郭艷華 王新建 白全召

[摘要]目的探究乙型病毒性肝炎（乙肝）患者血清乙肝病毒外膜大蛋白（HBV-LP）與乙肝病毒的脫氧核糖核酸（HBV-DNA）相關(guān)性及HBV-LP檢測(cè)對(duì)乙肝患者臨床診斷意義。方法通過(guò)酶聯(lián)免疫法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HBV感染者血清內(nèi)HBV-LP、HBV-DNA含量。結(jié)果相同模式乙肝病毒血清標(biāo)志物（HBV-M）患者血清內(nèi)HBV-LP與HBV-DNA檢測(cè)情況對(duì)比無(wú)明顯差異（P<0.05）。HBV-DNA陽(yáng)性血清中HBV-LP陽(yáng)性檢出率明顯優(yōu)于HBeAg陽(yáng)性率，HBV-LP OD值與HBV-DNA拷貝數(shù)呈正相關(guān)聯(lián)（P<0.05）。結(jié)論乙肝病毒外膜大蛋白與HBV-DNA存在較好的相關(guān)性，可以通過(guò)檢測(cè)HBV-LP水平判斷乙肝病毒復(fù)制情況，對(duì)臨床診斷和療效評(píng)價(jià)有重要意義。

[關(guān)鍵詞]乙肝病毒外膜大蛋白;HBV-DNA;相關(guān)性

目前乙型病毒性肝炎作為臨床常見(jiàn)疾病，由于傳染性強(qiáng)、病死率高，已經(jīng)危害人類(lèi)健康?，F(xiàn)在臨床診斷此類(lèi)疾病，主要是依靠檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物，但其僅能判斷病毒入侵，無(wú)法準(zhǔn)確反映病毒復(fù)制情況及是否有傳染性。目前只有通過(guò)檢測(cè)HBV-DNA才可以精確判斷乙肝病毒是否有傳染性，而HBV-LP作為乙肝病毒的包膜蛋白，可以用來(lái)監(jiān)測(cè)乙肝病毒感染、復(fù)制及預(yù)后。這里我們通過(guò)測(cè)定乙肝患者血清HBV-LP、HBV-DNA含量，探究它們之間的相關(guān)性及HBV-LP檢測(cè)對(duì)乙肝患者臨床診斷意義。

1 材料與方法

1.1 材料 在2013年3月至2014年3月之間隨機(jī)選取150例門(mén)診及住院乙肝患者，男性102例，女性48例，年齡在18～66歲，平均45.7歲，均符合2000年國(guó)家制定病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。空腹取血樣，離心取上層血清置-80℃冰箱保存。

1.2 方法 HBV-M及HBV-LP檢測(cè)均用酶聯(lián)免疫法，試劑盒購(gòu)于（上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司）;HBV-DNA檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，試劑盒購(gòu)于（珠海賽樂(lè)奇生物技術(shù)有限公司）;操作步驟按試劑說(shuō)明書(shū)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)材料用卡方檢驗(yàn)，組間比較用t檢驗(yàn)，P<0.05有差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV-M 模式下HBV-LP、HBV-DNA檢出情況 結(jié)果說(shuō)明在相同HBV-M模式下HBV-LP與HBV-DNA的檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 不同HBV-M 模式下HBV-LP、HBV-DNA檢出情況

HBV-M

例數(shù)

HBV-DNA/陽(yáng)性率

HBV-LP/陽(yáng)性率

1、4、5

89

42（47.2%）

40（44.9%）

1、3、5

37

32（86.5%）

31（83.8%）

1、5

4

0

0

1、2、4、5

6

0

0

2、4、5

9

0

0

2、5

5

0

0

合計(jì)

150

74（49.3%）

71（47.3%）

注：模式中1是HBsAg，2是HBsAb，3是HBeAg，4是HBeAb，5是HBcAb

2.2 血清HBV-DNA和HBV-LP吸光度值（OD）檢測(cè)結(jié)果 74例乙肝患者血清內(nèi)HBV-DNA拷貝數(shù)增多，同時(shí)HBV-LP OD值也增大，兩者表現(xiàn)正相關(guān)聯(lián)， 其相關(guān)系數(shù)r=0.921。

表2 血清HBV-DNA和HBV-LP吸光度值（OD）檢測(cè)結(jié)果

HBV-DVA（例數(shù)）

HBV-DNA（ copies/ml）

HBV-LP（OD值）

HBV-LP（例數(shù)/陽(yáng)性率）

22

10³

0.65±0.31

16（72.7%）

14

10⁴

0.88±0.20

11（78.6%）

15

10⁵

1.18±0.30

13（86.7%）

12

10⁶

1.40±0.25

11（91.7%）

11

10⁷

1.98±0.33

11（100%）

2.3 HBV-DNA陽(yáng)性血清HBV-LP與HBeAg陽(yáng)性率比較 根據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在74例HBV-DNA陽(yáng)性血清中HBV-LP的陽(yáng)性率是83.8%（62/74），

HBeAg的陽(yáng)性率是43.2%（32/74）， HBV-LP陽(yáng)性率明顯優(yōu)于HBeAg，兩者差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3 討論

目前臨床檢測(cè)乙肝患者病情情況及預(yù)后主要是通過(guò)定量檢測(cè)乙肝病毒標(biāo)志物，但是對(duì)病毒早期復(fù)制情況不能準(zhǔn)確判斷，這樣對(duì)臨床早期診治的造成了較大難度。目前只有HBV-DNA能準(zhǔn)確反映乙肝病毒復(fù)制及傳染性情況，是臨床判定乙肝病毒復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)，特別是對(duì)HBeAg陰性乙肝患者有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值^[1]，但是目前在基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)尚不能獨(dú)立開(kāi)展核酸檢測(cè)，針對(duì)乙肝患者只能靠HBeAg轉(zhuǎn)換以及肝功能判斷病毒復(fù)制情況，況且還有部分HBeAg陰性乙肝患者由于病毒基因出現(xiàn)變異，甚至無(wú)法合成HBeAg，出現(xiàn)HBeAg 陰性但病毒仍在復(fù)制現(xiàn)象^[2]。HBV-LP是HBV Dane氏顆粒及亞病毒顆粒的主要組成部分，它在HBV病毒感染早期與細(xì)胞受體結(jié)合并誘導(dǎo)攝入病毒，直到感染晚期它還參與病毒組裝及分泌，因此檢測(cè)HBV-LP能夠反映病毒復(fù)制情況和預(yù)后^[3-5]。有研究發(fā)現(xiàn)在治療乙肝中病毒DNA水平可以呈現(xiàn)快速降低，速度明顯快于HBV-LP，導(dǎo)致血清內(nèi)HBV-LP水平減少速度慢，最終晚于HBV-DNA消失，因此檢測(cè)血清內(nèi)HBV-LP水平能反映出臨床治療效果^[6]。

我們研究發(fā)現(xiàn)相同HBV-M模式中HBV-DNA與HBV-LP陽(yáng)性率沒(méi)有差異;72例HBV-DNA陽(yáng)性血清中，HBV-LP的陽(yáng)性率是83.8%（62/72），HBeAg的陽(yáng)性率是43.2%（32/72）。這些結(jié)果表明HBV-LP對(duì)判斷乙肝患者病毒復(fù)制情況明顯優(yōu)于HBeAg，并且它與HBV-DNA在陽(yáng)性檢出率效果類(lèi)似，因此HBV-LP能準(zhǔn)確反映乙肝病毒復(fù)制水平，可以作為臨床判斷乙肝病毒復(fù)制情況的血清學(xué)指標(biāo)。

總之，HBV-LP作為判斷乙肝病毒復(fù)制的血清學(xué)指標(biāo)，特別是在HBeAg檢測(cè)表現(xiàn)陰性情況下，它能準(zhǔn)確反映出乙肝患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況，在臨床應(yīng)用中有非常重要的應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)由于它的檢測(cè)費(fèi)用經(jīng)濟(jì)、步驟簡(jiǎn)便、操作容易可行，也不需要建立專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室及購(gòu)買(mǎi)昂貴的檢測(cè)儀器，特別適合在基層醫(yī)院推廣使用，這對(duì)臨床診斷和治療效果評(píng)價(jià)有重要作用。

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