杜長英

摘 要：目的：探究如何能夠更加準確的對注射用的甲鈷胺含量進行測定。方法：采用高效液相色譜法以及紫外分光光度法兩種方法對注射用的甲鈷胺含量進行檢測。結(jié)果：通過兩種方法能夠達到預期的效果，都取得了成功。結(jié)論：對于高效液相色譜法以及紫外分光光度法兩種方法而言，雖然都能對注射用甲鈷胺的含量進行測量，但是選擇前者能夠更加的準確性的得出結(jié)論，效果要明顯由于后者，在今后的檢測過程中，可以進一步的對這一檢測方法加以推廣，以實現(xiàn)對注射用的甲鈷胺更加精準的測量。

關(guān)鍵詞：注射用甲鈷胺；液相色譜法；紫外分光光度法；穩(wěn)定性

從性狀上來看，甲鈷胺是一種結(jié)晶性的粉末，主要顏色是暗紅色，沒有明顯的氣味，具有極強的吸濕性，在光照下可以很容易的進行分解，將其置于水中或者乙醇中，具有輕微的溶解現(xiàn)象，而將其置于丙酮或者是氯仿以及乙醚中，并沒有出現(xiàn)溶解的現(xiàn)象，在當前注射用的甲鈷胺中，主要采用的規(guī)格是0.5mg，這一規(guī)格可以確保主藥滿足含量均勻度方面的要求，符合規(guī)定的標準，在當前生產(chǎn)的過程中需要進一步提高主藥均勻性的意識，對均勻度采用合理的含量檢測方法進行檢驗，這樣才能滿足藥物的需求。本文以此為出發(fā)點，采用兩種不同的方法對注射甲鈷胺的含量進行檢測，希望能夠?qū)窈蟮暮繖z測工作帶來一定的幫助。在實驗中需要注意的問題是，因為甲鈷胺見光容易分解，所以需要在避光的環(huán)境下進行實驗。

1 儀器及材料

1.1 儀器。在采用高效液相色譜檢測法中，主要應用的儀器設(shè)備是高效液相色譜儀，主要型號為SPD-10Avp型，能夠?qū)ψ贤饩€進行檢測的可見-紫外檢測器，由日本島津制造所生產(chǎn)，同樣由日本島津制造所生產(chǎn)的可見紫外分光光度計是紫外分光光度法實驗中需要的主要設(shè)備，色譜柱的規(guī)格為C18柱，200mm×4.6mm，生產(chǎn)廠家為迪馬公司。

1.2 材料。在實驗中主要應用的對照品材料是由中國藥品生物制品檢定所提供的甲鈷胺對照品，由邯鄲四友生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的乙腈，還有注射用的甲鈷胺，主要是在制劑室生產(chǎn)獲得的。

2 實驗方法

本實驗主要采用的方法是高效液相色譜法對注射用甲鈷胺的含量進行測定，具體的實驗操作步驟如下。首先是要對檢測波長進行測定，在檢測的過程中應該注意避光操作，因為甲鈷胺遇光會出現(xiàn)分解的現(xiàn)象，從材料中取出適當?shù)募租挵吩希约白⑸溆玫募租挵愤m量，還有滿足實驗要求的適當輔料，在其中加入甲醇，得到溶液。每1mL中含有20μg的溶液，將高效液相色譜儀的波長調(diào)整到190mm至400mm的范圍內(nèi)，采用紫外線的方式進行掃描，能夠得到最大吸收的范圍，甲鈷胺原料在266mm時獲得最大的吸收，樣品在341mm時得到最大吸收，輔料在343mm時獲得最大吸收，因此能夠確定本樣品在266mm時是最為合適的檢測波長。

本實驗中主要的色譜條件如下，選取十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑，流動相為乙腈以及每升0.05mol的磷酸二氫鉀，采用每升1mol的磷酸調(diào)制而成，其酸堿值為3.3，保證主峰的保留時間適當，具備較好的峰形。緊接著對含量進行測定，主要的檢測方法是先避光取出適量的本品，加入流動相，制成供試品溶液，其中每毫升的供試品溶液中含有0.5mg的甲鈷胺溶液，另外取適當?shù)募租挵穼φ掌罚谶M行精密的稱量以后，按照相同的方法進行測定，按照外標法對峰面積進行計算，能夠得出相應的結(jié)果，根據(jù)高效液相含量的測定方法對樣品進行檢測，能夠獲得如下的檢測結(jié)果。見表1。

緊接著采用紫外分光光度法對注射甲鈷胺的含量進行檢測。在檢測波長的確定過程中，同樣是采用上述相同的方法，緊接著線性關(guān)系進行測試，測試的過程中選擇避光操作的方式，先對甲鈷胺對照品進行精密的稱量，在100mL的容量瓶中加入21.38mg的對照品，然后在其中加入甲醇進行溶解以及稀釋，將其搖晃均勻以后達到指定的刻度位置上，再精密的稱取溶液5mL，將其放置在50mL的量瓶中，在其中加入甲醇溶液進行溶解并且稀釋到指定的刻度位置上，均勻的進行搖晃，分別取出1.0、3.0、5.0/7.0以及10.0mL的溶液放置在5個相同的10mL的量瓶中，使用流動相對其進行稀釋，達到指定的刻度位置上以后，均勻的搖晃，根據(jù)參照含量的要求進行檢測。根據(jù)紫外分光光度法規(guī)定的檢測要求，能夠獲得檢測樣品，具體的檢測結(jié)果見表2。

3 討論

從制劑室反饋的信息，制劑室按100%投料。這樣，高效液相色譜法的檢測結(jié)果更接近與實際投料量，且通過上述試驗可以看出，紫外分光光度法的穩(wěn)定性，重復性的RSD均接近于2%。不如高效液相法好。另外紫外分光光度法的取樣量較少，檢測濃度低，容易受干擾，也是造成檢測不夠準確的重要原因。因此，注射用甲鈷胺的含量測定方法還是用高效液相色譜法較好。

甲鈷胺是一種內(nèi)源性的輔酶B12，參與一碳單位循環(huán)，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的轉(zhuǎn)甲基反應過程中起重要作用。體外研究表明，甲鈷胺可促進培養(yǎng)的大鼠組織中卵磷脂的合成和神經(jīng)元髓鞘形成，適用于周圍神經(jīng)病變。動物實驗表明，本品比氰鈷胺易于進入神經(jīng)元細胞器，參與腦細胞和脊髓神經(jīng)元胸腺嘧啶核苷的合成，促進葉酸的利用和核酸代謝，且促進核酸和蛋白質(zhì)合成作用較氰鈷胺強；能促進軸突運輸功能和軸突再生，使鏈脲霉素誘導的糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)軸突骨架蛋白的運輸正?；粚λ幬镆鸬纳窠?jīng)退變，如阿霉素、丙烯酰胺、長春新堿引起的小鼠軸突退變及自發(fā)高血壓大鼠神經(jīng)疾病，具有抑制作用；能使延遲的神經(jīng)突觸傳遞和神經(jīng)遞質(zhì)減少恢復正常，通過提高神經(jīng)纖維興奮性，恢復終極板電位誘導，使飼以膽堿缺乏飼料大鼠的腦內(nèi)乙酰膽堿恢復到正常水平。

甲鈷胺注射液，適應癥為用于周圍神經(jīng)病。因缺乏維生素B12引起的巨紅細胞性貧血的治療。甲鈷胺易轉(zhuǎn)移至神經(jīng)細胞的細胞器，從而促進核酸和蛋白質(zhì)的合成。甲鈷胺較氰鈷胺更易轉(zhuǎn)移入大白鼠的神經(jīng)細胞的細胞器。在小鼠的腦細胞和脊髓神經(jīng)細胞的實驗中，參與由脫氧尿嘧啶核苷合成胸腺嘧啶核苷的過程，促進葉酸的利用和核酸的代謝。而且，甲鈷胺比鈷酰胺更能促進大鼠的核酸和蛋白質(zhì)的合成。促進軸索內(nèi)輸送和軸索的再生。在由給與鏈脲菌素引起糖尿病大白鼠模型的坐骨神經(jīng)細胞，可使軸索結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的輸送正?；?。對由阿霉素、丙烯酰胺、長春新堿引起的藥物性神經(jīng)障礙（大白鼠、兔）以及軸索變形小白鼠模型，自然發(fā)病糖尿病大白鼠的神經(jīng)障礙在神經(jīng)病理學、電生理學上可抑制變性神經(jīng)的出現(xiàn)。此外還能促進正紅血母細胞的成熟、分裂、改善貧血血像。缺乏維生素B12可能導致巨紅細胞性貧血，本藥促進在骨髓中核酸的合成及正紅血母細胞的成熟、分裂、增加紅細胞的產(chǎn)生。本藥可迅速恢復因B12缺乏而降低的大白鼠紅細胞數(shù)、血紅蛋白、血細胞比容值。

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