范亞剛 張利 李萍

摘要：目的采用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度。方法采用Kron.asil 100 -5C18（150 x4.6 mm）色譜柱，流動(dòng)相為乙晴：水（55：45），柱溫30℃，流速1.0mL- min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。結(jié)果復(fù)方磷酸萘酚喹片中青蒿素進(jìn)樣量在1.32-26.4μg· mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=1），平均回收率為100. 83% ，RSD=1.76%（n=9）。結(jié)論本方法測(cè)定簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，重現(xiàn)性好，適用于復(fù)方磷酸萘酚喹片中青蒿素的溶出度的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；復(fù)方磷酸萘酚喹片；青蒿素；溶出度測(cè)定

中圖分類(lèi)號(hào)：R284

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-2349（2015） 03-0062-03

復(fù)方磷酸萘酚喹片是昆藥集團(tuán)與軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病所合作開(kāi)發(fā)研究的磷酸萘酚喹與青蒿素以1：2.5的比例組成的復(fù)方抗瘧口服制劑，臨床上主要用于惡性瘧、間日瘧的治療，能快速控制臨床癥狀與殺蟲(chóng)速度迅速，不良反應(yīng)輕微，惡性瘧復(fù)燃率低等優(yōu)點(diǎn)，具備了青蒿素的速效和萘酚喹殺蟲(chóng)徹底且持效的特點(diǎn)，具有高效、速效、長(zhǎng)效作用，復(fù)燃率低，毒副反應(yīng)小，使用方便的優(yōu)點(diǎn)，且符合復(fù)方配伍原則，是一個(gè)非常安全、有效的、理想的創(chuàng)新復(fù)方抗瘧藥，屬于我國(guó)基本藥物。

復(fù)方磷酸萘酚喹片現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)ws-772（X- 617）- 2001（規(guī)格為125mg）和YBH00312007（規(guī)格為250mg）。但現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中青蒿素溶出度的檢驗(yàn)方法設(shè)定有差異，限度值也不一致，所采用的溶出介質(zhì)不一樣，造成溶出度結(jié)果精密度偏低（見(jiàn)表1）。

青蒿素溶出度采用堿水解30min后加酸中和用高效液相色譜法測(cè)定，操作繁瑣、誤差較大，液相色譜圖中青蒿素分解為兩個(gè)峰，不易分離，且樣品不穩(wěn)定，造成測(cè)定誤差，對(duì)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量產(chǎn)生影響。復(fù)方磷酸萘酚喹片中的青蒿素為難溶性組份，難溶性口服固體制劑在體內(nèi)的生物利用度是當(dāng)前對(duì)藥品質(zhì)量關(guān)注的一個(gè)重點(diǎn)?；谏鲜鲈e，筆者認(rèn)為應(yīng)統(tǒng)一并合理修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，減少操作誤差，使測(cè)定結(jié)果更為準(zhǔn)確，以便更為科學(xué)、合理的評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量，故參照《中國(guó)藥典》[1]現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)[2-3]進(jìn)行了溶出度新方法的研究。1 儀器與試藥

Agilent technologies HP1200高效液相色譜儀；電子天平BP-211D； RCZ-8M自動(dòng)取樣溶出儀；ZKT-18M真空脫氣儀。

十二烷基硫酸鈉（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；批號(hào)：F20110804）；青蒿素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所；批號(hào)：100202-201004；含量為98.8%）；乙腈（Merck KGaA批號(hào)：JA024730）為色譜純；純水；復(fù)方磷酸萘酚喹片（昆明制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：12JK1、12DB、14FR1、131A2、14CD2、14FL）。2方法與結(jié)果2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil 100 - SC18（ 150×4.6 mmE82180）色譜柱；流動(dòng)相：乙腈一水（55：45）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm，流速1.0mL.min-1，柱溫30C，進(jìn)樣量：20μL。在該色譜條件下，青蒿素出峰結(jié)果見(jiàn)圖l。2.2對(duì)照品貯備液的制備 精密稱取青蒿素對(duì)照13.2 mg置于50 mL容量瓶中加流動(dòng)相（乙腈：水=55：45）溶解并稀釋至刻度搖勻即得對(duì)照品貯備液。2.3 方法學(xué)考察2.3.1 線性關(guān)系的考察取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，依次取5、10、20、50、100¨l注入液相色譜儀中，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程

為：y，= 899.84x - 2.9185（r=1.000），表明進(jìn)樣量在1.32-26.4μg之間線性關(guān)系良好。（見(jiàn)圖2）2.3.2精密度試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行檢測(cè)，照液相色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次（n=5），RSD為0.09%，表明精密度良好。2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行檢測(cè)，照液相色譜條件分別于0、2、6、12、24 h進(jìn)行測(cè)定，RSD為0. 33%，表明青蒿素在2 h內(nèi)基本穩(wěn)定。2.3.4檢測(cè)限和定量限測(cè)定精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，加流動(dòng)相定量稀釋，照液相色譜條件測(cè)定，按信噪比S/N=3計(jì)算檢測(cè)限為41.66 ng，S/N=10計(jì)算定量限為137ng2.3.5重復(fù)性試驗(yàn) 取復(fù)方磷酸萘酚喹片（批號(hào)：131A2規(guī)格為125 mg）按照溶出度測(cè)定法，于45 min取樣測(cè)定，同法平行測(cè)定3次（n=18）；青蒿素溶出平均值為79. 31%，RSD%為1. 99%，表明本方法重現(xiàn)性良好。2.3.6耐用性試驗(yàn)取樣品溶液，分別采用不同比例的流動(dòng)相、不同規(guī)格的色譜柱、不同柱溫進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明該方法耐用性良好。2.3.7 回收率試驗(yàn)按溶出度測(cè)定法，于45 min取樣作為供試品貯備液；分別取一定量供試品貯備液，加入對(duì)照品溶液制成80%、l00%、120%的供試品溶液各3份，照液相測(cè)定方法測(cè)定，平均回收率為100. 83%，RSD%為1.74%，表明該方法的回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表2。2.4.1溶出條件溶出方法漿法；溶出介質(zhì)：為0. 5%十二烷基硫酸鈉水溶液；轉(zhuǎn)速：lOOr/min；溫度：37℃2.4.2溶出曲線參考文獻(xiàn)資料[4-6]和現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，我們采用4種不同pH值的溶出介質(zhì)（pH值分別為1.2、4.0、6.8和水，分別添加表面活性劑），對(duì)樣品進(jìn)行了溶出曲線考察（規(guī)格為125 mg樣品溶出介質(zhì)為500 mL，規(guī)格為250 mg樣品溶出介質(zhì)為1000 mL），取樣時(shí)間為5、10、30、45、60、90、120 min，以溶出時(shí)間為橫坐標(biāo)，以溶出量為縱坐標(biāo)，繪制溶出曲線（見(jiàn)圖2），確定了最終的溶出條件和限度。3討論

1.經(jīng)試驗(yàn)證明該法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確，兩種規(guī)格均可使用該方法測(cè)定，并且可以普遍用于青蒿索類(lèi)復(fù)方制劑溶出度測(cè)定，6批樣品的溶出量均在70%以上，故溶出限度應(yīng)定為標(biāo)示量的70%。

2.藥物溶出度能區(qū)分同一制劑生物利用度的差異，是口前較能反應(yīng)藥物體內(nèi)外相關(guān)性的體外測(cè)試項(xiàng)日，對(duì)于控制藥物質(zhì)量保證藥物的有效性有重要意義。由于復(fù)方磷酸萘酚喹片為我國(guó)獨(dú)創(chuàng)品種，尚未進(jìn)行生物利用度方面的考察，無(wú)法獲得與生物利用度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)溶出曲線及參比制劑，我們采用參考文獻(xiàn)中使用的4種不同pH值的溶出介質(zhì)來(lái)進(jìn)行溶出曲線考察，青蒿素組份在四種介質(zhì)中溶出行為均符合難溶性藥物的溶出規(guī)律，比較四種介質(zhì)的溶出曲線，最后選擇了溶出相對(duì)較快及區(qū)分力較好的0. 5%十二烷基硫酸鈉水溶液作為最終的溶出介質(zhì)。參考文獻(xiàn)：[1]衛(wèi)生部.中國(guó)藥典[M].北京：化工出版社，2001.[2]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)WS- 772（X- 617）- 2001.[3]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH00312007.[4]李慧義，閆研，等.HPLC法測(cè)定青蒿素哌喹片中青蒿素的溶出度殷果[J].藥物分析雜志，2014.（2）：[5]張啟明，謝沐風(fēng).采用多條溶出曲線評(píng)價(jià)口服固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40（12）.[6]日本醫(yī)療用醫(yī)藥品品質(zhì)情報(bào)集（日本參比制劑目錄、橙皮書(shū)）

（收稿日期：2014-12-15）