李影雄，馬 存，劉林生，招麗娟，王定勇*(.佛山市中醫(yī)院 藥劑科，廣東 佛山 58000；. 廣東藥學(xué)院 藥科學(xué)院，廣東 廣州 50006)

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大葉鉤藤總生物堿抗抑郁作用初步研究

李影雄1，馬 存2，劉林生1，招麗娟1，王定勇2*
(1.佛山市中醫(yī)院 藥劑科，廣東 佛山 528000；2. 廣東藥學(xué)院 藥科學(xué)院，廣東 廣州 510006)

目的：研究大葉鉤藤總生物堿的抗抑郁活性。方法：采用小鼠懸尾實驗、小鼠強(qiáng)迫游泳實驗和利血平致抑郁小鼠自主活動實驗，考察大葉鉤藤總生物堿的抗抑郁活性。結(jié)果：大葉鉤藤總生物堿低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組均能減少小鼠懸尾和強(qiáng)迫游泳不動時間，并能增加利血平致抑郁小鼠自主活動次數(shù)，與空白對照組、模型對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論：大葉鉤藤總生物堿具有明顯的抗抑郁作用。

大葉鉤藤；總生物堿；抗抑郁

抑郁癥(Depression)是一種由多種原因引起的復(fù)雜情感性精神障礙，主要表現(xiàn)為情緒持續(xù)低落、思維遲鈍、意志行為減少，嚴(yán)重者還伴有自殺傾向，已成為最常見的心理疾病之一，社會危害性大。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2020年抑郁癥將成為僅次于心臟病的第二大疾病[1]。目前抑郁癥主要采用化學(xué)藥物治療，盡管療效肯定，但都存在著副作用及長期服用易產(chǎn)生耐藥性等問題。因此研制副作用小、療效好、適合長期服用的抗抑郁藥日益受到重視。我國天然資源豐富，許多中草藥及其有效成分被證明具有較好的抗抑郁活性，從天然資源中尋找新型抗抑郁藥大有可為[2]。

大葉鉤藤(UncariamacrophyllaWall.)為茜草科鉤藤屬植物, 為常用中藥，可用于治療頭暈?zāi)垦?、驚癇抽搐、全身麻木等心腦血管和神經(jīng)系統(tǒng)疾病[3]。作者曾對大葉鉤藤的化學(xué)成分及其總生物堿的提取方法進(jìn)行了較詳細(xì)的研究[4-6]；HPLC法顯示大葉鉤藤總生物堿主要含鉤藤堿、異鉤藤堿、柯諾辛堿和柯諾辛堿B，且該4種生物堿占總生物堿的比例達(dá)95.6%。作為大葉鉤藤深入研究的一部分，本研究報道大葉鉤藤總生物堿的抗抑郁作用。利用小鼠懸尾、小鼠強(qiáng)迫游泳和抑郁小鼠自主活動3種實驗，初步探討大葉鉤藤總生物堿的抗抑郁活性,現(xiàn)報道如下。

1 材料與儀器

1.1 試驗藥物

大葉鉤藤總生物堿由廣州來普達(dá)克生物技術(shù)有限公司提供，純度98.6%，用1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液配成混懸液，冰箱中保存?zhèn)溆茫褂们罢駬u均勻；利血平為廣東邦明制藥廠有限公司產(chǎn)品，批號H44021892；百優(yōu)解為禮來蘇州制藥有限公司產(chǎn)品，批號A070884，臨用前用1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液配成混懸液，備用。1.2 動物

雄性昆明種小鼠，體重18～22g，購于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，合格證號：SCXK [粵]2008-0002。1.3 儀器

多功能小鼠自主活動記錄儀YLS-1A(北京吉安得爾科技有限公司產(chǎn)品)。

2 方法及結(jié)果

2.1 小鼠懸尾實驗

將100只雄性小鼠隨機(jī)分為5組，每組20只，分別為空白對照組、百優(yōu)解組(35mg/kg)、大葉鉤藤總生物堿低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組，各組均按0.2mL/10g體重灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7天。空白對照組灌服同體積的1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液。末次給藥或1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液60min后，將小鼠尾部距末端1cm處用膠布貼于懸尾箱支架上，使小鼠成倒掛狀態(tài)，其頭部離箱底約5cm。懸掛時間為6min，統(tǒng)計小鼠后4min內(nèi)懸尾累積不動時間(不動狀態(tài)即小鼠在空中停止掙扎或僅有細(xì)小的肢體運(yùn)動)[7]。2

.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實驗

分組及給藥方法同“2.1”項，末次給藥或1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液60min后，將小鼠頭部朝下放入水深10cm、直徑34cm的游泳桶內(nèi)，水溫(25±2)℃，觀察6min內(nèi)小鼠游泳情況，統(tǒng)計小鼠后4min內(nèi)游泳累積不動時間(不動狀態(tài)即小鼠停止掙扎或小鼠呈漂浮狀態(tài)，小鼠四肢有輕微動作以保持頭部在水面)[8]。

2.3 小鼠自主活動實驗

將120只雄性小鼠隨機(jī)分為6組，每組20只，分別為空白對照組、模型組、百優(yōu)解組(35mg/kg)、大葉鉤藤總生物堿低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)劑量組，各組均按0.2mL/10g體重灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7天。空白對照組灌服同體積的1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液。末次給藥或1.5%羧甲基纖維素鈉水溶液60min后，除空白對照組外各組腹腔注射利血平1mg/kg，1h后將小鼠放入小鼠自主活動測定儀，記錄小鼠5min內(nèi)自主活動次數(shù)。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理

2.5.1 大葉鉤藤總生物堿對小鼠懸尾不動時間的影響 大葉鉤藤總生物堿低、中、高劑量組小鼠懸尾不動時間均短于空白對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。而對照藥百優(yōu)解組小鼠后4min的不動時間明顯縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果見表1。

表1 大葉鉤藤總生物堿對小鼠懸尾不動時間的影響 (n=20)

注：與空白對照組比較，*P<0.05,**P<0.01。

2.5.2 大葉鉤藤總生物堿對小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間的影響 大葉鉤藤總生物堿低、中、高劑量組小鼠強(qiáng)迫游泳的不動時間均短于空白對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。而對照藥百優(yōu)解組小鼠后4min的不動時間明顯縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。詳見表2。

表2 大葉鉤藤總生物堿對小鼠強(qiáng)迫游泳不動時間的影響 (n=20)

注：與空白對照組比較，*P<0.05,**P<0.01。

2.5.3 大葉鉤藤總生物堿對小鼠自主活動的影響 大葉鉤藤總生物堿低、中、高劑量組小鼠自主活動次數(shù)明顯多于模型對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。并與劑量呈正相關(guān)性。詳見表3。

表3 大葉鉤藤總生物堿對小鼠自主活動的影響 (n=20)

注：與模型對照組比較，#P<0.05,##P<0.01。

3 討論

小鼠強(qiáng)迫游泳(Forced Swimming Test, FST)和懸尾(Tail Suspension Test, TST)實驗是目前廣泛應(yīng)用的2種抗抑郁藥評價動物模型實驗，其基本原理是：在強(qiáng)迫游泳或懸尾的應(yīng)激條件下，小鼠經(jīng)掙扎后出現(xiàn)絕望表現(xiàn)，即不動狀態(tài)，而抗抑郁藥能縮短小鼠的不動時間。

本實驗采用上述2種經(jīng)典抗抑郁模型對大葉鉤藤總生物堿進(jìn)行了初步抗抑郁活性測試，實驗結(jié)果表明：大葉鉤藤總生物堿能明顯縮短強(qiáng)迫游泳小鼠和懸尾小鼠后4min內(nèi)的不動時間，且與給藥劑量有一定相關(guān)性。此外，大葉鉤藤總生物堿能增加利血平致抑郁小鼠自主活動次數(shù)，提示大葉鉤藤總生物堿抗抑郁機(jī)制可能與單胺遞質(zhì)有關(guān)。本實驗結(jié)果表明大葉鉤藤總生物堿能夠增強(qiáng)實驗小鼠的應(yīng)激耐受性，減少絕望小鼠的不動時間，具有明顯的抗小鼠實驗性抑郁作用。

大葉鉤藤資源豐富，其總生物堿提取方法簡單且成分與含量清楚，具有潛在開發(fā)前景。本研究結(jié)果對于促進(jìn)大葉鉤藤資源合理利用有一定參考價值。但大葉鉤藤總生物堿抗抑郁活性是其中4種成分協(xié)同作用還是某一種成分起作用,具體機(jī)制如何,還有待進(jìn)一步研究和證實。

[1] MALA A, KARKOU V, MEEKUMS B, et al. Dance/Movement Therapy (D / MT) for depression: A scoping review [J]. The Arts in Psychotherapy, 2012(39): 287-295.

[2] 楊小瑩, 陳杰, 楊新明, 等. 抗抑郁藥物及其研究方法的進(jìn)展[J]. 中國中藥雜志, 2007, 32(9):770-773.

[3] 國家藥典委員會. 中國藥典[S]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2000: 211.

[4] 鄭嘉寧, 王定勇. 大葉鉤藤生物堿類化學(xué)成分研究[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報, 2009, 15 (1): 80-81.

[5] 伍俊妍, 李國成, 王定勇. 大葉鉤藤非生物堿部分的化學(xué)成分研究[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2007, 27(2): 226-227.

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[7] STERU L, CHERMAT R, THIERRY B, et al. The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice [J]. Psychopharmacology, 1985(85): 367-369.

[8] PORSOLT RD, BERTIN A, JALFRE M. Behavioural despair in mice: a primary screening test for anti-depressants [J]. Arch Inc Pharmacodyn Ther, 1977(229): 327-329.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Preliminary Study on Antidepressant Effect of Total Alkaloids fromUncariamacrophylla

Li Yingxiong1, Ma Cun2, Liu Linsheng1, Zhao Lijuan1，Wang Dingyong2*
(1.Department of Pharmacy, Foshan Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan 528000, China;2.College of Pharmacy, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

Objective:To study the antidepressant effect of total alkaloids fromUncariamacrophyllaWall. in mice. Methods:To investigate the antidepressant activities of total alkaloids fromU.macrophyllaby the mice tail suspension test, the mice forced swimming test and the freely active test in depressant mice caused by reserpine. Results:The different dose groups (50mg/kg, 100mg/kg, 200mg/kg) of total alkaloids from U. macrophylla could reduce the immobility time of mice in the tail suspension test and the forced swimming test, and also increase the times of free activities in the freely active test, compared with that of the control group or model group (P<0.05 orP<0.01). Conclusion:The total alkaloids fromU.macrophyllapossessed the significant antidepressant effect.

Uncariamacrophylla; Total Alkaloids; Antidepressant Effect

2015-04-27

廣東省中醫(yī)藥局科研課題(20132030)

李影雄(1967-)，男，廣東省佛山市中醫(yī)院副主任藥師，研究方向為醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：fsliyi2007@21cn.com

王定勇(1967-)，男，博士，廣東藥學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向為天然藥物活性成分。E-mail：wdingyong@163.com

R285.5

A

1673-2197(2015)15-0015-02

10.11954/ytctyy.201515005