吳有根，陳燕軍，魏惠珍，劉 娟

(1.南昌職業(yè)學(xué)院 體育衛(wèi)生系，南昌 330050;2.江西師范大學(xué) 校醫(yī)院，南昌 330004;3.中藥固體制劑國家工程研究中心，南昌 330006)

枳實(shí)是臨床常用的中藥，具有行氣除脹、化痰開痹、消積導(dǎo)滯的功效，［1］主要含有揮發(fā)油、黃酮類、生物堿類(辛弗林)等成份。黃酮類成分具有抗炎、抗氧化、抗過敏、清除自由基、抗腫瘤、抗HIV病毒等藥理作用。［2－3］因此，黃酮類成份的高低將影響枳實(shí)的藥效。本文通過實(shí)驗(yàn)分析，建立了枳實(shí)中橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷三個(gè)指標(biāo)性成分的同步測(cè)定方法。通過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，為多成份評(píng)價(jià)枳實(shí)質(zhì)量提供一種思路和參考。

1 儀器與試藥

島津LC－10A高效液相色譜系統(tǒng)，梅特勒AB－104N型電子天平(瑞士梅特勒－托利多儀器有限公司);AUW－220D型電子天平(日本島津公司)。

對(duì)照品橙皮苷 (批號(hào):110721－200512)、柚皮苷 (批號(hào):110722－200309)均購自中國藥品生物制品檢定研究院;新橙皮苷由中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心對(duì)照品室制備，經(jīng)光譜確定結(jié)構(gòu)，HPLC面積歸一法計(jì)算含量為99.34%。乙腈 (色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司)，水為Milli－Q超純水，磷酸 (分析純，汕頭市西隴化工廠)，提取用甲醇 (分析純，上海振興化工一廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil ODS2C18柱(4.6×250mm，5μm);流動(dòng)相:0.1%磷酸(A)－乙腈(B)=82:18;流速:1.0ml/min;進(jìn)樣量15μL，柱溫:25℃，檢測(cè)波長:283nm。

2.2 對(duì)照品制備 分別取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，至25mL量瓶中，用甲醇加至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液?；旌蠈?duì)照品中，各成分濃度分別為:柚皮苷0.0844mg/mL、橙皮苷0.02824mg/mL、新橙皮苷0.1046mg/mL。

2.3 樣品制備 取枳實(shí)中粉約1.0g，精密稱定，倒入帶塞錐形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1.5小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1mL置25mL量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，臨用前過0.45μm微孔濾膜。

圖1 混合對(duì)照品 (A)、樣品 (B)

2.4 線性試驗(yàn) 分別取混合對(duì)照品溶液 5、10、15、20、25、30、40μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定各成分的峰面積。以進(jìn)樣量 (X，單位:μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。各成分的線性方程及線性范圍見表1。

表1 各成分回歸方程、線性范圍及R值

2.5 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣15μL，記錄色譜峰面積，橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷的峰面積RSD分別為1.12%、1.72%、1.38%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 分別取同一批枳實(shí)3份，精密稱定，按

“2.3”項(xiàng)下方法，制備供試品溶液，按上述條件測(cè)定并計(jì)算含量，結(jié)果柚皮苷的含量為9.68%，RSD為2.21%;橙皮苷的含量為1.61%，RSD為1.41%;新橙皮苷的含量為13.76%，RSD為1.09%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的枳實(shí)粉末9份，每份約0.5g，精密稱定，分別按相當(dāng)于樣品中各成分含量的80%、100%、120%的量加入各對(duì)照品 (不同加入量各3份)，結(jié)果三種成分的平均加樣回收率及RSD分別為:柚皮苷為 101.51% (RSD=1.53%)，橙皮苷為 97.81%(RSD=2.56%)，新橙皮苷為98.92%(RSD=1.75%)。

2.8 樣品含量測(cè)定 精密稱取枳實(shí)1.0g，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果如下:

表2 枳實(shí)樣品多成分含量的測(cè)定結(jié)果 (%)(n=3)

3 討論

3.1 樣品制備方法的考查。試驗(yàn)考察《中國藥典》(2010

年版)枳實(shí)樣品制備方法和本試驗(yàn)樣品制備方法，結(jié)果表明:兩種制備方法黃酮類成分含量無明顯差異，但本試驗(yàn)的提取方法相對(duì)簡(jiǎn)單，因此，試驗(yàn)確定采用的上述樣品提取方法。

3.2 本試驗(yàn)建立枳實(shí)多種黃酮類指標(biāo)成分的含量測(cè)定方法，以表征枳實(shí)的質(zhì)量，在一定程度上反映了枳實(shí)藥材的質(zhì)量，是《中國藥典》(2010年版)中枳實(shí)質(zhì)量控制方法的有益補(bǔ)充，為全面評(píng)價(jià)枳實(shí)藥材的質(zhì)量提供一種思路和方法。

3.3 有文獻(xiàn)報(bào)道，［4－5］采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定中藥多成分的含量，雖然該方法可節(jié)約對(duì)照品，但筆者認(rèn)為該方法受儀器、色譜柱、測(cè)定環(huán)境等外界因素影響較多，可信度值得商榷，本文采用傳統(tǒng)的對(duì)照品比較測(cè)定法，可信度較高。

［1］中國藥典委員會(huì).《中國藥典》2005年版一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2005:172.

［2］胡盛珊，王大元，邱萍，等.枳實(shí)有效成分的藥理活性比較［J］.中草藥，1994，25(8):419－421.

［3］王曉梅，曹穩(wěn)根.黃酮類化合物藥理作用的研究進(jìn)展［J］. 宿州學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22(1):105 －108.

［4］孔晶晶，朱晶晶，王智民，等.一測(cè)多評(píng)技術(shù)在中成藥香連制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用［J］.中國中藥雜志，2011，36(11):1145－1148.

［5］竇志華，安利萍，陳敏，等.一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定五味子中6種木脂素類成分含量［J］.中國藥學(xué)雜志，2014，49(2):147－151.