王 鳳 張 萍 段文元 俞立瑋 趙健元 桂永浩

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·論著·

TBX2 基因3′非翻譯區(qū)位點(diǎn)rs59382073與漢族人群散發(fā)型先天性心臟病的易感性密切相關(guān)

王 鳳1張 萍1段文元2俞立瑋1趙健元3桂永浩1

目的 分析TBX2基因3′UTR變異位點(diǎn)與漢族人群散發(fā)型先天性心臟病(CHD)的遺傳易感性是否關(guān)聯(lián)，初步探討其可能的發(fā)病機(jī)制。方法納入2010年8月至2012年4月山東濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心血管病研究所診斷的非綜合征型漢族CHD為CHD組，以同期醫(yī)院和社區(qū)體檢的健康兒童為對(duì)照組。選擇CHD組和對(duì)照組各24例行TBX2 3′UTR測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果在CHD組和對(duì)照組分別行SNaPshot基因分型和關(guān)聯(lián)分析；通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染及熒光素酶檢測(cè)對(duì)陽(yáng)性位點(diǎn)進(jìn)行功能分析。結(jié)果CHD組納入768例，年齡(6.1±4.8)歲, 男383例(49.9%)；對(duì)照組納入660例，年齡(6.5±3.2)歲, 男354例(53.6%)。①24例CHD和24例對(duì)照行TBX2 基因3′UTR 區(qū)測(cè)序發(fā)現(xiàn)3個(gè)已知的SNPs位點(diǎn)：rs59382073、rs1058004和rs729782，未檢出新發(fā)SNPs位點(diǎn)。②樣本采集中期CHD和對(duì)照組各288例樣本的關(guān)聯(lián)分析顯示，rs59382073的基因型在CHD組和對(duì)照組的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.012)；余2 個(gè)SNPs 在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.5)，后續(xù)樣本未行該2個(gè)SNPs檢測(cè)。③全樣本關(guān)聯(lián)分析顯示，TBX2 3′UTR rs59382073位點(diǎn)與散發(fā)型CHD的患病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)，GT/TT基因型較GG基因型可導(dǎo)致CHD的患病風(fēng)險(xiǎn)增加2.13倍(OR=2.13, 95%CI：1.51～2.99,P=1.44×10-5)；進(jìn)一步分層分析顯示，與GG基因型相比，GT/TT基因型增加2.75倍圓椎動(dòng)脈干畸形(OR = 2.75, 95%CI :1.57～4.81，P=3.99×10-4)、3.18倍法洛四聯(lián)癥(OR=3.18, 95%CI:1.53～6.61，P=1.90×10-3)和1.70倍室間隔缺損(OR=1.70, 95%CI:1.17～2.46，P=5.14×10-3)的患病風(fēng)險(xiǎn)。④細(xì)胞水平的功能研究提示，與G等位基因相比，轉(zhuǎn)染T 等位基因可分別導(dǎo)致HEK 293 T及H9C2細(xì)胞的熒光素酶活性下降29.2%和33.6%。結(jié)論TBX2 3′UTR rs59382073 位點(diǎn)可顯著增加漢族人群散發(fā)型CHD的患病風(fēng)險(xiǎn)；其不同等位基因的熒光素酶表達(dá)水平存在差異，為潛在的功能位點(diǎn)。

先天性心臟??；TBX2基因； 單核苷酸多態(tài)性； 3′非翻譯區(qū)

TBX2基因是T-box轉(zhuǎn)錄因子基因家族的成員之一，表達(dá)于胚胎發(fā)生中的多個(gè)組織和器官。在鼠和雞胚的心臟發(fā)育中，表達(dá)于流出道、內(nèi)彎、房室管和流入道的心肌，與非腔室分化的心肌帶相符[1～4]。作為潛在的轉(zhuǎn)錄抑制因子，Tbx2主要限制腔室特異性基因的表達(dá)，維持正常的心腔分化[1]。房室心肌Tbx2過(guò)表達(dá)導(dǎo)致心膠質(zhì)和心內(nèi)膜墊的異位，心肌保持原始狀態(tài)，線性心管無(wú)法環(huán)化，腔室分化受阻[5]，而Tbx2純合缺失的小鼠出現(xiàn)房室管和流出道的畸形[6]，提示其對(duì)于胚胎心臟的正常發(fā)育非常重要。

先天性心臟病(CHD)在活產(chǎn)嬰兒中的發(fā)病率為6‰～10‰[7]，但對(duì)其發(fā)生機(jī)制的理解仍然很局限。研究顯示，Tbx2 在心臟發(fā)育中的重要作用具有劑量敏感性[1]，其表達(dá)量的改變可能引發(fā)心臟畸形。然而，目前關(guān)于TBX2基因突變或表達(dá)異常引起CHD的研究較少，僅有的數(shù)據(jù)集中于17q23.1q23.2重復(fù)微缺失[8]、17q23.2重復(fù)(包含TBX2全基因)[9]以及啟動(dòng)子區(qū)突變[10]，而對(duì)于同樣調(diào)控基因表達(dá)量的3′非翻譯區(qū)(3′UTR)變異未見(jiàn)報(bào)道。為此，本研究擬通過(guò)較大樣本量的CHD病例-對(duì)照研究，分析TBX2 3′UTR單核苷酸多態(tài)性(SNPs)分布與CHD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性，并嘗試初探其可能的作用機(jī)制。

1 方法

1.1 倫理 本研究經(jīng)復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，流行病學(xué)調(diào)查資料收集及血樣采集均經(jīng)研究對(duì)象知情同意。

1.2 CHD組納入標(biāo)準(zhǔn) ①濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心血管病研究所診斷的漢族兒童CHD連續(xù)病例；②CHD經(jīng)彩色多普勒超聲心動(dòng)圖或心導(dǎo)管檢查診斷，或外科手術(shù)證實(shí)。

1.3 CHD組排除標(biāo)準(zhǔn) ①家族中有CHD患者；②合并心血管系統(tǒng)以外的畸形，如唐氏綜合征、Holt-Oram綜合征、Alagille綜合征、DiGeorge綜合征、William綜合征和Noonan綜合征等；③合并腫瘤等全身性疾??；④患兒家長(zhǎng)拒絕參與研究。

1.4 對(duì)照組納入和排除標(biāo)準(zhǔn) ①濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心血管病研究所就診的健康兒童，濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院在濟(jì)南市15所小學(xué)常規(guī)進(jìn)行健康體檢的兒童；②漢族；③性別和年齡與CHD組盡量匹配；④排除患遺傳性疾病和CHD等出生缺陷者。

1.5 血標(biāo)本的采集 CHD組為病例診斷時(shí)臨床必須的采血；對(duì)照組為健康體檢時(shí)臨床檢測(cè)的剩余血樣。

1.6 位點(diǎn)初篩和分型預(yù)篩

1.6.1 位點(diǎn)預(yù)篩 為避免遺漏新發(fā)SNPs位點(diǎn)及確認(rèn)本研究樣本存在的位點(diǎn)，SNPs定義為最小等位基因頻率(MAF)>1%的位點(diǎn)，即若需至少發(fā)現(xiàn)1例存在相應(yīng)位點(diǎn)，則兩組共需48例(1/96，>1%)，故選擇CHD組和對(duì)照組各24例對(duì)TBX2 基因3′UTR 區(qū)行測(cè)序。

1.6.2 分型初篩 在樣本采集的中期，對(duì)收集到的CHD組和對(duì)照組樣本采用SNaPshot技術(shù)行基因分型預(yù)篩。對(duì)各基因型差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.5)的位點(diǎn)，后續(xù)收集的樣本不再進(jìn)行基因分析檢測(cè)。為確認(rèn)SNaPshot技術(shù)基因分型的準(zhǔn)確性，選擇20%的樣本行測(cè)序驗(yàn)證，鑒定兩種方法檢測(cè)基因型的一致率。

1.7 基因分型

1.7.1 PCR產(chǎn)物純化 取多重PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，加入TAKARA公司的ExoⅠ和SAP酶，按照說(shuō)明提供的反應(yīng)體系進(jìn)行產(chǎn)物純化。

1.7.2 延伸反應(yīng) 依據(jù)測(cè)序結(jié)果獲得相應(yīng)位點(diǎn)信息，按表1設(shè)計(jì)延伸引物，取純化產(chǎn)物，采用美國(guó)ABI公司的SNaPshot試劑盒行延伸反應(yīng)。

1.7.3 基因分型 獲得延伸產(chǎn)物后再次行產(chǎn)物純化，取1 μL產(chǎn)物由ABI 3130分析儀毛細(xì)管電泳分析，應(yīng)用Peak Scanner軟件分析數(shù)據(jù)。

1.8 熒光素酶表達(dá)檢測(cè) 為明確陽(yáng)性位點(diǎn)是否為潛在的功能位點(diǎn)，采用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)野生型和突變型重組載體轉(zhuǎn)染對(duì)于外源熒光素酶表達(dá)量的影響，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.8.1 細(xì)胞培養(yǎng) 采用的大鼠心肌細(xì)胞(H9C2)購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，HEK-293T 細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室所有。采用DMEM 高糖完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。所有培養(yǎng)基均添加10% 胎牛血清，含青霉素100 U·mL-1、鏈霉素50 μg·mL-1，置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱。

表1 基因分型和質(zhì)粒構(gòu)建所用引物的DNA序列Tab 1 DNA sequence of all used primers

1.8.2 質(zhì)粒構(gòu)建 擴(kuò)增目的片段，選擇Promega公司的psiCHECKTM-2質(zhì)粒多克隆位點(diǎn)的XhoⅠ和NotⅠ作為酶切插入位點(diǎn)進(jìn)行野生型載體構(gòu)建并測(cè)序驗(yàn)證。設(shè)計(jì)定點(diǎn)誘變引物(表1)，以構(gòu)建好的野生型重組載體為模板，使用TOYOBO公司的KOD-Plus酶進(jìn)行質(zhì)粒誘變，構(gòu)建突變型載體，并測(cè)序鑒定。

1.8.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 細(xì)胞按相應(yīng)密度接種于24孔板，每孔(0.5～2)×105個(gè)細(xì)胞，鋪板后18～24 h進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。采用Life Technologies公司的脂質(zhì)體Lipofectamine 2000和Gibco公司的Opti-MEM培養(yǎng)液、取熒光素酶重組報(bào)告載體100 ng進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后4～6 h換完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

1.8.4 熒光素酶檢測(cè) 轉(zhuǎn)染24 h后收集細(xì)胞。采用Promega 公司的Dual-Luciferase Reporter Assay System試劑盒，參照GloMax96 Microplate Luminometer 熒光檢測(cè)儀使用說(shuō)明，檢測(cè)熒光素酶活性。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 2010年8月至2012年4月CHD組納入768例，男383例(49.9%)，年齡(6.1±4.8)歲；對(duì)照組納入660例，男354例(53.6%)，年齡(6.5±3.2)歲，兩組性別構(gòu)成和年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.09和0.06)。

CHD組參照Botto等[11]標(biāo)準(zhǔn)行CHD分型，包括間隔缺損520例(67.7%)、圓椎動(dòng)脈干畸形97 例(12.6%)、右室流出道梗阻(RVOTO)26例(3.4%)、左室流出道梗阻(LVOTO)16例(2.1%)、肺靜脈異位回流(APVR)13例(1.7%)、復(fù)雜CHD 13例(1.7%)、房室間隔缺損(AVSD)11例(1.4%)和其他72例(9.4%，如PDA等)。具體CHD表型中室間隔缺損(VSD)396例(51.6%)，房間隔缺損45例(5.9%)和法洛四聯(lián)癥45例(5.9%)。

2.2TBX2 基因3′UTR區(qū)SNPs的鑒定 CHD和對(duì)照組各24例行TBX2 基因3′UTR 區(qū)測(cè)序發(fā)現(xiàn)3個(gè)已知的SNPs位點(diǎn)：rs59382073(圖1A)、rs1058004(圖1B)和rs729782(圖1C)，未檢出新發(fā)SNPs位點(diǎn)。

2.3TBX2 基因3′UTR 區(qū)候選SNPs 的初篩 在樣本采集的中期，CHD組和對(duì)照組各288 例采用SNaPshot 基因分型技術(shù)對(duì)上述3 個(gè)SNPs 行初步的關(guān)聯(lián)分析?；蚍中团c測(cè)序鑒定基因型的一致率達(dá)100%。3個(gè)位點(diǎn)的分型成功率分別為98.6%(rs59382073)、96.5%(rs1058004)和97.0%(rs729782)。結(jié)果顯示，rs59382073基因型在CHD組和對(duì)照組的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[GG型：264/283(93.3%)vs248/285(87.0%); GT型：19/283(6.7%)vs37/285(13.0%)；P=0.012]，該位點(diǎn)位于3′UTR 終止密碼子后第218 位。表2顯示，余2 個(gè)SNPs 在兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.5)，后續(xù)樣本未行該2個(gè)SNPs檢測(cè)。3個(gè)位點(diǎn)在對(duì)照組中的頻率分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P均>0.05)。

圖1TBX2 3′UTR鑒定出的3個(gè)SNPs測(cè)序圖

Fig 1 Sequencing results of the three identified SNPs inTBX2 3′UTR

Notes A: rs59382073; B: rs1058004; C: rs729782

表2 TBX2 3′UTR鑒定的3個(gè)SNPs在CHD和對(duì)照組的基因型分布[n/N(%)]Tab 2 Genotype frequency of TBX2 3′UTR SNPs in CHD patients and controls[n/N(%)]

NotesPvalue of Hardy-Weinberg equilibrium in control group；In logistic regression analysis, dependent factors 1 and 0 denoted CHD group and control group, respectively

2.4 rs59382073位點(diǎn)與CHD的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性分析 32例樣本因未獲得PCR產(chǎn)物而無(wú)法分型，故CHD組748/768例和對(duì)照組648/660例行基因分型?？紤]到中期分期樣本中未檢出rs59382073 位點(diǎn)TT型，CHD風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)分析時(shí)合并GT和TT型的數(shù)據(jù)。Logistic回歸結(jié)果顯示(表2)，與野生型GG 基因型相比，攜帶TBX2 3′UTR rs59382073位點(diǎn)的GT/TT基因型增加2.13倍CHD的患病風(fēng)險(xiǎn)(OR = 2.13, 95%CI ：1.51～2.99,P=1.44×10-5)，T等位基因較G等位基因增加2.24倍的CHD患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.24, 95%CI：1.56～3.22，P=1.36×10-5)。

進(jìn)一步按CHD 類型行分層分析(表3)，與GG基因型相比，攜帶GT/TT型者圓錐動(dòng)脈干畸形的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加2.75倍(OR=2.75, 95%CI ：1.57～4.81，P=3.99×10-4)，VSD類型CHD患病風(fēng)險(xiǎn)增加1.70 倍(95%CI:1.17～2.46,P=5.14×10-3)，法洛四聯(lián)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加3.18倍(95%CI：1.53～6.61，P=1.90×10-3)。

表3 rs59382073位點(diǎn)與各類CHD關(guān)聯(lián)的分層分析Tab 3 Stratified analysis of rs59382073 with CHD classification

Notes LVOTO: left ventricular outfow tract obstruction; RVOTO: right ventricular outfow tract obstruction; APVR: anomalous pulmonary venous return. The GG and GT/TT in control group were 594/648 and 54/648, respectively

2.5 rs59382073位點(diǎn)熒光素酶的表達(dá) 熒光素酶的表達(dá)檢測(cè)結(jié)果顯示，在HEK 293T細(xì)胞系psiCHECK基線、psiCHECK-T、psiCHECK2-G載體的熒光素酶表達(dá)量分別為(1.82±0.05)、(2.38±0.11)和(3.36±0.22)；在H9C2細(xì)胞系分別為(12.8±1.80)、(16.9±2.0)和(25.5±4.13)；psiCHECK-T 載體的熒光素酶表達(dá)量均顯著低于psiCHECK2-G 載體(P<0.05)。

3 討論

本研究CHD組768例，對(duì)照組660例，是CHD遺傳易感性研究中樣本量較大的單一地區(qū)和單一民族研究。本研究通過(guò)漢族人群CHD病例對(duì)照設(shè)計(jì)，首次發(fā)現(xiàn)TBX2基因3′UTR 區(qū)SNPs位點(diǎn)rs59382073與CHD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，其中T等位基因?yàn)轱L(fēng)險(xiǎn)因子，增加了2.24倍的CHD患病風(fēng)險(xiǎn)(OR=2.24, 95% CI：1.56～3.22)。

TBX2基因定位于染色體17q23，包含7個(gè)外顯子[12, 13]，其對(duì)于維持胚胎心臟的正常發(fā)生必不可少。Tbx2缺失的小鼠呈現(xiàn)流出道間隔缺損，且腔室特異基因的表達(dá)擴(kuò)展至房室管區(qū)域[6]；Tbx2缺陷的斑馬魚(yú)則出現(xiàn)多種心臟表型，包括心室發(fā)育不良、心房擴(kuò)張、房室管和瓣膜異常，以及心率緩慢、心律不齊、心臟停搏和血液反流等，提示Tbx2對(duì)腔室的分化和房室管的形成有重要的意義[14]。本研究顯示，rs59382073 主要與圓錐動(dòng)脈干畸形尤其是法洛四聯(lián)癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，這與小鼠胚胎Tbx2缺失引起的流出道畸形相一致[6]。本研究還發(fā)現(xiàn)，GT/TT基因型較GG基因型者的VSD患病風(fēng)險(xiǎn)增加了1.70 倍 。 Pang等[10]在

VSD患兒中發(fā)現(xiàn)了TBX2基因啟動(dòng)子區(qū)DNA突變，提示TBX2非編碼區(qū)遺傳變異對(duì)于VSD的發(fā)生存在一定的作用。

Tbx2 在心臟發(fā)育中的重要作用呈現(xiàn)劑量依賴性[1]。Tbx2不僅可直接結(jié)合Anf、Cx40的啟動(dòng)子區(qū)并調(diào)控其表達(dá)[1, 6]，還可通過(guò)與Nkx2-5、Gata4、Msx1、Msx2結(jié)合并抑制相應(yīng)下游基因的表達(dá)[2, 15]。此外，Tbx2可調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)基因p19(ARF)和p21(CIP1)的表達(dá)水平[16, 17]。同時(shí)，Tbx2受Tbx20、視磺酸及BNP2等因子的調(diào)控[18～21]。本研究為確定rs59382073位點(diǎn)是否具有潛在的功能，檢測(cè)了G和T等位基因?qū)τ诩?xì)胞轉(zhuǎn)染后熒光素酶表達(dá)量的影響。結(jié)果顯示，T等位基因在HEK 293T和H9C2兩種細(xì)胞系中均可顯著下調(diào)熒光素酶的活性, 表明TBX2 3′UTR rs59382073位點(diǎn)對(duì)于基因的表達(dá)量有著顯著的影響。因此，推測(cè)攜帶T等位基因者可能由于TBX2的表達(dá)不足而增加CHD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

本研究的不足之處：需要在不同地區(qū)、不同民族人群中進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行相關(guān)的病例對(duì)照研究；需要在CHD胚胎早期心臟組織中檢測(cè)不同基因型樣本TBX2基因mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平以進(jìn)一步驗(yàn)證研究結(jié)果。

結(jié)論：本研究首次發(fā)現(xiàn)了在漢族人群TBX2 3′UTR位點(diǎn)rs59382073與CHD的發(fā)病關(guān)聯(lián)，為完整闡述TBX2 對(duì)CHD 產(chǎn)生的遺傳效應(yīng)提供理論支持，對(duì)于臨床檢測(cè)亦具有一定的指導(dǎo)意義，在CHD 的基因診斷方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

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(本文編輯：丁俊杰)

A variant in TBX2 3′UTR, rs59382073, is significantly associated with susceptibility of sporadic congenital heart disease in Chinese Han population

WANGFeng1,ZHANGPing1,DUANWen-yuan2,YULi-wei1,ZHAOJian-yuan3,GUIYong-hao1

(1CadiovascularCenter,Children′sHospitalofFudanUniversity,Shanghai201102; 2InstituteofCardiovascularDiseaseGeneralHospitalofJinanMilitaryRegion,Jinan250022; 3SchoolofLifeSciences,FudanUniversity,Shanghai200433,China)

GUI Yong-hao，E-mail:yhgui@shmu.edu.cn

ObjectiveTo investigate the association betweenTBX2 3′UTR variants and the susceptibility of sporadic congenital heart disease (CHD) in Chinese Han population and to reveal the possible mechanism.MethodsPatients with non-syndromic CHD diagnosed in Institute of Cardiovascular Disease, General Hospital of Ji′nan Military Region from August 2010 to April 2012 were included in CHD group, and healthy children receiving physical examination in this hospital during the same period as the control group. Twenty-four CHD cases and the same number of controls were selected to undergoTBX2 3′UTR DNA sequencing. According to our screening results, the identified variants were chosen for genotying by SNaPshot and association analysis in both groups. Then cell transfection and luciferase activity tests were conducted in functional analysis of the positive variant.ResultsA total of 768 cases were enrolled in CHD group, with mean age 6.1±4.8 years and 383 male subjects (49.9%). The control group included 660 subjects, with mean age 6.5±3.2 years and 354 male subjects (53.6%). ①Three known SNPs in 3′UTR were identified by DNA sequencing in our 24 CHDs and 24 controls: rs59382073, rs1058004 and rs729782. There was no novel variant. ②The initial association study in 288 cases and 288 controls indicated that genotypes of rs59382073 distributed significantly differently between groups (P=0.012), whereas no statistic disparity was observed for the rest two SNPs (P>0.05). Therefore, the two negative SNPs were not tested in the following subjects. ③Our all case-control analysis indicated thatTBX2 3′UTR rs59382073 variant was significantly associated with susceptibility of sporadic CHD. CT/TT genotype was significantly assocaited with higher risk of CHD (adjusted OR=2.13, 95%CI:1.51-2.99,P=1.44×10-5), and conotruncal defects (OR=2.75, 95%CI:1.57-4.81，P=3.99×10-4). And in stratified analysis, this association was further confirmed in tetralogy of Fallot (OR=3.18, 95%CI:1.53-6.61，P=1.90×10-3, compared with CC) and in ventricular septal defect(OR=1.70, 95%CI:1.17-2.46，P=5.14×10-3). ④Functional analysis of cells suggested that the luciferase activities of the T allele transfection were downregulated by 29.2% and 33.6% than the G allele in HEK 293T and H9C2 cells, respectively.ConclusionOverall, our data indicated thatTBX2 3′UTR rs59382073 polymorphism could significantly increase the susceptibility of sporadic CHD in Chinese Han population. The difference in luciferase activities between the two alleles demonstrates thatTBX2 3′UTR rs59382073 might be a functional polymorphism.

Congenital heart disease ;TBX2; Single nucleotide polymorphisms; 3′UTR

國(guó)家重大科學(xué)研究計(jì)劃(973計(jì)劃)：2013CB945401;國(guó)家自然科學(xué)基金：81170147,81300126

1 復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院心血管中心 上海，201102; 2 濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心血管病研究所 濟(jì)南,250022；3 復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)院 上海，200433

桂永浩，E-mail:yhgui@shmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1673-5501.2015.03.002

2015-03-03

2015-05-17)