黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅 陽

EB病毒與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的關(guān)聯(lián)研究

黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅 陽

目的 通過檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者體內(nèi)的EB病毒DNA載量及病毒衣殼相關(guān)抗體（包括IgA及EBV-VCA-IgA），探究SLE患者體內(nèi)EB病毒感染情況及EB病毒再次感染對(duì)SLE活動(dòng)度的影響。方法 選取100例SLE患者、80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人血標(biāo)本，應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）測(cè)定EBV-DNA的載量，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定EB病毒相關(guān)抗體。比較各組EB病毒抗體抗體滴度。結(jié)果 PCR測(cè)定EBVDNA載量：SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%（29/100）、11.3%（9/80），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。病毒載量異常組的SLE患者的SLE疾病活動(dòng)度（SLEDAI）為（15±3），病毒載量正?；颊逽LEDAI為（13±2），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。異常病毒載量患者與正常者的SLEDAI比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 SLE患者體內(nèi)EBV抗體及DNA表達(dá)較高，提示EB病毒與SLE關(guān)系密切，但EBV-IgA或DNA載量對(duì)SLE疾病活動(dòng)度無影響。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；病毒DNA載量；病毒抗體滴度；疾病活動(dòng)度

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus,SLE）是一種涉及多個(gè)系統(tǒng)及器官的自身免疫性疾病，其具體發(fā)病機(jī)制尚未闡明，可能與基因有關(guān)，一些環(huán)境因素（激素、感染、飲食、藥物、紫外線等）也是SLE發(fā)病不可缺少的因素。近年來，環(huán)境因素與SLE的關(guān)聯(lián)性研究成為國(guó)內(nèi)外研究熱點(diǎn)。Epstein-Barr（EB）病毒是于1964年被發(fā)現(xiàn)的，Epstein和Barr分別在《Lancet》雜志中報(bào)道了非洲兒童淋巴瘤母細(xì)胞株中存在的不同于其他皰疹病毒的病毒[1]。血清學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，成人EB病毒的EBV-IgG抗體陽性率為90%，SLE患者體內(nèi)則高達(dá)99%[2]。本研究選取SLE患者100例、80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人血標(biāo)本，利用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）方法等探究EB病毒感染與SLE的發(fā)生、發(fā)展之間的聯(lián)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年4月～2012年6月在贛州市立醫(yī)院接受治療的SLE患者100例，男7例，女93例；年齡23～45歲，平均（34±11)歲。非SLE風(fēng)濕患者80例，男3例，女77例；年齡18～75歲，平均（44±16）歲；其中類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎56例，混合解體組織病23例，強(qiáng)直性脊柱炎1例。40例正常人為對(duì)照組，男30例，女10例；年齡18～70歲，平均（41±11）歲。患者診斷符合紐約1984年修訂的AS（強(qiáng)直性脊柱炎，ankylosing spondylitis）標(biāo)準(zhǔn)診斷、美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)于1997年修訂的SLE及1987年的RA（類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，rheumatoid arthritis）分類標(biāo)準(zhǔn)[2]。各組受試者性別、年齡等資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法 測(cè)定EB病毒的DNA載量：抽取受試者肘靜脈血，用淋巴細(xì)胞提取液取得白細(xì)胞，然后向沉淀中加入DNA提取液，依據(jù)EB病毒核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑及PE核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)儀檢測(cè)測(cè)定。若＞500基因拷貝/ mL則為異常，表明病毒復(fù)制很活躍；若≤500基因拷貝/mL則為正常。

1.2.2 ELISA法 檢測(cè)EB病毒相關(guān)抗體：抽取肘靜脈血，離心后留取上清，于-70℃保存。具體操作按照EBV-VCAIgG、IgA試劑盒說明書中步驟進(jìn)行，完成后在酶標(biāo)儀中450nm比色，測(cè)定每孔吸光度?？贵w相對(duì)滴度=樣本吸光度值/標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值。比值≥0.8視為陽性，＜0.8視為陰性[2]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，組間計(jì)量數(shù)據(jù)采用“±s”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCR測(cè)定EBV-DNA載量結(jié)果 SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%（29/100）、11.3%（9/80），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。病毒載量異常組的SLE患者的SLE疾病活動(dòng)度（SLEDAI）為（15±3），病毒載量正?；颊逽LEDAI為（13±2），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。異常病毒載量患者與正常者的SLEDAI比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 抗體滴度比較 SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 SLE組與對(duì)照組EBV-IgA及IgG抗體滴度比較

3 討論

SLE是一種累及多個(gè)器官和系統(tǒng)的免疫性疾病。患者體內(nèi)往往具有多種抗感染性免疫缺陷，此外還存在淋巴細(xì)胞減少、巨噬細(xì)胞功能異常及淋巴因子表達(dá)異常等各種免疫異常，這些異常易導(dǎo)致患者并發(fā)感染[3]。很多學(xué)者一致認(rèn)為SLE患者合并感染會(huì)影響患者的預(yù)后[4]。SLE活動(dòng)的主要表現(xiàn)包括發(fā)熱、皮膚黏膜損害、血管炎、胸膜炎、關(guān)節(jié)炎、腎臟受累、心包炎、血三系減少、低補(bǔ)體血癥、抗雙鏈DNA抗體滴度升高、CRP及紅細(xì)胞沉降率增快等[5]，此病的主要治療方法是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑（環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、長(zhǎng)春新堿、環(huán)孢素A等）[6]。多數(shù)EB病毒感染引發(fā)SLE的相關(guān)研究顯示，先天或后天缺陷是病毒感染無法維持在潛伏狀態(tài)的重要原因，例如補(bǔ)體的缺乏可以影響死亡與凋亡細(xì)胞碎片的清除[7]。EB病毒作為一種環(huán)境因素可以誘發(fā)SLE這一問題越來越受到醫(yī)務(wù)工作者的重視，但兩者之間的具體聯(lián)系還未徹底闡明，至今仍不清楚EB病毒的近期感染是否能影響SLE的總體疾病活動(dòng)性。也可能存在別的發(fā)病機(jī)制[8]。也有人認(rèn)為，EBV的LMP1有可能通過影響凋亡相關(guān)因子的表達(dá)進(jìn)而使自身反應(yīng)性B細(xì)胞能持續(xù)活化增殖[9]。

本研究通過對(duì)本院共100例SLE患者，80例非SLE風(fēng)濕患者及40例正常人的研究對(duì)比結(jié)果顯示，SLE組與非SLE組的EBV-DNA檢出率分別為29.0%、11.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；但2組的SLEDA分別為15、13，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且SLE組的EBV-DNA數(shù)值與SLEDA相關(guān)性分析結(jié)果無相關(guān)性；此外，SLE組的病毒相關(guān)抗體EBV-IgA與IgG的抗體滴度均高于對(duì)照組（P＜0.05），但SLE患者病毒抗體EBV-IgA及IgG滴度與其相應(yīng)的SLEDA相關(guān)性分析顯示無相關(guān)性。以上結(jié)果表明，SLE患者體內(nèi)EBV抗體及DNA表達(dá)較高，提示EB病毒與SLE關(guān)系密切，但EBV-IgA或DNA載量對(duì)SLE疾病活動(dòng)度無影響。其具體關(guān)聯(lián)性有待進(jìn)一步研究。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2015.19.013

江西 341000 贛州市立醫(yī)院（黃昌艷 梁海琦 劉春霞 羅陽）