王康磊,劉緒舜,陳　堅(jiān)

(中國(guó)人民解放軍第81醫(yī)院血管外科，江蘇 南京 210002)

CDl51在肝門部膽管癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤進(jìn)展和預(yù)后的關(guān)系

王康磊,劉緒舜,陳堅(jiān)

(中國(guó)人民解放軍第81醫(yī)院血管外科，江蘇 南京 210002)

[摘要]目的探討CD151在肝門部膽管癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。方法采用免疫組化S-P法檢測(cè)38例肝門部膽管癌、11例膽管炎病變組織標(biāo)本中CDl51的表達(dá)，并分析其與肝門部膽管癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果CDl51在肝門部膽管癌組織中的表達(dá)高于膽管炎組織。肝門部膽管癌組織中CDl51的表達(dá)與其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和生存狀況密切相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論CD151在肝門部膽管癌組織中存在高表達(dá)，且其表達(dá)隨疾病進(jìn)展而升高，CD151的高表達(dá)也預(yù)示著肝門部膽管癌較差的預(yù)后，CD151的檢測(cè)可用于肝門部膽管癌的預(yù)后評(píng)估和治療指導(dǎo)。

[關(guān)鍵詞]CDl51；肝門部膽管癌； 臨床病理特征

跨膜4蛋白家族(transmembrane 4 superfamily, TM4SF)是近年來(lái)被廣泛研究的一個(gè)基因家族,其成員一個(gè)明顯生物學(xué)特征是可以與自身或其他膜蛋白如整合素、c-Met等酪氨酸激酶受體等結(jié)合形成四跨膜網(wǎng)絡(luò)，在細(xì)胞黏附、增殖、融合，腫瘤的生長(zhǎng)、遷移及血管生成中起重要作用。CD151是TM4SF重要成員之一，與腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),是TM4SF中惟一的癌基因[1-2],其表達(dá)產(chǎn)物在多種腫瘤細(xì)胞表面均有較高水平的表達(dá)[3]。目前CD151已在前列腺癌[4]、結(jié)腸癌[5]、肺癌[6]、胰腺癌[7]、腎透明細(xì)胞癌[8]等組織中發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)相關(guān)。肝門部膽管癌是指原發(fā)于膽囊管開(kāi)口以上，肝總管與左右二級(jí)膽管起始部中間，主要侵犯肝總管、 肝總管分叉部及左右肝管的膽管癌。研究[9-10]證實(shí)，近年來(lái)肝門部膽管癌的發(fā)病率明顯增加，且該病起病隱匿，發(fā)病時(shí)多已到晚期，手術(shù)根治切除率低，近年僅為18.0%～26.2%[11]，且遠(yuǎn)期療效不佳。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)CD151蛋白在肝門部膽管癌及膽管炎術(shù)后組織中的表達(dá)，分析其在肝門部膽管癌組織中高表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)合術(shù)后患者的臨床隨訪資料，對(duì)肝門部膽管癌根治手術(shù)后患者預(yù)后進(jìn)行判定，從進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療，提高肝門部膽管癌患者的術(shù)后早期治療效果。

1資料與方法

1.1組織標(biāo)本收集2008年7月至2010年7月中國(guó)人民解放軍第81醫(yī)院行根治性切除術(shù)的38例肝門部膽管癌患者，其中男24例，女14例。研究標(biāo)本取自膽管癌的原發(fā)灶,經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%中性多聚甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋,3 μm厚連續(xù)切片的石蠟切片。同時(shí)選取11例膽管炎性病變組織作為對(duì)照。肝門部膽管癌均經(jīng)HE染色及免疫組化染色確診和分型。所有患者均保有完整及詳盡的隨訪資料，其術(shù)后隨訪時(shí)間為6～48個(gè)月。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療、生物、熱療、免疫療法、中醫(yī)中藥等治療。

1.2試劑鼠抗人CDl51單克隆抗體、鼠抗人к單克隆抗體(上海生工生物有限公司)；免疫組化S-P試劑盒及DAB試劑盒(珠海泉輝企業(yè)有限公司)。

1.3免疫組化S-P法檢測(cè)CDl51蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)CDl51蛋白表達(dá)采用TM二步法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行設(shè)計(jì)。

1.4結(jié)果判定免疫組化結(jié)果根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行半定量分析。CD151的陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜，根據(jù)細(xì)胞膜的染色強(qiáng)度：1分為無(wú)色，2分為淡黃色，3分為棕黃色；每張切片選5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占同類計(jì)數(shù)細(xì)胞的百分比將染色結(jié)果分為陰性與陽(yáng)性，0分為陰性，1分陽(yáng)性細(xì)胞0%～25%，2分26%～50%，3分51%～75%，4分76%～100%。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積≥3分為高表達(dá)，<2分為低表達(dá)。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，生存率計(jì)算用Kaplan-Meier分析，比較用logrank檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1CD151在肝門部膽管癌和膽管炎組織中的表達(dá)CD151蛋白在肝門部膽管癌、膽管炎組織中的高表達(dá)率分別為78.9%(30/38)、18.2%(2/11),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1　CD151在肝門部膽管癌(A)

2.2CDl51蛋白在肝門部膽管癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　CDl5在肝門部膽管癌

2.3CDl51蛋白在肝門部膽管癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系30例CD151高表達(dá)患者的1、2、3 a生存率分別為63.0%、31.0%、10.8%，8例CD151低表達(dá)患者分別為83.3%、62.5%、24.5%；CD151高表達(dá)患者中位生存時(shí)間為18.1個(gè)月，CD151低表達(dá)患者為33.2個(gè)月。CD151高表達(dá)患者較CD151低表達(dá)患者生存情況差(P<0.05)。

3討論

膽管癌發(fā)病隱匿，早期癥狀不明顯,有轉(zhuǎn)移傾向，確診時(shí)患者多已屬于腫瘤晚期，手術(shù)切除率較低,預(yù)后較差[12-13]，膽管癌的局部復(fù)發(fā)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是引起死亡的主要原因，膽管癌根治性切除術(shù)后患者的5 a生存率低于20%[14]，而腫瘤的預(yù)后效果取決于腫瘤本身的生物學(xué)行為，因此，加強(qiáng)對(duì)肝門膽管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的分子機(jī)制的研究是提高膽管癌術(shù)后生存率的關(guān)鍵。

本研究證實(shí)CD151蛋白在肝門部膽管癌組織及膽管炎術(shù)后組織中都有表達(dá)，在免疫組化法檢測(cè)的49例標(biāo)本中，其CD151的表達(dá)主要在組織細(xì)胞膜，細(xì)胞漿、細(xì)胞核基本不表達(dá)，在肝門部膽管癌組織中基本呈高表達(dá)；在膽管炎組織中基本呈低表達(dá)或不表達(dá)，CDl51蛋白高表達(dá)與肝門部膽管癌患者的性別、年齡、腫瘤的大小無(wú)關(guān)，而與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，且腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移站數(shù)越多、TNM分期越高其CDl51蛋白高表達(dá)率越高。

CD151促進(jìn)腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的機(jī)制可能與CD151與整合素結(jié)合及促進(jìn)腫瘤新生血管形成有關(guān)。一方面，CD151與整合素復(fù)合物在促進(jìn)細(xì)胞的黏附、信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的移動(dòng)、形態(tài)改變等方面起重要作用，CD151與整合素的關(guān)系已被大量的研究所證明，對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步研究有助于深入了解CD151與整合素復(fù)合物介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移機(jī)制[15]。通過(guò)免疫共沉淀證實(shí)與CD151緊密結(jié)合的整合素只有α3、α6,即復(fù)合體存在形式只有CD151-α3β1、α6β4、α6β1等3種形式,另一方面，相關(guān)研究表明在小型豬心肌梗死模型中CD151能促進(jìn)缺血心肌的新生血管形成，且能增加心肌的灌注，提示CD151促進(jìn)新生血管生成且在血運(yùn)重建中起著重要作用，是促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的因素之一[16-17]。研究[18]表明CD151-α3、α6復(fù)合物是誘導(dǎo)新生血管形成及信號(hào)傳導(dǎo)途徑建立的先決條件。更有實(shí)驗(yàn)[19]表明，細(xì)胞外信號(hào)蛋白激酶?jìng)鲗?dǎo)途徑與CD151促進(jìn)血管形成有關(guān)。腫瘤的新生血管形成后不僅可以為原發(fā)瘤提供足夠的養(yǎng)分,而且能使腫瘤細(xì)胞通過(guò)新生的血管轉(zhuǎn)入血液,進(jìn)而轉(zhuǎn)移至其他器官。因此血管形成對(duì)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中起到重要作用[20]，且CD151與整合素的結(jié)合是促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移的重要因素。

本研究臨床隨訪38例肝門部膽管癌根治術(shù)后患者，其中術(shù)后組織標(biāo)本中CD151高表達(dá)30例，低表達(dá)8例，且后者更具有生存優(yōu)勢(shì)。相關(guān)研究[21]表明CD151的過(guò)表達(dá)可能與腫瘤的術(shù)后早期復(fù)發(fā)及臨床患者術(shù)后生存率低有關(guān)，本研究得出了相似結(jié)論。肝門部膽管癌根治術(shù)后患者的高轉(zhuǎn)移及高復(fù)發(fā)特性是影響預(yù)后的主要因素，深入研究其相關(guān)機(jī)制將為臨床了解肝門部膽管癌的生物學(xué)行為以及該病的臨床治療提供幫助[22]。

綜上所述，CD151在肝門部膽管癌組織中存在高表達(dá)，且其表達(dá)隨疾病進(jìn)展而升高，CD151的高表達(dá)也預(yù)示著肝門部膽管癌較差的預(yù)后，CD151的檢測(cè)可用于肝門部膽管癌的預(yù)后評(píng)估和治療指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Shigeta M, Sanzen N, Ozawa M, et al. CD151 regulates epithelial cell-cell adhesion through PKC- and Cdc42-dependent actin cytoskeletal reorganization[J].J Cell Biol,2003,163(1):165-176.

[2]Ang J, Lijovic M, Ashman LK, et al. CD151 protein expression predicts the clinical outcome of low-grade primary prostate cancer better than histologic grading: a new prognostic indicator?[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2004,13(11 Pt 1):1717-1721.

[3]Baldwin LA, Hoff JT, Lefringhouse J,et al. CD151-α3β1 integrin complexes suppress ovarian tumor growth by repressing slug-mediated EMT and canonical Wnt signaling[J].Oncotarget,2014,5(23):12203-12217.

[4]Roselli S, Kahl RG, Copeland BT, et al. Deletion of Cd151 reduces mammary tumorigenesis in the MMTV/PyMT mouse model[J].BMC Cancer, 2014,14:509.

[5]Jiang Y, Zhang C, Chen K, et al. The clinical significance of DC-SIGN and DC-SIGNR, which are novel markers expressed in human colon cancer[J].PLoS One, 2014,9(12):e114748.

[6]Tokuhara T, Hasegawa H, Hattori N,et al. Clinical significance of CD151 gene expression in non-small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res, 2001 ,7(12):4109-4114.

[7]Zhu GH, Huang C, Qiu ZJ, et al. Expression and prognostic significance of CD151, c-Met, and integrin alpha3/alpha6 in pancreatic ductal adenocarcinoma[J].Dig Dis Sci, 2011,56(4):1090-1098.

[8]Yoo SH, Lee K, Chae JY,et al. CD151 expression can predict cancer progression in clear cell renal cell carcinoma[J].Histopathology,2011,58(2):191-197.

[9]Khan SA, Thomas HC, Davidson BR,et al. Cholangiocarcinoma[J]. Lancet,2005,366(9493):1303-1314.

[10]Khan SA, Toledano MB, Taylor-Robinson SD. Epidemiology, risk factors, and pathogenesis of cholangiocarcinoma[J].HPB (Oxford),2008,10(2):77-82.

[11]劉小方，周先亭，鄒志泉.八所醫(yī)院膽管癌680例分析[J].中華肝膽外科雜志，2004，10(11)：773-775.

[12]Yokoyama Y. Hilar cholangiocarcinoma[J].Nihon Rinsho,2015,73 Suppl 3:649-653.

[13]Yamaguchi R, Yano H, Nakashima Y, et al. Expression and localization of vascular endothelial growth factor receptors in human hepatocellular carcinoma and non-HCC tissues[J]. Oncol Rep, 2000,7(4):725-729.

[14]Jonas S, Thelen A, Benckert C, et al. Extended liver resection for intrahepatic cholangiocarcinoma: A comparison of the prognostic accuracy of the fifth and sixth editions of the TNM classification[J].Ann Surg,2009,249(2):303-309.

[15]Kumari S, Devi G 5th, Badana A, et al. CD151-A Striking Marker for Cancer Therapy[J].Biomark Cancer,2015,7:7-11.

[16]Zuo H, Liu Z, Liu X, et al. CD151 gene delivery after myocardial infarction promotes functional neovascularization and activates FAK signaling[J].Mol Med, 2009,15(9/10):307-315.

[17]Zuo HJ, Liu ZX, Liu XC, et al. Assessment of myocardial blood perfusion improved by CD151 in a pig myocardial infarction model[J].Acta Pharmacol Sin,2009,30(1):70-77.

[18]Liu WF, Zuo HJ, Chai BL, et al. Role of tetraspanin CD151-α3/α6 integrin complex: Implication in angiogenesis CD151-integrin complex in angiogenesis[J].Int J Biochem Cell Biol, 2011,43(4):642-650.

[19]Tang QH, Liu ZY, Zuo HJ, et al. Involvement of activation of C-met signaling pathway in CD151-induced HUVECs angiogenesis[J].J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2015,35(1):35-41.

[20]Haeuw JF, Goetsch L, Bailly C, et al. Tetraspanin CD151 as a target for antibody-based cancer immunotherapy[J].Biochem Soc Trans,2011,39(2):553-558.

[21]Jung ES, Kang YK, Cho MY, et al. Update on the proposal for creating a guideline for cancer registration of the gastrointestinal tumors (1-2)[J].Korean J Pathol, 2012,46(5):443-453.

[22]Huang XY, Ke AW, Shi GM, et al. Overexpression of CD151 as an adverse marker for intrahepatic cholangiocarcinoma patients[J].Cancer,2010,116(23):5440-5451.

DOI:10.3969/j.issn.1673-5412.2015.05.003

[中圖分類號(hào)]R735.8；R730.23

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1673-5412(2015)05-0376-04

作者簡(jiǎn)介：王康磊(1984-)，男，碩士，住院醫(yī)師，主要從事肝膽外科臨床工作。E-mail：1055392409@qq.com 李銀英(1982-),女,碩士,主要從事腫瘤藥理學(xué)研究。E-mail：361549378@qq.com

通信作者：劉緒舜(1960-)，男，碩士，主任醫(yī)師，主要從事肝膽外科基礎(chǔ)和臨床工作。E-mail:liuxushun@sina.com 張振中(1964-)，男，博士，教授，主要從事腫瘤靶向治療藥物研究。E-mail:zhangzhenzhong@zzu.edu.cnmail

(收稿日期：2015-04-12)

Expression of CDl51 in the Hliar Cholangiocarcionma

Wang Kanglei,Liu Xuyao,Chen Jian

(DepartmentofVascularSurgery,the81thHospitalofPLA,Nanjing210002,China)

[Abstract]ObjectiveTo examine the correlations of CDl51 expression with clinicopathological characteristics

and prognosis of hilar cholangicocarcinoma.MethodsImmunohistochemistry S-P method was used to detect the CD151 expressions in the 38 specimens of hilar cholangicocarcinoma and 11 specimens of benign bile duct tissues, and the correlations of CDl51 expression with clinicopathological characteristics and prognosis of hilar cholangicocarcinoma were analyzed.ResultsThe positive expression rate of CD151 in the hilar cholangicocarcinoma was higher than that in the benign bile duct tissues. The expression of CD151 was related with lymph node metastasis, TNM stage and prognosis of hilar cholangicocarcinoma (P<0.05).ConclusionHigh expression of CD151 is observed in the hilar cholangicocarcinoma, and detection of CD151 may be the factor to predict tumor progression and prognosis of hilar cholangicocarcinoma.

[Key words]CD151; hilar cholangicocarcinoma; clinicopathological characteristics