王力弘 王國兵 文飛球 劉四喜 王 纓 李長鋼

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·論著·

兒童急性B前體淋巴細(xì)胞白血病iTR35調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群改變及意義初探

王力弘1,3王國兵2,3文飛球1劉四喜1王 纓1李長鋼1

目的 探討急性B前體淋巴細(xì)胞白血病(BCP-ALL)患兒iTR35調(diào)節(jié)性T細(xì)胞改變及其在BCP-ALL免疫發(fā)病機(jī)制中的作用。方法以2012年7月至2013年12月深圳市兒童醫(yī)院血液腫瘤科診斷并住院治療的BCP-ALL初診患兒為BCP-ALL組，并分為高危、中危和標(biāo)危；同期體檢的健康兒童為對照組。分離外周血CD4+T細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4+FOXP3-IL-10-TGF-β-IL-12p35+IL-27EBI3+(iTR35)、CD4+CD25highFOXP3+(Treg)細(xì)胞比例及IL-12p35、IL-27EBI3、pSTAT1、pSTAT4蛋白表達(dá)水平；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測CD4+T細(xì)胞IL-12Rβ2、gp130 mRNA表達(dá)；ELISA檢測血漿IL-35、IL-10水平。 比較BCP-ALL組和對照組上述指標(biāo)的差異。結(jié)果①BCP-ALL組 48例(男29例)，年齡2.3～11.0歲，平均5.2歲；高危11例，中危21例，標(biāo)危16例。對照組32例(男21例)，年齡2.6～10.8歲，平均5.1歲。兩組年齡和性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ②BCP-ALL組外周血iTR35細(xì)胞比例顯著高于對照組(P<0.001)，其胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)水平亦顯著高于對照組(P<0.001)；③BCP-ALL組Treg細(xì)胞比例及其胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)水平較對照組明顯增高(P<0.001)，血漿IL-35水平及CD4+T細(xì)胞IL-12Rβ2、gp130、pSTAT1、pSTAT4表達(dá)均上調(diào)(P<0.001)，且血漿IL-35水平與iTR35細(xì)胞比例及其IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)呈正相關(guān)(r>0.63，P<0.05)。④BCP-ALL組高、中?；純貉獫{IL-35水平和iTR35細(xì)胞比例顯著高于標(biāo)危患兒(P分別為<0.001和0.002)，高危和中危患兒間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論iTR35細(xì)胞數(shù)量及功能異常可能是導(dǎo)致BCP-ALL患兒免疫功能低下的重要因素之一。

急性B前體淋巴細(xì)胞白血病； iTR35； IL-35； IL-12p35； IL-27EBI3

大量臨床及基礎(chǔ)研究提示，急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)細(xì)胞惡性克隆與機(jī)體抗腫瘤免疫水平低下所導(dǎo)致的免疫逃逸密切相關(guān)，但導(dǎo)致ALL抗腫瘤免疫功能異常的分子機(jī)制仍不清楚[1]。iTR35是一類具有免疫調(diào)節(jié)作用的T細(xì)胞亞群，可抑制腫瘤特異性T細(xì)胞而參與調(diào)節(jié)抗腫瘤應(yīng)答[2,3]。既往研究觀察IL-35在胰腺癌、急性髓細(xì)胞樣白血病和直腸癌患者血漿或腫瘤局部組織中表達(dá)異常，阻斷IL-35可明顯抑制腫瘤抗原特異性CD8+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞[4～7]，提示主要以分泌IL-35而介導(dǎo)免疫抑制作用的iTR35細(xì)胞可能在腫瘤的免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。但目前尚未見有關(guān)于ALL與iTR35細(xì)胞分子機(jī)制的研究報(bào)道。本文觀察急性B前體淋巴細(xì)胞白血病(BCP-ALL)患兒iTR35細(xì)胞亞群改變及其可能的分化調(diào)節(jié)機(jī)制，旨在進(jìn)一步探討B(tài)CP-ALL免疫發(fā)病機(jī)制。

1 方法

1.1 倫理 本研究經(jīng)深圳市兒童醫(yī)院(我院)倫理委員會(huì)審核同意，受試者家屬對研究知情同意，自愿參加。

1.2 BCP-ALL組納入和排除標(biāo)準(zhǔn) ①2012年7月至2013年12月我院血液腫瘤科診斷并住院治療的BCP-ALL初治連續(xù)病例；②根據(jù)細(xì)胞形態(tài)行FAB分型；③ 免疫學(xué)檢查為CyIg陽性，其他B系標(biāo)志如HLA-DR、CD19、CD22、CD10、CD20為陽性，SmIg陰性[8]；④排除合并其他腫瘤、自身免疫性疾病和遺傳性疾病等患兒；⑤排除在外院未明確診斷前已使用藥物治療的患兒。

1.3 對照組納入標(biāo)準(zhǔn) 同期我院體檢的健康兒童，并除外先天性心臟病、遺傳性疾病等，年齡與BCP-ALL組盡量匹配，獲取其常規(guī)生化檢查后的剩余血標(biāo)本。

1.4 BCP-ALL 危險(xiǎn)度分型 根據(jù)初診年齡、外周血WBC計(jì)數(shù)、細(xì)胞遺傳學(xué)改變、潑尼松敏感試驗(yàn)結(jié)果和誘導(dǎo)化療第15、33天的骨髓緩解狀況，將BCP-ALL患兒分為高危(HR)、中危(IR)和標(biāo)危(SR)。

1.5 分離外周血CD4+T細(xì)胞 BCP-ALL組化療前無菌采集EDTA抗凝靜脈血3 mL。聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(P=1.077)密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。按試劑盒(美國Invitrogen公司, 111.45D)說明，采用免疫磁珠分離外周血CD4+T細(xì)胞，錐蟲藍(lán)染色判定細(xì)胞活力>95%，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞純度>97%，備用。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測CD4+T細(xì)胞IL-12Rβ2、gp130 mRNA ①總RNA提取與定量：取已分離外周血CD4+T細(xì)胞，按試劑盒說明書(美國Ambion公司，AM1912)步驟分離總RNA，紫外分光光度計(jì)測定RNA含量； ②逆轉(zhuǎn)錄PCR：按試劑盒(美國Fermentas公司，K1632#)說明，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。取 1 μL cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增35～50個(gè)循環(huán)，參照Genebank中目的基因mRNA序列設(shè)計(jì)相關(guān)引物(表1,均由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成)；③逆轉(zhuǎn)錄PCR產(chǎn)物鑒定：取IL-12Rβ2、gp130及β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物10 μL在2%瓊脂糖凝膠中，90 V電泳30 min，回收純化，并送上海英駿生物技術(shù)有限公司測序。測序結(jié)果與Genebank中目的基因mRNA序列比對，IL-12Rβ2、gp130及β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物與Genebank中目的基因mRNA序列完全一致。④實(shí)時(shí)熒光定量PCR: 采用SYBGreen試劑盒(大連寶生物，DRR820S)，使用羅氏LightCycle 480Ⅱ熒光定量PCR儀檢測，應(yīng)用LCS 1.5軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以目的基因/β-actin的比值表示。具體操作參照試劑說明書。

1.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(FCM) 采用全血直接計(jì)數(shù)法，以CD4-eFluro450設(shè)門，固定、破膜，經(jīng)CD25-PE、FOXP3-APC抗體染色30min，檢測CD4+CD25highFOXP3+(Treg)細(xì)胞比例；經(jīng)pSTAT1-PE、pSTAT4-Alexa Flour647抗體染色后，檢測CD4+T細(xì)胞pSTAT1、pSTAT4蛋白水平。另取1 mL外周血，經(jīng)體外刺激(PMA：20 ng·mL-1, Ionomycin: 1 μg·mL-1)，2 μmol·L-1Monensin作為蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，37℃、5%CO2下孵育6 h，以CD4-eFluro450、IL-10-PE、TGF-β-PerCP-Cy5.5和FOXP3-APC設(shè)門，固定、破膜，經(jīng)IL-12p35-FITC、IL-27EBI3-PE-Cy7抗體染色30 min，檢測CD4+FOXP3-IL-10-TGF-β-IL-12p35+IL-27EBI3+(iTR35)細(xì)胞比例及其胞內(nèi)IL-35p35、IL-35EBI3蛋白表達(dá)水平；以CD4-eFluro450、CD25-PE和FOXP3-APC設(shè)門，經(jīng)IL-12p35-FITC、IL-27EBI3-PE-Cy7抗體染色30 min后，檢測Treg細(xì)胞內(nèi)IL-35p35、IL-35EBI3蛋白表達(dá)水平。流式細(xì)胞儀(美國Becton Dickinson公司，Canto Ⅱ)計(jì)數(shù)，全部數(shù)據(jù)經(jīng)Diva Ver 6.1.3軟件獲取分析，IL-12p35、IL-27EBI3、pSTAT1及pSTAT4蛋白水平以平均熒光強(qiáng)度(MFI)表示。

表1 RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物Tab 1 Primers for RT-PCR and real-time PCR

1. 8 ELISA檢測IL-10、IL-35水平 BCP-ALL組和對照組患兒外周血樣本以肝素抗凝，500g離心10 min，分離上層血漿；采用雙抗體夾心法檢測血漿中IL-10(美國eBioscience公司，BMS215/2)、IL-35(美國MyBioSource公司，MBS720636)的水平，具體操作參照試劑說明書。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 BCP-ALL組 48例，其中男29例，女19例，年齡2.3～11.0歲，平均5.2歲；HR 11例，IR 21例，SR 16例。對照組32例，其中男21例，女11例，年齡2.6～10.8，平均5.1歲。兩組年齡和性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 iTR35細(xì)胞亞群檢測結(jié)果 表2和圖1顯示，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測iTR35細(xì)胞改變，BCP-ALL組外周血iTR35細(xì)胞比例顯著高于對照組(P<0.05)，其胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)水平均顯著高于對照組(P<0.05)。

Control(n=32)BCP-ALL(n=48)tiTR35/%0.06±0.010.89±0.3217.96 IL-12p35383±931227±29218.67 IL-27EBI3405±1131014±32711.86Treg/%4.0±2.19.7±3.58.95 IL-12p35108±31196±489.83 IL-27EBI330±8114±3018.72 pSTAT1/CD4+18.7±7.739.6±11.59.77 pSTAT4/CD4+23.1±9.251.9±15.710.36

Notes AllP<0.001

圖1 BCP-ALL組和對照組iTR35細(xì)胞亞群流式檢測結(jié)果 Fig 1The proportions of iTR35 and expressions of associated molecules detected by flow cytometry in BCP-ALL and control groups

Notes A:dot plots representing the proportions of iTR35 in patients with BCP-ALL and healthy controls; B: histogram representing expressions of IL-12p35 and IL-27EBI3 in iTR35 from patients with BCP-ALL and healthy controls; C: dot plots representing the proportions of Treg in patients with BCP-ALL and healthy controls; D: histogram representing expressions of IL-12p35 and IL-27EBI3 in Treg from patients with BCP-ALL and healthy controls; E:histogram representing expressions of pSTAT1 and pSTAT4 in CD4+T cells from patients with BCP-ALL and healthy controls

2.3 iTR35細(xì)胞分化調(diào)節(jié)信號相關(guān)分子檢測結(jié)果 表2顯示，BCP-ALL組Treg比例顯著高于對照組，其胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)水平顯著上調(diào)(P<0.05)。BCP-ALL組IL-10和IL-35水平均顯著高于對照組，IL-10：(78±21)vs(25±8)pg·mL-1；IL-35:(118±26)vs(62±18)pg·mL-1；P均<0.05。流式細(xì)胞術(shù)(表2)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示(圖2)，BCP-ALL組CD4+T細(xì)胞IL-12Rβ2、gp130 、pSTAT1、pSTAT4表達(dá)均顯著上調(diào)[IL-12Rβ2：(0.076 2±0.022 8)vs(0.032 6±0.010 2)；gp130：(0.158±0.052)vs(0.065±0.019)；P<0.05]，且血漿IL-35水平與iTR35細(xì)胞比例及其IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)均呈正相關(guān)(r分別為0.63、0.77和0.72,P<0.05)。

圖2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

Fig 2 Agarose electrophoresis of RT-PCR products

2.4 iTR35細(xì)胞及其相關(guān)因子與BCP-ALL危險(xiǎn)度的關(guān)系 BCP-ALL組HR、IR和SR患兒iTR35細(xì)胞比例(%)分別為(0.51±0.21)、(0.98±0.31)和(1.27±0.51)；血漿IL-35水平分別為(82±29)、(128±38)和(153±48)pg·mL-1。HR、IR患兒iTR35細(xì)胞比例和血漿IL-35水平均顯著高于SR患兒(P分別為0.002和<0.001)，HR和IR患兒間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

ALL是兒童最常見的惡性腫瘤，以原始和幼稚淋巴細(xì)胞惡性克隆為主，細(xì)胞大量增殖、廣泛浸潤，抑制正常造血，其病因及腫瘤免疫發(fā)病機(jī)制仍未完全清楚[1]。大量的研究表明腫瘤得以發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵在于機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)水平低下，使腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視和清除機(jī)制[1, 9, 10]。iTR35是新近發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群，可通過分泌IL-35誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖、抑制效應(yīng)性T細(xì)胞活化，并將其轉(zhuǎn)化為iTR35等多種機(jī)制發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)，在腫瘤的免疫發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用[2～4, 11, 12]。既往的研究已證實(shí)多種實(shí)體瘤及血液惡性腫瘤IL-35表達(dá)異常，提示iTR35細(xì)胞可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在密切的關(guān)系[4～7]。本研究觀察到BCP-ALL患兒外周血iTR35細(xì)胞比例明顯高于對照組，其胞內(nèi)抑制性細(xì)胞因子IL-35表達(dá)亦顯著上調(diào)，提示iTR35細(xì)胞亞群過度活化及功能異?？赡苁菍?dǎo)致BCP-ALL腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的重要因素之一。

誘導(dǎo)iTR35細(xì)胞的分子機(jī)制仍未完全闡明。與Treg不同的是，iTR35并不表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，其分化及功能主要依賴于IL-35[2]。人IL-35由IL-12p35和IL-27EBI3兩個(gè)亞基組成，主要來源于iTR35和Treg細(xì)胞[2, 3]。Treg細(xì)胞分泌的IL-35可與細(xì)胞表面IL-35R相結(jié)合，通過其IL-12Rβ2、gp130兩亞基的胞內(nèi)段促使STAT1、STAT4發(fā)生磷酸化，后者相互結(jié)合形成STAT1/STAT4異二聚體，啟動(dòng)IL-35基因表達(dá)及分泌，并在IL-10信號的協(xié)助下誘導(dǎo)初始T細(xì)胞分化為iTR35或?qū)⑿?yīng)性T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為iTR35細(xì)胞。過表達(dá)的IL-35可誘導(dǎo)Treg細(xì)胞增殖及iTR35細(xì)胞的反復(fù)產(chǎn)生，從而形成正反饋循環(huán)效應(yīng)介導(dǎo)免疫抑制功能[13, 14]。本文BCP-ALL組CD4+CD25highFOXP3+比例明顯增加，其胞內(nèi)IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)水平顯著上調(diào)，提示Treg細(xì)胞數(shù)量增多及IL-35過表達(dá)可能是觸發(fā)BCP-ALL患兒iTR35細(xì)胞異?；罨氖紕?dòng)因素之一?；罨腂細(xì)胞亦可產(chǎn)生和釋放少量IL-35[15]，從而參與iTR35細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。本文進(jìn)一步分析IL-35信號相關(guān)分子的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BCP-ALL組血漿IL-35、IL-10水平及CD4+T細(xì)胞IL-12Rβ2、gp130、pSTAT1、pSTAT4表達(dá)均顯著上調(diào)，且IL-35水平與iTR35細(xì)胞比例及其IL-12p35、IL-27EBI3表達(dá)呈正相關(guān)，提示IL-35信號過度活化可能是導(dǎo)致BCP-ALL患兒iTR35細(xì)胞數(shù)量及功能異常的關(guān)鍵因素。

鑒于IL-35介導(dǎo)的免疫抑制功能及其與腫瘤免疫發(fā)病機(jī)制中的作用，有研究已證實(shí)腫瘤細(xì)胞可通過高表達(dá)IL-35而抑制抗腫瘤免疫反應(yīng), 從而促腫瘤生長及新生血管的形成[16]。亦有多項(xiàng)臨床及實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)外周血IL-35水平與腫瘤惡化程度、臨床分期及預(yù)后存在緊密的關(guān)聯(lián)性[5, 7]。因此，本文分析iTR35細(xì)胞及其相關(guān)因子與BCP-ALL危險(xiǎn)度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)HR和IR患兒iTR35細(xì)胞比例均明顯高于SR患兒，但HR和IR間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示iTR35細(xì)胞改變及其相關(guān)因子表達(dá)與BCP-ALL的惡性程度可能存在一定的關(guān)聯(lián)性。

本文的不足之處和局限性：未能收集BCP-ALL患兒治療后的長期隨訪資料及樣本，因此對于iTR35細(xì)胞變化與BCP-ALL治療的反應(yīng)性及預(yù)后的關(guān)系尚缺乏有力的數(shù)據(jù)支持。

結(jié)論，BCP-ALL患兒iTR35細(xì)胞數(shù)量及功能異常可能與Treg細(xì)胞過度活化有關(guān)，且與BCP-ALL惡性程度可能存在一定的關(guān)聯(lián)性，其中IL-35信號在iTR35細(xì)胞誘導(dǎo)分化及其免疫抑制功能介導(dǎo)機(jī)制中具有關(guān)鍵作用。

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(本文編輯：丁俊杰)

2015中國醫(yī)師協(xié)會(huì)兒科醫(yī)師分會(huì)風(fēng)濕免疫年會(huì)通知

由中國醫(yī)師協(xié)會(huì)主辦，中國醫(yī)師協(xié)會(huì)兒科醫(yī)師分會(huì)和復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院承辦的2015中國醫(yī)師協(xié)會(huì)兒科醫(yī)師分會(huì)風(fēng)濕免疫年會(huì)，將于2015年10月30日至11月1日在上海召開，同期舉辦由首都兒科研究所和復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院承辦的2015全國兒童風(fēng)濕免疫病新概念研修班(國2015-06-01-217)。會(huì)議面向基層醫(yī)師，將邀請國內(nèi)知名兒科風(fēng)濕免疫學(xué)專家就兒童關(guān)節(jié)炎、狼瘡、預(yù)防接種不良反應(yīng)、兒童過敏癥、免疫缺陷和兒童反復(fù)感染等內(nèi)容，進(jìn)行大會(huì)報(bào)告、專題會(huì)議和專題研討。參加人員將授予國家級繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育項(xiàng)目學(xué)分。歡迎從事兒童風(fēng)濕、免疫相關(guān)領(lǐng)域兒科醫(yī)生包括計(jì)劃免疫工作人員踴躍參加。

有意參與本次會(huì)議的醫(yī)生請與復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院臨床免疫科(上海市閔行區(qū)萬源路399號)孫金嶠醫(yī)生聯(lián)系，E-mail: jinqiaosun@sina.com。

北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科招收神經(jīng)電生理專業(yè)進(jìn)修人員

有意進(jìn)修者可在北京大學(xué)第一醫(yī)院網(wǎng)站(www.bddyyy.com.cn)下載進(jìn)修表，填寫完畢后寄至北京市西城區(qū)西安門大街1號，北京大學(xué)第一醫(yī)院兒科腦電圖室，盧嬌陽收；郵政編碼100034；聯(lián)系電話：010-83573082，010-83573037。本通知長期有效。

Changes and significances of inducible IL-35 producing regulatory T cells in childhood B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia

WANGLi-hong1,3,WANGGuo-bing2,3,WENFei-qiu1,LIUSi-xi1,WANGYing1,LIChang-gang1

(1DepartmentofHematology, 2InstituteofPediatrics,ShenzhenChildren′sHospital,ZunyiMedicalCollege,Shenzhen518038,China; 3hasequalcontribution)

WEN Fei-qiu，E-mail:fwen62@126.com

ObjectiveTo investigate the changes and significances of inducible IL-35 producing regulatory T cells(iTR35) in childhood B-cell precursor acute lymphocytic leukemia (BCP-ALL).MethodsChildren with BCP-ALL were enrolled at the Department of Hematology Oncology, Shenzhen Children′s Hospital from July 2012 to December 2013, and sub-grouped as standard risk, intermediate risk or high risk. Age-matched healthy children who attending routine physical examination were recruited as controls during the same study period. CD4+T cells were isolated from peripheral blood mononuclear cells by microbeads. Flow cytometry was performed to evaluate the proportions of CD4+FOXP3-IL-10-TGF-β-IL-12p35+IL-27EBI3+iTR35 and CD4+CD25highFOXP3+Treg, and expression levels of associated molecules such as IL-12p35, IL-27EBI3, pSTAT1 and pSTAT4. Transcription levels of IL-12Rβ2 and gp130 in CD4+T cells were determined by quantitative real-time PCR. Plasma concentrations of IL-35 and IL-10 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay.Results①Forty-eight children with BCP-ALL, including 11 children with HR, 21 children with IR and 16 children with SR, aged from 2.3 to 11 years with a mean of 5.2 years were recruited. The BCP-ALL group consisted of 29 males and 19 females, and 32 age-matched healthy children with 21 males were used as controls. No difference of age or sex was found between the two groups (P>0.05). ②The proportions of iTR35 in BCP-ALL group were much higher in the case group than those of control group(P<0.05), and the expressions of IL-12p35 and IL-27EBI3 increased remarkably (P<0.05). ③The proportions of Treg and the expression levels of IL-12p35 and IL-27EBI3 were elevated in BCP-ALL group(P<0.05). Meanwhile, plasma concentrations of IL-35 and IL-10 increased significantly in BCP-ALL group(P<0.05), Plasma concentrations of IL-35 positively correlated with the proportion of iTR35 and the expression levels of IL-12p35 and IL-27EBI3, respectively. Additionally, expression levels of IL-35-signaling downstream molecules (IL-12Rβ2, gp130, pSTAT1 and pSTAT4) in CD4+T cells were significantly up-regulated in BCP-ALL group(P<0.05). ④Plasma IL-35 concentrations and the proportions of iTR35 in BCP-ALL children with high risk or intermediate risk groups were found to be higher than those in BCP-ALL children of standard risk group (Pvalue was <0.001 and 0.002, respectively). No statistic significant differences were found in the two former group, although plasma IL-35 concentrations and the proportions of iTR35 in BCP-ALL children of high-risk group were higher than those in BCP-ALL children with intermediate risk group (P>0.05).ConclusionExcessive activation and dysfunction of iTR35 maybe one of the important factors contributing to immunological dysfunction in children with BCP-ALL.

B-cell precursor acute lymphoblastic leukemia ; Inducible IL-35 producing regulatory T cells; IL-35; IL-12p35; IL-27EBI3

深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)技術(shù)創(chuàng)新計(jì)劃技術(shù)開發(fā)項(xiàng)目:CXZZ20130320172336579;深圳市科技研發(fā)資金知識創(chuàng)新計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目:JCYJ20140416141331552)

1 遵義醫(yī)學(xué)院附屬深圳市兒童醫(yī)院血液腫瘤科 深圳，518038; 2 遵義醫(yī)學(xué)院附屬深圳市兒童醫(yī)院兒科研究所 深圳,518038; 3 共同第一作者

文飛球，E-mail:fwen62@126.com

10.3969/j.issn.1673-5501.2015.03.014

2014-12-22

2015-05-26)