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        紫外分光光度法測定食用玫瑰花中類黃酮的含量

        2015-07-25 01:59:48李絢龍敏儀肇慶市食品藥品檢驗所廣東肇慶526020
        食品研究與開發(fā) 2015年23期
        關鍵詞:紫外分光光度法類黃酮

        李絢,龍敏儀(肇慶市食品藥品檢驗所,廣東肇慶526020)

        紫外分光光度法測定食用玫瑰花中類黃酮的含量

        李絢,龍敏儀
        (肇慶市食品藥品檢驗所,廣東肇慶526020)

        摘要:建立紫外分光光度法測定食用玫瑰花中類黃酮含量的方法。在420 nm波長處有最大吸收峰,在50 mg/L~600 mg/L濃度范圍內(nèi),吸光度與樣品濃度之間呈現(xiàn)良好的線形關系,回歸方程為Y=0.051 7+0.000 7x,相關系數(shù)r2= 0.999 98,檢出限為2.0 mg/kg;回收率在95.43%~104.67%之間,變異系數(shù)在0.86%~2.57%。

        關鍵詞:食用玫瑰花;類黃酮;紫外分光光度法

        玫瑰花食用是我國飲食文化的一大特色傳統(tǒng),歷史悠久,明代盧和在《食物本草》中記載:“玫瑰花食之芳香甘美,令人神爽”。玫瑰花具有豐富的營養(yǎng)價值,富含多種維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、氨基酸和多種微量元素,以及色素、有機酸、酯類和膳食纖維,對人體有良好的食療保健功能。目前,現(xiàn)有的玫瑰花產(chǎn)品大都只是經(jīng)過簡單加工而成,對其營養(yǎng)價值、功能因子很少做出評價[1-3]。

        食用玫瑰花的化學成分研究己有不少研究報道,主要集中在揮發(fā)油成分和其它次生代謝產(chǎn)物方面,較少的文章是對玫瑰花抗氧化活性成分進行研究,尤其是抗氧化成分類黃酮的研究幾乎都是空白[2-4]。為此,為促進食用玫瑰花產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展,本文以食用玫瑰花為研究對象,選用蘆丁為類黃酮對照品,建立紫外分光光度法測定食用玫瑰花中類黃酮的方法,為食用玫瑰花綜合開發(fā)利用提供理論參考。

        1 材料與方法

        1.1試驗材料

        玫瑰花,市場采購,烘干磨碎后備用。

        1.2儀器與試劑

        XPE型電子分析天平:梅特勒-托利多公司;T6型紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責任公司;RE-5003型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀:鄭州市亞榮儀器有限公司;Avanti J型高速離心機:貝克曼公司;HH-60型恒溫循環(huán)水箱:上海璽袁科學儀器有限公司;SH-B型恒溫攪拌循環(huán)水浴鍋:臺灣思派克電子(東莞)有限公司;PHS-2S型酸度計:上海雷磁;RHW-80型酒精度計:上海精密儀器儀表有限公司;WZS5型手持糖量計:上海物光手持糖量計;SFSP5660型錘片式粉碎機:石家莊華亞飼料機械有限公司;co2型恒溫培養(yǎng)箱:河北春機機械設備有限公司;電熱鼓風干燥箱(DHG-9920A型):上海光學儀器廠。

        蘆?。兌取?9%):成都藥品生物制品有限公司;石油醚(30℃~60℃)、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、無水乙醇、甲醇、冰乙酸(均為分析純):廣東省汕頭市西隴化工廠;氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁,均為分析純:廣州化學試劑廠。

        蘆丁標準溶液:200 μg/mL,準確稱取干燥恒重的蘆丁標準品20.0 mg(精度0.1 mg),置于100 mL容量瓶中,加適量甲醇溶解后定容至刻度,4℃保存。

        1.3類黃酮的提取

        準確稱取食用玫瑰花樣品3 g(精度0.1 mg),經(jīng)50 mL石油醚除去脂肪后,加70%乙醇水溶液100 mL,80℃回流萃取,收集萃取液。如上反復萃取2次,將3次萃取液合并,減壓濃縮,甲醇溶解后定容至500 mL,過濾備用待測[2-3]。

        1.4測定方法

        準確吸取一定濃度的標準品溶液或待測樣溶液,置于10 mL比色管中,分別加甲醇至定容5 mL,再加0.5 mL的5%NaNO2溶液,搖勻后靜置5 min,加入0.5 mL的10%Al(NO3)3溶液,混勻后靜置5 min后加入4 mL的4%NaOH溶液,靜置10 min~20 min后用紫外可見分光光度計下比色,檢測波長為420 nm,記錄數(shù)據(jù)。樣品空白:吸取相同體積的待測樣溶液,置于10 mL比色管中,加甲醇定容至5 mL,加水1 mL,再加入4 mL的4%NaOH溶液,備用待測。

        1.5檢測波長的選擇

        依次吸取一系列濃度的標準品溶液和待測樣品溶液依照1.4測定方法進行測試,在370 nm~600 nm波長范圍內(nèi)進行最大吸收峰波長的選擇掃描。

        1.6標準曲線的建立

        準確吸取蘆丁標準溶液(200 μg/mL)0、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 mL,依次置于10 mL比色管中,余下按照1.4和1.5中方法進行測試,依據(jù)檢測的數(shù)據(jù)建立標準曲線和線性回歸方程,繪制以蘆丁標準品的含量為橫坐標,吸光度值為縱坐標的標準曲線圖。

        1.7結(jié)果計算

        采用1.4和1.5中的方法,測定待測溶液的吸光度值(A),并通過標準曲線圖查出待測液中類黃酮的濃度,具體按照下列公式計算食用玫瑰花中類黃酮的含量(320是按上述操作條件,當吸光度值等于1.0時,相當于320 μg)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1檢測波長的選擇

        類黃酮與鋁離子在堿性溶液中會生成紅色絡合物,在370 nm~600 nm之間有吸收光譜。將一定濃度的食用玫瑰類黃酮提取反應液和蘆丁標準品反應液在370 nm~600 nm波長之間進行掃描,得到圖1。

        圖1 反應液掃描光譜圖Fig.1 The photo spectrum of the sample and standard

        從圖1中可知,食用玫瑰類黃酮與對照標準品蘆丁有相似的理化、光學性質(zhì),反應液的吸收光譜圖整體趨勢基本一致,最大吸收峰均在420 nm波長處。

        2.2測定方法中試劑濃度的選擇

        為考察試劑濃度對測定方法的影響,分別選取不同濃度的亞硝酸鈉溶液(2%、4%、6%、8%、10%)、硝酸鋁溶液(2.5%、5.0%、7.5%、10.0%、12.5%)、氫氧化鈉溶液(1%、3%、5%、7%、9%)進行篩選,結(jié)果見圖2。

        圖2 試劑濃度的選擇Fig.2 The result of diferent concentration of the solution

        從圖2中可知,當亞硝酸鈉溶液濃度在5%~8%范圍內(nèi)時,類黃酮與Al3+生成紅色絡合物的吸光度值相對穩(wěn)定;隨硝酸鋁濃度的增加,類黃酮與Al3+生成紅色絡合物的吸光度呈現(xiàn)上升趨勢,當硝酸鋁濃度在5%~10%時,吸光度值相對穩(wěn)定;氫氧化鈉溶液濃度對類黃酮與Al3+生成紅色絡合物的吸光度值影響較小,當氫氧化鈉溶液濃度大于4%時,吸光度值變化幅度很小。故本試驗選擇亞硝酸鈉,硝酸鋁,氫氧化鈉三種溶劑的濃度分別選擇為5%、5%、4%。

        2.3標準曲線和檢出限

        按照1.6進行測試,檢測的結(jié)果見表1。

        對表1進行數(shù)據(jù)分析,獲得標準曲線的線形回歸方程為:Y=0.051 7+0.000 7x,相關系數(shù)為r2=0.999 98,表明在50 mg/L~600 mg/L濃度范圍內(nèi),蘆丁標準溶液的濃度與吸光度有良好的線形關系。對添加低濃度水平的蘆丁標準品的食用玫瑰花樣品進行測定,以10倍信噪比計算方法的檢出限為2.0 mg/kg。

        表1 標準曲線數(shù)據(jù)Table 1 The result of standard curve

        2.4顯色時間穩(wěn)定性評價

        為探討類黃酮與Al3+生成紅色絡合物的穩(wěn)定性是否影響吸光度的測定,本研究取一定濃度的蘆丁標準溶液,按照優(yōu)化后的試驗參數(shù)進行測定,在25℃下檢測不同放置時間對紅色絡合物的吸光度穩(wěn)定性的影響見表2。

        表2穩(wěn)定性試驗Table 2 The stability experiment

        從表2中可知,隨著紅色絡合物生成時間的延長,反應液吸光值有增大趨勢,但增大幅度較小,2 h內(nèi)反應液吸光值變化幅度僅小于2.5%,這表明生成的紅色絡合物在2 h內(nèi)是穩(wěn)定的。為提高測定類黃酮的準確性,本試驗選擇30 min內(nèi)進行比色檢測定量。

        2.5回收率和精密度

        在3個不同測試樣品溶液中加入一定量的蘆丁標準品,按試驗方法測定其加標回收率,測試結(jié)果見表3。

        表3 回收率、精密度的測定(n=6)Table 3 Determination of recovery and precision(n=6)

        從表3中可知,此方法的加標回收率在95.43%~104.67%之間,變異系數(shù)在0.86%~2.57%之間,表明該方法準確度高、重現(xiàn)性好、精密度好。

        3 結(jié)論

        由于近年來國內(nèi)外學者對食用玫瑰花的研究主要是色素方面,對類黃酮等化學成分方面的研究較少。食用玫瑰花中含有蘆丁、槲皮甙、異槲皮甙等類黃酮,而類黃酮與鋁離子在堿性溶液中容易生成紅色絡合物,在適當?shù)臐舛葏^(qū)間里,其濃度與吸光度之間的關系符合朗伯-比爾定律。為此,本研究以蘆丁為對照品,建立了紫外分光光度法測定食用玫瑰花中類黃酮的方法,在420 nm波長處有最大吸收峰,在50 mg/L~600 mg/L濃度范圍之間,吸光度與樣品濃度之間呈現(xiàn)良好的線形關系,檢出限為2.0 mg/kg;回收率在95.43%~104.67%之間,變異系數(shù)在0.86%~2.57%。試驗結(jié)果說明本方法儀器設備要求低、操作簡便快速、穩(wěn)定性高、準確度高、重現(xiàn)性好。

        參考文獻:

        [1]于村.中草藥總黃酮的提取和含量測定[J].浙江預防醫(yī)學,2002, 14(7):15-18

        [2]石紅旗,繆錦來,韓麗,等.銀杏葉提取物中總黃酮測定方法的研究[J],食品科學,2002,23(4):105-107

        [3] 于村,俞莎,沈向紅.保健食品中總黃酮測定方法的研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2002,12(4):401-402

        [4]封士蘭.甘草黃酮的提取分離和含量測定[J].蘭州醫(yī)學院學報, 1998,24(4):20-21

        DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2015.23.038

        收稿日期:2014-04-20

        作者簡介:李絢(1979—),女(漢),工程師,本科,研究方向:食品藥品檢驗。

        Determining the Content of Flavonoids in the Edible Roses by UV Spectrophotometry

        LI Xuan,LONG Min-yi
        (Zhaoqing Institute for Food and Drug Control,Zhaoqing 526020,Guangdong,China)

        Abstract:A method for determination of the concentration of edible rose flaqvonoids was developed by UV spectrophotometry.420 nm was the optimal determinate wavelength.The regression equation was Y=0.051 7+ 0.000 7x.Between the absorbance and the concentration of flavonoids,there was a favorable linear relationship with r2=0.999 98 in the range from 50 mg/L to 600 mg/L,with values of detection limit of 2.0 mg/kg.The average recovery rates were from 95.43%to 104.67%,RSD were from 0.86%to 2.57%.

        Key words:edible rose;flavonoids;UV spectrophotometry

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