王 成,蘇汝彬,趙 斌*

(1.廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院/國(guó)家中藥現(xiàn)代化工程技術(shù)研究中心 江門健康產(chǎn)品分中心,廣東 江門529099;2.成都醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,四川 成都 610500)

枳實(shí)為蕓香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培變種或甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果,現(xiàn)收載于《中華人民共和國(guó)藥典》2020版一部,具有破氣消積、化痰散痞之功效,可用于胃腸氣滯、胸痹、結(jié)胸、咳嗽痰多、胸中痞滿、臟器下垂等癥[1]。枳實(shí)炮制自漢代《金匱玉函經(jīng)》始載“去瓤”始,其后歷代本草著作記載的枳實(shí)炮制方法達(dá)20余種?，F(xiàn)代枳實(shí)炮制品有炒枳實(shí)、麩炒枳實(shí)、燙枳實(shí)、枳實(shí)炭、醋炙枳實(shí)、蜜炙枳實(shí)、發(fā)酵蒸制枳實(shí)等,其中麩炒枳實(shí)可緩和其峻烈之性,以散積消痞力勝,減緩破氣之功,在臨床上多用[2]。本研究綜述枳實(shí)的歷代炮制方法及沿革、現(xiàn)代炮制、炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及藥理作用等,以期為枳實(shí)及其炮制品的開(kāi)發(fā)與利用、炮制規(guī)范的制定提供參考。

1 枳實(shí)炮制方法沿革

1.1 古代炮制方法[3]

枳實(shí)古代炮制方法分為3種:凈制、飲片切制、炮炙。①凈制又分為去瓤、去核、去白。去瓤最早收載于漢代《金匱玉函經(jīng)》,唐、宋、元、明、清均沿用;去核最早收載于梁代《本草經(jīng)集注》,唐、宋、明、清沿用;去白始載于宋代《女科百問(wèn)》。②飲片切制又分為切制、制粉。切制最早收載于唐代《備急千金要方》,制粉最早收載于唐代《外臺(tái)秘要》,此后宋、元、明、清皆沿用,但具體方法又有些許不同。③炮炙又分為不加輔料制與加輔料制兩類。不加輔料制包括炒制[含清炒法中的炒黃(唐·《外臺(tái)秘要》)、炒炭(漢·《金匱玉函經(jīng)》)等]、燒制(宋·《太平惠民和劑局方》)、蒸制(明·《景岳全書》)、焙制(明·《審視瑤函》)、熬制(唐·《備急千金要方》)等方法;加輔料制包括炒制[含加輔料炒法中的麩炒(明·《圣惠方》)、土炒(清·《醫(yī)方叢話》)、面炒(宋·《史載之方》)等]、炙制[包括酒炙(清·《幼幼集成》)、醋炙(宋·《校注婦人良方》)、姜炙(明·《證治準(zhǔn)繩》)、蜜炙(明·《本草綱目》)等]、泔浸制(明·《普濟(jì)方》)、醋制膏(宋·《圣劑總錄》)等方法。

1.2 不同時(shí)代炮制方法概況

在不同歷史時(shí)期,枳實(shí)炮制方法有所不同,部分方法為后代沿用并加以創(chuàng)新。見(jiàn)表1。

表1 枳實(shí)歷代炮制方法[4]

1.3 炮制規(guī)范收載概況

枳實(shí)炮制標(biāo)準(zhǔn)在《中華人民共和國(guó)藥典》(2020版)及國(guó)內(nèi)21個(gè)省、自治區(qū)、直轄市的炮制規(guī)范中均有收載(見(jiàn)表2)。結(jié)果顯示,枳實(shí)的現(xiàn)代炮制方法包括:凈制、切制、清炒法(炒黃、炒炭)、加固體輔料炒(麩炒、蜜麩炒、沙炒、面炒)、炙法(蜜炙)、特殊制法(發(fā)酵蒸制)等,其中凈制、切制和麩炒最為常用。

表2 枳實(shí)炮制規(guī)范收載情況

2 枳實(shí)現(xiàn)代炮制研究

2.1 枳實(shí)炮制工藝研究

2.1.1 麩炒枳實(shí)炮制工藝研究 馬雪松等[5]采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選麩炒枳實(shí)的炮制工藝(炒制時(shí)間、炒制溫度、麩用量),選擇出膏率、辛弗林含量、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷總含量等3個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo),按加權(quán)平均法進(jìn)行綜合評(píng)分,通過(guò)方差分析,顯示炒制溫度對(duì)枳實(shí)麩炒工藝具有顯著性影響,確定最佳工藝條件定為:每100g枳實(shí)用麥麩量為20g,于190～210℃,炒制70～90s。

林桂梅等[6]選擇出膏率、柚皮苷和橙皮苷總含量、辛弗林含量等3個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選枳實(shí)的麩炒工藝(枳實(shí)大小、麩用量、炒制溫度、炒制時(shí)間),確定最佳炮制工藝為:取直徑1.5～2.5cm大小的枳實(shí),每100g枳實(shí)用麥麩10g,在180℃溫度下炒制60s。

彭致鋮等[7]選擇辛弗林、柚皮苷、新橙皮苷等3個(gè)成分含量為定量評(píng)價(jià)指標(biāo),并結(jié)合飲片性狀判斷炮制程度,采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)麩炒枳實(shí)炮制工藝(炒制時(shí)間、炒制溫度、麩用量)進(jìn)行優(yōu)選,通過(guò)方差分析與主成分分析,確定最佳炮制工藝為:投麩量100∶10,于220℃溫度下炒制5 min。采用HPLC法對(duì)15批麩炒枳實(shí)進(jìn)行了分析,建立了麩炒枳實(shí)的特征圖譜,并標(biāo)定出共有色譜峰7個(gè),其中,4個(gè)峰指定為辛弗林、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷。

于曉黎等[8]選擇辛弗林含量、總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交試驗(yàn)法對(duì)麩炒枳實(shí)炮制工藝(炒制溫度、炒制時(shí)間、麩用量)進(jìn)行優(yōu)選。通過(guò)方差分析,對(duì)炮制結(jié)果有顯著影響的參數(shù)為炒制溫度,炮制時(shí)間和麩用量則對(duì)炮制結(jié)果無(wú)顯著影響,確定最佳工藝為:投麩量100∶5,于180℃,炒制60s。

2.1.2 枳實(shí)軟化、切制、水炙工藝研究 尹麗波等[9]選擇出膏率、有效成分含量(柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林、橙皮苷)為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用正交試驗(yàn)法對(duì)枳實(shí)軟化和切制工藝進(jìn)行了研究。確定浸泡法可作為枳實(shí)最佳軟化方法,其工藝參數(shù)為每100g枳實(shí)加1倍量水,在30℃條件下浸泡12h;橫切法可作為枳實(shí)飲片切制方法,切制為薄片。

董麗萍等[10]以新橙皮苷、柚皮苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用單因素分析法對(duì)枳實(shí)水炙工藝(加水量、潤(rùn)藥時(shí)間、炒制溫度、炒制時(shí)間等)進(jìn)行研究。確立枳實(shí)水炙最佳工藝為:每100g枳實(shí)加1.4倍量水,室溫下拌潤(rùn)55min,炒制溫度120℃,炒制時(shí)間7min。結(jié)果顯示,采用優(yōu)選的水炙工藝炮制后,制枳實(shí)與生枳實(shí)比較,柚皮苷、新橙皮苷等有效成分含量均有增加。

2.2 枳實(shí)炮制的成分變化研究

2.2.1 枳實(shí)麩炒后成分變化研究 劉振麗[11]選擇辛弗林、橙皮苷和柚皮苷含量(HPLC法),揮發(fā)油含量(藥典法)等指標(biāo),對(duì)麩炒前后枳實(shí)進(jìn)行了質(zhì)量分析。結(jié)果顯示,枳實(shí)經(jīng)麩炒后,橙皮苷等成分和揮發(fā)油含量均有所降低。橙皮苷、柚皮苷和辛弗林的含量變化還與枳實(shí)大小有關(guān),其中,藥材直徑增大,橙皮苷與辛弗林隨之減少,柚皮苷含量隨之增加,但柚皮苷與橙皮苷總量與枳實(shí)大小關(guān)系不大。

彭芳芳等[12]應(yīng)用UPLC-Q-TOF-MSE技術(shù)對(duì)麩炒前后枳實(shí)的化學(xué)成分、麥麩的化學(xué)成分進(jìn)行了鑒定和分析。經(jīng)UNIFI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,共鑒定出生枳實(shí)中含有64種化學(xué)成分,麩炒枳實(shí)中含有58種化學(xué)成分,炮制后的麥麩中含有18種化學(xué)成分;經(jīng)初步分析,枳實(shí)與麩炒枳實(shí)存在包括揮發(fā)油、黃酮、香豆素等差異性成分共19個(gè)。

2.2.2 枳實(shí)不同方法炮制后成分變化研究 王文凱等[13]采用HPLC法測(cè)定柚皮苷、新橙皮苷等成分含量,對(duì)不同炮制工藝(凈制、炒黃、炒炭、麩炒、砂燙、醋炙、蜜炙)所得枳實(shí)炮制品質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示,炮制方法對(duì)枳實(shí)飲片中柚皮苷和新橙皮苷的含量有較大影響,其中,柚皮苷和新橙皮苷含量由高到低依次是:生枳實(shí)>炒枳實(shí)>麩炒枳實(shí)>醋炙枳實(shí)>蜜炙枳實(shí)>燙枳實(shí)>枳實(shí)炭,提示炮制溫度越高,對(duì)柚皮苷和新橙皮苷含量影響越大。

陳強(qiáng)等[14]對(duì)3個(gè)批次的綠衣枳實(shí)進(jìn)行了多種方法炮制,并采用HPLC法測(cè)定了枳實(shí)生品及不同炮制品中柚皮苷含量。結(jié)果顯示,不同炮制品中柚皮苷含量存在明顯差異,與生枳實(shí)比較,枳實(shí)炭降低60%～70%,砂燙枳實(shí)、土炒枳實(shí)降低40%～55%,醋枳實(shí)、酒枳實(shí)降低10%～20%,麩炒枳實(shí)基本不變。

石繼連等[15]采用水蒸氣蒸餾法提取了3種不同枳實(shí)炮制品(生枳實(shí)、醋枳實(shí)及麩炒枳實(shí))的揮發(fā)油,并用GC-MS技術(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,在枳實(shí)不同炮制品中,共鑒定出53個(gè)揮發(fā)性成分,其中,生枳實(shí)26個(gè),醋枳實(shí)37個(gè),麩炒枳實(shí)48個(gè)。枳實(shí)不同炮制品的揮發(fā)油中主要成分均為檸檬烯,但相對(duì)含量存在較大差別,生枳實(shí)高達(dá)64.0%,麩炒品僅為33.0%。

3 枳實(shí)炮制品質(zhì)量控制研究

李曉婷等[16]對(duì)枳實(shí)中黃酮類、揮發(fā)油類成分進(jìn)行定性鑒別(TLC法),對(duì)枳實(shí)中多種有效成分(橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷)進(jìn)行含量測(cè)定(HPLC法),認(rèn)為其所建立的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法可較好地表征枳實(shí)有效物質(zhì)基礎(chǔ)。根據(jù)研究結(jié)果,建議枳實(shí)藥材含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)如下:按干燥品計(jì)算,總黃酮不得少于13.4%(UV法);柚皮苷不得少于5%(HPLC法),新橙皮苷不得少于8%(HPLC法),橙皮苷不得少于0.4%(HPLC法)。

董麗萍等[10]模擬《備急千金要方》溫膽湯組方中關(guān)于枳實(shí)炮制方法的記載(水炙法),對(duì)枳實(shí)炮制工藝進(jìn)行了研究。運(yùn)用HPLC法對(duì)枳實(shí)中柚皮苷、新橙皮苷進(jìn)行含量測(cè)定研究,完成了方法學(xué)考察,測(cè)定了15批枳實(shí)藥材和枳實(shí)炮制品(水炙)中柚皮苷、新橙皮苷含量。結(jié)果顯示,枳實(shí)中柚皮苷、新橙皮苷含量(普遍在5%以上)均遠(yuǎn)高于《中國(guó)藥典》規(guī)定的辛弗林含量(0.3%),且均為枳實(shí)發(fā)揮藥效的有效成分,可作為枳實(shí)藥材質(zhì)量控制的定量分析指標(biāo)。

劉靜等[17]采用TLC法對(duì)枳實(shí)中多成分(橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、蕓香柚皮苷、辛弗林及N-甲基酪胺)進(jìn)行了定性鑒別,對(duì)定量檢測(cè)辛弗林的HPLC法進(jìn)行了優(yōu)化,認(rèn)為其所建立的枳實(shí)定性、定量方法專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好,可用于枳實(shí)飲片質(zhì)量控制。

4 枳實(shí)炮制品藥理作用研究

4.1 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用

尹麗波等[18]采用測(cè)定尾間收縮壓方法測(cè)定大鼠血壓,比色法測(cè)定大鼠血中NOS(一氧化氮合酶)的含量,以大鼠尾間收縮壓及NOS為指標(biāo),比較枳實(shí)生、制品對(duì)其升壓的不同作用。結(jié)果顯示,生、制品枳實(shí)均有顯著的升高大鼠血壓作用,且生品的升壓作用強(qiáng)于制品。

4.2 對(duì)子宮的作用

湯容[19]分離取出健康雌性未孕家兔的陰道,觀察枳實(shí)提取物(水提醇沉酸堿處理)對(duì)離體家兔陰道平滑肌的影響。結(jié)果表明,達(dá)到最小劑量(9.06±5.0mg/mL)后,枳實(shí)提取物對(duì)離體家兔環(huán)行陰道平滑肌發(fā)揮興奮作用,能增強(qiáng)離體子宮收縮力,增加張力,加強(qiáng)收縮節(jié)律。但劑量超過(guò)一定量(30.51±15.63mg/mL)后,則主要表現(xiàn)為抑制作用。研究結(jié)果還顯示,枳實(shí)和苦參提取物配伍可以起到協(xié)同作用,明顯降低最低有效劑量。

4.3 對(duì)胃腸道平滑肌的作用

王翠芬等[20]采用電生理學(xué)方法觀察枳實(shí)灌胃前后大鼠胃腸電活動(dòng),采用免疫組織化學(xué)方法,觀察枳實(shí)灌胃前后大鼠胃腸切片的P物質(zhì)含量變化。結(jié)果表明,與生理鹽水組比較,枳實(shí)組大鼠在灌胃后,其胃竇、十二指腸、空腸的胃腸移行性綜合肌電(MMC)活動(dòng)相時(shí)程與周期比值(A/T)顯著性增大,胃腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)P物質(zhì)顯著性增多。結(jié)果證實(shí),枳實(shí)對(duì)大鼠胃腸MMC具有興奮效應(yīng),這一效應(yīng)可能與P物質(zhì)增加有關(guān)。

4.4 對(duì)枳實(shí)中黃酮類成分的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)研究

彭芳芳等[21]采用Caco-2細(xì)胞模型,對(duì)枳實(shí)和麩炒枳實(shí)中黃酮類成分(橙皮苷、新橙皮苷)及橙皮苷、新橙皮苷單體的雙向跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)特征進(jìn)行研究。結(jié)果表明,麩炒枳實(shí)與枳實(shí)比較,其黃酮類成分雙側(cè)表觀滲透系數(shù)值較大;各類藥液的雙側(cè)轉(zhuǎn)運(yùn)速率前期呈上升趨勢(shì),在60 min左右達(dá)到峰值,之后則呈現(xiàn)下降趨勢(shì);各樣品在體內(nèi)吸收速率由大到小依次為:麩炒枳實(shí)>枳實(shí)>橙皮苷、新橙皮苷單體。研究認(rèn)為,枳實(shí)中橙皮苷和新橙皮苷等黃酮類成分具有較好的腸吸收性,且通過(guò)麩炒炮制后,能夠增加這類成分的腸吸收。

5 討論

歷代本草對(duì)枳實(shí)的炮制記載較為詳盡,方法近20余種。目前,國(guó)家和地方炮制規(guī)范也基本沿用了本草古籍的方法,以凈制、切制、麩炒為主,但不同地區(qū)的枳實(shí)炮制方法各有不同,不同地區(qū)同一炮制方法在炮制工藝上也存在差異(如麥麩炒制工藝中的輔料用量、炮制時(shí)間等)。對(duì)枳實(shí)炮制工藝和炮制成分變化研究表明,不同炮制方法和炮制工藝能明顯影響枳實(shí)飲片的質(zhì)量。為避免炮制品質(zhì)量不一,應(yīng)修訂完善枳實(shí)炮制規(guī)范,明確枳實(shí)采摘時(shí)間、半徑大小、潤(rùn)制時(shí)間、輔料用量、炒制溫度、炒制時(shí)間等工藝參數(shù)[22]。

文獻(xiàn)分析結(jié)果顯示,枳實(shí)炮制研究報(bào)道集中于2005-2010年,近幾年相對(duì)減少,主要開(kāi)展了枳實(shí)炮制工藝及其質(zhì)量控制研究,優(yōu)選了枳實(shí)的麩炒、切制工藝,采用TLC和HPLC法對(duì)枳實(shí)飲片中單個(gè)或多個(gè)成分進(jìn)行了定性、定量測(cè)定研究等。中醫(yī)炮制理論認(rèn)為,枳實(shí)生品性較峻烈,以破氣化痰為主,炮制后(炒或炙)可緩和其峻烈之性,以免損傷正氣,以散結(jié)消痞力勝[23]。但目前有關(guān)枳實(shí)炮制方面的研究還較少,對(duì)枳實(shí)炮制前后化學(xué)成分、藥理活性的變化研究還不夠全面,枳實(shí)炮制前后藥效物質(zhì)仍不明確、炮制機(jī)制仍不清晰。筆者認(rèn)為可從以下幾方面開(kāi)展枳實(shí)炮制研究:①聯(lián)合應(yīng)用多種現(xiàn)代分析手段,如GC-MS 和HPLC-QTOF 技術(shù),建立枳實(shí)及制枳實(shí)的指紋圖譜,并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)方法,全面考察枳實(shí)炮制前后揮發(fā)性和非揮發(fā)性成分的差異及變化規(guī)律;②在中醫(yī)臨床和中藥炮制理論指導(dǎo)下開(kāi)展藥效學(xué)研究,以明確枳實(shí)炮制前后藥效的差異;③綜合運(yùn)用藥效學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)及藥物代謝-藥效相關(guān)性等手段,分析枳實(shí)炮制前后,差異性成分在體內(nèi)的作用過(guò)程及其作用靶點(diǎn),再結(jié)合代謝組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等手段闡明其炮制作用機(jī)制;④確定枳實(shí)質(zhì)量標(biāo)志物,建立枳實(shí)及炮制品專屬性的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。