復發(fā)性流產(chǎn)患者蛻膜和絨毛組織中TNF-α、水通道蛋白1的表達變化及意義

郭君麗，郭君紅

(寶雞市婦幼保健院,陜西寶雞721000)

摘要：目的觀察復發(fā)性流產(chǎn)(RSA)患者蛻膜和絨毛組織中TNF-α、水通道蛋白(AQP)1的表達變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法對60例RSA患者(RSA組)和20例正常早孕人工流產(chǎn)者(對照組)蛻膜及絨毛組織中的TNF-α、AQP1進行檢測。結(jié)果RSA組、對照組蛻膜組織TNF-α陽性表達率分別為80%(48/60)、60.0%(12/20)，AQP1陽性表達率分別為42%(25/60)、55%(11/20)，兩組兩指標相比，P均>0.05。RSA組、對照組絨毛組織中TNF-α陽性表達率分別為75%(45/60)、15%(3/20),AQP1陽性表達率分別為20%(12/60)、25%(15/20)，兩組兩指標相比，P均<0.05。RSA組絨毛組織中TNF-α與AQP1的表達呈負相關(r=-0.385、P<0.05)。結(jié)論 RSA患者絨毛組織中TNF-α表達增加、AQP1表達減少，而且兩者的表達水平呈負相關關系；TNF-α、AQP1可能共同參與了RSA的發(fā)病過程。

關鍵詞：妊娠；病理性妊娠；流產(chǎn)；自然流產(chǎn)；復發(fā)性流產(chǎn)；腫瘤壞死因子α；水通道蛋白

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.017

中圖分類號：R714.21文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-06-29)

復發(fā)性流產(chǎn)(RSA)是指患者與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn)，發(fā)生率為1%～2%。RSA病因復雜，已知病因有染色體異常、生殖道感染、內(nèi)生殖器官解剖畸形、內(nèi)分泌失調(diào)、免疫因素、理化環(huán)境因素等，仍有約50%的患者病因不明。隨著生殖免疫學的飛速發(fā)展，已逐漸發(fā)現(xiàn)不明原因的自然流產(chǎn)80%與免疫因素相關[1]，特別是Th1/Th2型細胞因子表達失衡學說的出現(xiàn)，為RSA的免疫學發(fā)病機制研究提供了理論依據(jù)。本研究對RSA患者蛻膜和絨毛組織中TNF-α、水通道蛋白(AQP)1的表達變化進行了觀察，探討其在RSA發(fā)病中的作用。

1資料與方法

1.1臨床資料2012年7月～2014年12月寶雞市婦幼保健院收治的出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀、臨床確診已經(jīng)發(fā)生難免流產(chǎn)或胚胎停育的RSA患者60例(RSA組)，年齡22～40歲，孕周6～10周；其中流產(chǎn)2次者36例、≥3次者24例；本組夫婦染色體核型、生殖道、內(nèi)分泌、TORCH[T為弓形蟲，O為其他(主要指梅毒螺旋體)，R為風疹病毒，C為巨細胞病毒，H為生殖道皰疹病毒]、內(nèi)生殖器結(jié)構(gòu)及抗核抗體檢查均無異常。選擇同期就診要求終止妊娠的正常早孕婦女20例作為對照組，年齡28～42歲，孕周6～10周；本組既往無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，無染色體、生殖器解剖、內(nèi)分泌等方面的異常，無自身免疫性疾病史，本次妊娠期間無服藥史、病毒感染史及有害有毒物質(zhì)接觸史，無先兆流產(chǎn)癥狀；B超檢查提示宮內(nèi)妊娠，胚胎原始心管搏動。兩組均排除全身疾病或感染性疾病，兩組年齡及孕周有可比性(P均>0.05)。兩組均接受常規(guī)人工流產(chǎn)手術(shù)。

1.2蛻膜及絨毛組織中TNF-α、AQP1檢測方法兩組于人工流產(chǎn)手術(shù)中收集無菌新鮮蛻膜和絨毛組織，立即置10%的中性甲醛溶液中固定，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片(厚4 μm)。切片HE染色，分別觀察蛻膜和絨毛組織形態(tài)。采用免疫組化SP法檢測蛻膜和絨毛組織中的TNF-α、AQP1，用PBS代替一抗作陰性對照，按試劑盒說明書操作。每例的組織切片隨機選取10個高倍視野進行結(jié)果判定。按染色強度及陽性細胞所占百分比計分：細胞無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分;陽性細胞百分比<5%為0分、5%～25%為1分、26%～50%為2分、>50%為3分；上述兩分值相乘，乘積等于0判為陰性、1～3為弱陽性(+)、4～5為中度陽性(++)、≥6為強陽性(+++)，+、++、+++均為陽性。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較用χ2檢驗，相關性分析用Spearman相關分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1兩組蛻膜組織中TNF-α、AQP1的表達比較兩組蛻膜組織中均有TNF-α和AQP1表達，TNF-α主要表達于蛻膜間質(zhì)細胞胞質(zhì)，AQP1主要表達于蛻膜腺體細胞胞膜。RSA組、對照組蛻膜組織TNF-α陽性表達率分別為80%(48/60)、60.0%(12/20)，AQP1陽性表達率分別為42%(25/60)、55%(11/20)，兩組兩指標相比，P均>0.05。

2.2兩組絨毛組織中TNF-α、AQP1的表達比較兩組絨毛組織中均有TNF-α和AQP1的表達，均表達于細胞滋養(yǎng)細胞和合體滋養(yǎng)細胞胞質(zhì)。RSA組、對照組絨毛組織中TNF-α陽性表達率分別為75%(45/60)、15%(3/20)，AQP1陽性表達率分別為20%(12/60)、25%(15/20)，兩組兩指標相比，P均<0.05。

2.3RSA組患者絨毛組織中TNF-α和AQP1表達的相關性 60例RSA患者絨毛組織中TNF-α和AQP1均呈陽性表達者5例、均呈陰性表達者8例，二者的表達呈負相關(r=-0.385，P<0.05)。

2.4RSA組絨毛組織中TNF-α和AQP1表達與復發(fā)性流產(chǎn)次數(shù)的關系RSA組流產(chǎn)2次者36例，其絨毛組織中TNF-α陽性25例、陰性11例，AQP-1陽性6例、陰性30例；流產(chǎn)≥3次者24例，其絨毛組織中TNF-α陽性20例、陰性4例，AQP-1陽性9例、陰性15例；不同流產(chǎn)次數(shù)者絨毛組織中TNF-α和AQP1的陽性表達相比，P均>0.05。

3討論

生殖免疫學認為胚胎對母體來說是一種同種異體移植物，被母體免疫系統(tǒng)識別并產(chǎn)生免疫應答。蛻膜和絨毛膜是孕早期母體與胚胎直接接觸的部分，母胎界面細胞因子對胚胎的免疫耐受起著重要的調(diào)節(jié)作用[2]，這些細胞因子主要由滋養(yǎng)細胞產(chǎn)生，具體表現(xiàn)為早期妊娠排斥與耐受的平衡，特別是輔助T細胞(Th)在妊娠免疫中發(fā)揮重要作用。根據(jù)分泌的細胞因子類型不同Th分為Th1和Th2兩個亞群；Th1主要介導細胞免疫應答，產(chǎn)生胚胎排斥作用；Th2主要介導體液免疫反應，形成免疫耐受保護，使胚胎不受母體免疫系統(tǒng)的排斥[3]。兩種免疫應答均受錯綜復雜的Th1/Th2細胞因子網(wǎng)絡調(diào)控。正常妊娠時Th1/Th2細胞因子平衡以向Th2為主的模式偏移，一旦平衡向Th1細胞因子偏移，即Th1型細胞因子水平升高，將發(fā)揮免疫殺傷作用，可能導致RSA的發(fā)生[4]。

TNF-α主要由免疫系統(tǒng)中的抗原呈遞細胞如單核-巨噬細胞、Th1細胞等產(chǎn)生，是Th1型細胞因子。生理情況下，適量的TNF-α可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的正常增殖、分化和凋亡，促進能量代謝及胚胎發(fā)育[5]，提高孕激素及絨毛膜促性腺激素的合成，刺激細胞滋養(yǎng)層生成尿激酶型血漿素原激活劑,有利于蛻膜細胞外基質(zhì)降解及胎盤植入，對正常妊娠的維持有重要作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，RSA患者絨毛組織TNF-α表達水平明顯高于對照組，與孫巖等[7]的研究結(jié)果相似。這一結(jié)果提示RSA患者母胎界面高表達TNF-α，可促進滋養(yǎng)細胞凋亡，阻礙絨毛生長，導致蛻膜壞死，阻止孕卵正常發(fā)育。陳廣莉等[8]研究發(fā)現(xiàn)，RSA患者血清中TNF-α水平較正常妊娠者高，也證實TNF-α在RSA中發(fā)揮了作用。高濃度的TNF-α可能通過多種途徑導致流產(chǎn)：TNF-α與滋養(yǎng)細胞中的相應受體結(jié)合，激活Th1型免疫反應，釋放出大量有害細胞因子，干擾內(nèi)分泌網(wǎng)絡，導致子宮內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)破壞，使胚胎發(fā)育受阻，胎兒死亡；另一方面，可能是TNF-α本身對血管內(nèi)皮細胞有直接毒性作用，限制滋養(yǎng)細胞的生長發(fā)育，影響胚胎的營養(yǎng)供給及吸收，導致胚胎死亡。

AQP是一組新的疏水性跨膜蛋白，具有調(diào)節(jié)細胞內(nèi)外滲透壓平衡及血管形成等重要作用，廣泛存在于哺乳動物生殖系統(tǒng)，迄今已發(fā)現(xiàn)13種，AQP1為其中一種。Mann等[9]研究發(fā)現(xiàn)，AQP1在人胎膜中有表達，并定位于羊膜上皮細胞和絨毛膜的滋養(yǎng)細胞，孕早期AQP1主要表達于絨毛膜組織中[10]。AQP1通過增強血管的滲透性和組織間隙的壓力，促進內(nèi)膜細胞外移、遷徙，并可抑制細胞凋亡及促進新生血管生成。本研究發(fā)現(xiàn)，RSA患者絨毛膜組織中AQP1表達明顯低于正常妊娠者。IL-10是Th2細胞因子，誘導母胎免疫耐受，對正常妊娠起保護作用[11]。王忠慧等[12]認為肺損傷時，IL-10與AQP1之間可通過炎癥介質(zhì)的級聯(lián)激活，相互間呈不同程度正反饋調(diào)控。因此，AQP1可能通過間接方式作用于Th2細胞因子平衡系統(tǒng)，進而維持正常妊娠。

本研究還發(fā)現(xiàn)，RSA組患者絨毛組織中TNF-α和AQP1的表達呈負相關，可能與絨毛組織缺血缺氧時TNF-α等促炎因子大量釋放，下調(diào)AQP1基因表達有關。包呈梅等[13]研究擬膽堿藥卡巴膽堿對口服補液燙傷大鼠小腸組織中TNF-α及AQP1表達關系時發(fā)現(xiàn)，腸內(nèi)葡萄糖-電解質(zhì)液+腸內(nèi)卡巴膽堿組、腸內(nèi)卡巴膽堿組及單純燙傷組AQP1表達量與TNF-α表達量呈負相關。但TNF-α和AQP1相互作用的具體機制尚不清楚，有待進一步研究。

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