xué)意義。RhoC在高分化OSCC中陽性率為53.4%，中分化為83.3%，低分化為90.9%。三組數(shù)據(jù)的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，病理學(xué)分化低的陽性率越高。RhoC在男性O(shè)SCC患者的陽性率69.2%，在女性患者的陽性率75.7%，兩者之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.538）。RhoC在OSCC的表達與患者的性別沒有關(guān)系。在標本中RhoC的表達率，早期（Ⅰ+Ⅱ期）表達率為45.7%，晚期（Ⅲ+Ⅳ期）表達率為88.5%，兩者比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.01）。RhoC的表達率和患者的臨床分期呈正相關(guān)。RhoC蛋白在有淋巴轉(zhuǎn)移的實驗組里陽性率為73.9%，在沒有轉(zhuǎn)移的實驗組中陽性率是40.8%。兩者有明顯差異（P=0.009）。結(jié)果見表1。

表1　RhoC在OSCC表達情況

3　討論

1988年首次有人報道了RhoC的編碼序列，1993年Morris等研究［2］發(fā)現(xiàn)RhoC的編碼基因定位于1p13-p21，基因段全長6768bp。RhoC能夠調(diào)控肌動蛋白細胞骨架的重組，其中RhoC可以使肌動蛋白聚集張力纖維（stress fiber）以保持細胞形態(tài)，也可使整合素及其相關(guān)蛋白質(zhì)，如纖維連接蛋白（FN）聚集成粘連復(fù)合體［3-4］，和細胞骨架相關(guān)蛋白質(zhì)比如黏著斑激酶（FAK）、內(nèi)收蛋白（adducin）、樁蛋白（paxillin）和肌球蛋白輕鏈（MLC）的磷酸化直接有關(guān)而且參與細胞的移動調(diào)節(jié)。Hakem等［5］研究指出RhoC表達缺失不會抑制乳腺癌的生長，但是可以明顯抑制癌細胞轉(zhuǎn)移。

本次實驗通過對比發(fā)現(xiàn)，RhoC在口腔鱗狀細胞組織中陽性率為61.1%，在正常組織中陽性率為17.6%（χ2=10.425，P<0.001）兩者的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示在OSCC組織中RhoC存在異常增高現(xiàn)象。這與之前學(xué)者研究一致。

實驗結(jié)果顯示OSCC組織的病理學(xué)分化低、臨床分期晚期、有淋巴轉(zhuǎn)移的病例RhoC表達陽性率高。提示RhoC在OSCC轉(zhuǎn)移的過程中起重要作用。由于RhoC基因極少發(fā)生突變，只會出現(xiàn)過度表達，有望成為OSCC診斷依據(jù)之一，并且其表達水平可以做為患者疾病進展程度的評估指標之一，為治療計劃的指定、預(yù)后推測提供實驗數(shù)據(jù)支持。

4　結(jié)論

口腔鱗狀細胞癌中，RhoC高表達是口腔鱗狀細胞癌的病情進展的因素之一。

口腔鱗狀細胞癌中，RhoC的高表達與患者性別、年齡無明顯相關(guān)，但是與腫瘤的組織病理學(xué)分級、臨床分期和是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)，提示RhoC是促使腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移、浸潤的重要因素之一。

5　實驗截圖

見圖1和圖2。

圖1　RhoC陰性sp400

圖2　RhoC陽性 sp400

參考文獻

［1］于世鳳，汪說之.口腔組織病理學(xué)［M］.第5版，北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：342-343.

［2］Morris SW，Valentine MB，Kristein MN，et al.Reassignment of the human ARH9 RAS-refated gene to chromosome lp13-p31 ［J］.Genomics，1993，15（3）：677-679.

［3］Dutt P，Nguyen N，Tokoz D.Role of Lbc RhoGEF in 12/13-induced signals to RhoGTPase［J］.Cell Signal，2004，16（2）：201-209.

［4］Iwaki N，Karatsu K，Miyamoto M.Role of guanine nucleotide exchange factors for Rho family GTpases in the regulation of cellmorphology and actin cytoskeleton in fission yeast［J］.Biochem Biophys Res Commun，2003，312（2）：414-420.

［5］Hakem A，Sanchez-Sweatman O，You-Ten A.Rhoc is dispensable for embryogenesis and tumor initiation but essential for metastasis［J］.Genes Dev，2005，19（17）：1974-1979.

Expression of RhoC and its Significance in Oral Squamous Cell Carcinoma Progression

CHENG HaoGraduate School of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

【Abstract】

Objective To investigate effects of RhoC on occurrence，development and invasive of oral squamous carcinoma.Methods Seventy-two cases of oral squamous carcinoma tissues and 17 cases of normal oral tissue specimens were detected by immunohistochemistry.Results Expression of RhoC protein significantly increased compared with normal oral tissues in oral squamous carcinoma tissues，which reduced with the loss of histopathological grade.When its clinical stage was at late stage with lymph node metastasis expression of RhoC protein significantly enhanced.There was no significant correlation of strength of expression of RhoC protein with gender，age，tumor location.Conclusion Expression level of RhoC protein，tissue pathology classification，clinical stage and lymphatic metastasis are closely related in oral squamous cell carcinoma.

【Key words】Oral squamous cell carcinoma，RhoC，Expression

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2015.12.031

【中圖分類號】R781.5

【文獻標識碼】B

【文章編號】1674-9316（2015）12-0040-03