孫得發(fā)，楊志斌，屈長波，張莉莉，王 恬*

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，江蘇 南京 210095）

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食品防霉劑脫氫醋酸鈉的肉雞耐受性研究

孫得發(fā)，楊志斌，屈長波，張莉莉，王 恬*

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，江蘇 南京 210095）

摘 要：目的：對食品防霉劑脫氫醋酸鈉進(jìn)行動物耐受性研究，為其在食品及飼料中的應(yīng)用確定最高添加劑量及安全性評價提供參考。方法：選取1 日齡健康愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞240 只，隨機(jī)分為4 組，每組6 個重復(fù)，每個重復(fù)10 只，分別飼喂添加脫氫醋酸鈉0（CON組）、200 mg/kg（TES1組）、1 000 mg/kg（TES2組）、2 000 mg/kg（TES3組）的基礎(chǔ)日糧。測定肉雞的生長性能和血清生化指標(biāo)。結(jié)果：1）肉雞生長前期，TES3組的日采食量、日體質(zhì)量增量、平均體質(zhì)量顯著或極顯著低于其他各組（P＜0.05或P＜0.01），飼料效率顯著或極顯著降低（P＜0.05或P＜0.01），TES2組的日體質(zhì)量增量、平均體質(zhì)量均顯著低于CON組和TES1組（P＜0.05）；肉雞生長后期，TES3組的日采食量、日體質(zhì)量增量均顯著低于其他各組（P＜0.05）。2）肉雞生長后期，TES2組和TES3組血液中白細(xì)胞含量顯著高于CON組及TES1組（P＜0.05）；3）與對照組相比，肉雞生長后期TES2組血清中白蛋白含量顯著降低（P＜0.05）；與TES1組相比，TES3組血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶含量顯著降低（P＜0.05），肌酐濃度顯著提高（P＜0.05）。結(jié)論：日糧中添加2 000 mg/kg脫氫醋酸鈉可顯著降低肉雞生長性能，導(dǎo)致肉雞腎臟功能障礙。在食品中添加應(yīng)用高劑量脫氫醋酸鈉會對機(jī)體代謝產(chǎn)生不良影響，應(yīng)用時應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定控制劑量。

關(guān)鍵詞：脫氫醋酸鈉；愛拔益加肉雞；生長性能；血清生化指標(biāo)

脫氫醋酸鈉（sodium dehydroacetate）是一種新開發(fā)的廣譜類、抑菌力較強(qiáng)的食品防腐劑，對霉菌、酵母菌、細(xì)菌的抑制能力特別強(qiáng)，廣泛地應(yīng)用于各類食品加工行業(yè)中[1]，其有效抑制劑量為0.05%～0.1%，一般用量為0.03%～0.05%，但高劑量的脫氫醋酸鈉對人體健康有一定危害性，相關(guān)毒性研究發(fā)現(xiàn)：大鼠口服脫氫醋酸鈉的LD50為1 000 mg/kg（以體質(zhì)量計(jì)，下同），小鼠為1 330 mg/kg，人體長期服用過量脫氫醋酸鈉會引起腎結(jié)石[2]，在食品添加中需限量使用，因此我國將脫氫醋酸鈉列入了限量使用食品添加劑[3]，并規(guī)定其在醬菜、腐乳中的添加量不得超過0.3 g/kg[4]，國外有規(guī)定在面包、乳酪中最高添加量為0.05%[5]。由于肉雞對于外界的不良因素反應(yīng)更加敏感，本實(shí)驗(yàn)選用愛拔益加（Arbor Acres，AA）肉雞為研究對象，通過對AA肉雞生長性能、器官發(fā)育、血常規(guī)和血液生化指標(biāo)的分析，研究AA肉雞對飼料中添加不同劑量脫氫醋酸鈉的耐受程度，為其在食品添加劑中的應(yīng)用確定最高耐受劑量，以及食品添加劑損傷的預(yù)防和修復(fù)提供一定理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

AA白羽肉雞，購自南京華牧公司。

脫氫醋酸鈉（C8H7NaO4）由江蘇天成動物保健品公司提供，生產(chǎn)批號2012818，有效成分≥98%，為無臭白色粉末，通過逐級混勻的方式添加到日糧中?；A(chǔ)日糧參照National Research Council（NRC）1994標(biāo)準(zhǔn)[6]配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 Basal diet composition and nutrient levels

1.2方法

1.2.1 動物分組及管理

采用單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將240 只健康的1 日齡AA肉仔雞隨機(jī)分為4 個處理組，分別在基礎(chǔ)日糧中添加脫氫醋酸鈉0（CON組）、200 mg/kg（TES1組）、1 000 mg/kg（TES2組）和2 000 mg/kg（TES3組），每個處理設(shè)6 個重復(fù)，每個重復(fù)10 只雞?；A(chǔ)日糧采用玉米-豆粕型，飼養(yǎng)期為42 d，飼養(yǎng)前徹底清掃、沖洗雞舍地面及育雛設(shè)備，然后用甲醛熏蒸消毒。肉雞采用籠養(yǎng)，自由采食和飲水，喂料遵循少喂勤添的原則。每天清掃雞舍，定期清洗飲水管道，并及時通風(fēng)換氣，保證雞舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生良好。于10 d時進(jìn)行雞新城疫（La Sota株）、雞傳染性支氣管炎（H120株）和傳染性法氏囊病三聯(lián)多價滅活疫苗及禽流感疫苗免疫，免疫方式采用頸背側(cè)皮下注射方式。

1.2.2 樣品采集

于肉雞生長至21 日齡（前期）06：00（此前禁食12 h，自由飲水）每個重復(fù)隨機(jī)抽取1 只雞，稱質(zhì)量后頸靜脈采血，4 ℃條件下放置待血清完全析出后，3 500 r/min離心10 min制備血清，與未經(jīng)離心的血液適當(dāng)保存，待測。于肉雞生長至42 日齡（后期）時采血，步驟同前，并在雞放血致死后迅速剖開其腹腔，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱質(zhì)量，并按照下式計(jì)算器官指數(shù)。

每天記錄各個重復(fù)消耗的飼料質(zhì)量，并于肉雞生長至21 日齡和42 日齡時，分別對各重復(fù)的肉雞進(jìn)行空腹稱質(zhì)量。分別計(jì)算實(shí)驗(yàn)前期、后期和實(shí)驗(yàn)全期各重復(fù)的日體質(zhì)量增量、日采食量和飼料效率。記錄飼養(yǎng)期間肉雞的腹瀉只數(shù)、死亡和淘汰只數(shù)，計(jì)算腹瀉率和死淘率。

1.2.3 檢測指標(biāo)

檢測血液常規(guī)指標(biāo)主要包括白細(xì)胞（white blood cell，WBC）、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板（blood platelet，PLT）含量等；檢測生化指標(biāo)主要包括谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate transaminase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活力，總蛋白（total protein，TPRO）、白蛋白（albumin，ALB）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、肌酐（creatinine，CRE）、血糖（blood glucose，GLU）、球蛋白（globulin，GLO）含量等指標(biāo)。

1.3數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果用Excel 2007進(jìn)行初步處理，采用SPSS 16.0中ANOVA進(jìn)行分析，用LSD法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以±s表示。

2　結(jié)果與分析

2.1脫氫醋酸鈉對AA肉雞生長性能的影響

表2　脫氫醋酸鈉對AA肉雞生長性能的影響Table 2 Effect of sodium dehydroacetate on growth performance of AA broilers

如表2所示，肉雞生長前期，TES3組的日采食量顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），TES3組的日體質(zhì)量增量極顯著低于CON、TES1組（P＜0.01），顯著低于TES2組（P＜0.05），平均體質(zhì)量極顯著低于CON、TES1組（P＜0.01），顯著低于TES2組（P＜0.05），其中TES2組的日體質(zhì)量增量、平均體質(zhì)量均顯著低于CON、TES1組（P＜0.05），TES3組的飼料效率極顯著高于CON、TES1組（P＜0.01），顯著高于TES2組（P＜0.05）；在肉雞生長后期，TES3組的日采食量、日體質(zhì)量增量、平均體質(zhì)量均顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），但各組間的飼料效率并沒有顯著差異（P＞0.05）；從全期來看，TES3組的日采食量、日體質(zhì)量增量均顯著低于CON、TES1、TES2組（P＜0.05），飼料效率顯著高于CON、TES1組（P＜0.05）。

表3　脫氫醋酸鈉對AA肉雞死淘率和腹瀉率的影響Table 3 Effect of sodium dehydroacetate on mortality and diarrhea rate of AA broilers

如表3所示，研究脫氫醋酸鈉對AA肉雞死淘率及腹瀉率的影響，結(jié)果表明各組間差異均不顯著（P＞0.05），但死淘率隨著添加脫氫醋酸鈉添加劑量的增加有升高的趨勢。

2.2脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官發(fā)育的影響

表4　脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官指數(shù)的影響Table 4 Effect of sodium dehydroacetate on organ indexes of AA broilers

由表4可知，不同劑量的脫氫醋酸鈉對AA肉雞器官指數(shù)的影響并不顯著（P＞0.05），但TES1、TES2、TES3組的脾臟指數(shù)較CON組分別降低了11%、11%和6% （P＞0.05），胸腺指數(shù)較CON組分別降低了16%、20%、36%（P＞0.05），法氏囊指數(shù)則分別比CON組降低了18%、9%、18%（P＞0.05）。

2.3脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液常規(guī)指標(biāo)的影響

表5　脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液常規(guī)指標(biāo)的影響Table 5 Effect of sodium dehydroacetate on routine blood test of AA broilers

由表5可知，肉雞生長前期TES3、TES2、TES1組的WBC含量分別比CON組降低了18.7%、15.6%和4.2%，但并無顯著差異（P＞0.05），TES3、TES2、TES1組HGB含量較CON組分別降低了6.4%、6.4%、8.3%，其中TES1組達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。肉雞生長后期，TES2、TES3組的WBC含量較CON、TES1組升高了14.5%和4.96%（P＜0.05）。

2.4脫氫醋酸鈉對AA肉雞血液生化指標(biāo)的影響

由表6可知，肉雞生長前期，TES1、TES2和TES3組球蛋白含量分別比CON組低2.2%、1.4%和4.9%，提示脫氫醋酸鈉的添加可能會導(dǎo)致球蛋白含量的減少。與TES1組相比，1 000、2 000 mg/kg劑量能夠顯著降低肉雞生長后期血清中AST活力（P＜0.05）。肉雞生長后期，TES3、TES2、TES1組血清CRE含量分別較CON組升高了133.4%、59.5%和16.6%，其中TES3組達(dá)到顯著水平（P＜0.05）。

表6　脫氫醋酸鈉對肉雞血清生化指標(biāo)的影響TTaabbllee 66 EEfffect of sodium dehydroacetate on serum biochemical indicators of broilers

3　討 論

脫氫醋酸鈉在抑制霉菌生長的同時，同時也會在生物體組織中殘留[7]，當(dāng)達(dá)到一定量時會導(dǎo)致肝、腎和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，表現(xiàn)為肝、腎功能減弱，出現(xiàn)驚厥、顫抖、共濟(jì)失調(diào)等神經(jīng)癥狀，還可能會引起體質(zhì)量減少和慢性肺水腫，對人體健康造成損害[8-9]。在動物的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，給猴子每周5 次飼喂200 mg/kg脫氫醋酸鈉會導(dǎo)致生長紊亂及器官病理變化[10]。本實(shí)驗(yàn)以AA肉雞為動物模型，結(jié)果顯示1 000、2 000 mg/kg的添加量均顯著降低21 日齡肉雞的生長性能；當(dāng)日糧中脫氫醋酸鈉的劑量為2 000 mg/kg時，42 日齡AA肉雞的日采食量、日體質(zhì)量增量和平均體質(zhì)量均顯著降低（P＜0.05），原因可能是過高劑量脫氫醋酸鈉對消化系統(tǒng)黏膜具有毒性作用，破壞黏膜完整性并造成功能障礙[11]，同時因適口性降低而造成其采食量減少。而1 000 mg/kg劑量組對AA肉雞后期生長性能沒有顯著影響，可能原因是肉雞生長前期對于外界應(yīng)激較為敏感，而后期已經(jīng)逐漸適應(yīng)1 000 mg/kg的添加量，全期隨著脫氫醋酸鈉劑量的增加，肉雞的生長性能下降。

研究發(fā)現(xiàn)，胸腺、脾臟、法氏囊的質(zhì)量可用于評價雞的免疫狀況，三者絕對質(zhì)量和相對質(zhì)量越大，則說明機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫機(jī)能越強(qiáng)[12-13]。胸腺屬于中樞免疫器官，是T細(xì)胞繁殖分化的主要場所，決定外周免疫器官的發(fā)育，對提高機(jī)體的細(xì)胞免疫功能具有重要意義[14]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，脫氫醋酸鈉的添加能夠在一定程度上抑制胸腺、脾臟、法氏囊的發(fā)育，對AA肉雞的免疫機(jī)能造成不良影響，這與本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)的脫氫醋酸鈉能夠降低肉雞的生長性能存在一定聯(lián)系。

白細(xì)胞數(shù)目是應(yīng)激反應(yīng)的重要指標(biāo)之一，白細(xì)胞升高往往意味著器官和組織的急性或慢性的感染、炎癥、組織損傷等情況，是機(jī)體的一種自我保護(hù)措施[15-16]。在本實(shí)驗(yàn)中，高劑量的脫氫醋酸鈉能夠?qū)е翧A肉雞血液中白細(xì)胞含量的提高，原因可能是其導(dǎo)致機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)，對器官和組織造成一定傷害。

動物機(jī)體的代謝是一個不斷變化的過程，血液中的許多生化參數(shù)受年齡、發(fā)育階段、營養(yǎng)水平和內(nèi)分泌狀況的影響，因而這些參數(shù)也反映了機(jī)體生理狀況是否良好。血液生化指標(biāo)的測定已經(jīng)廣泛地應(yīng)用到許多研究領(lǐng)域，如動物疾病的診斷、體現(xiàn)受試動物對其所在自然生態(tài)環(huán)境的適應(yīng)程度等[17]。血清蛋白主要由白蛋白和球蛋白組成，其中球蛋白占比例較大，而球蛋白由單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生，因此當(dāng)機(jī)體循環(huán)抗體水平升高時，血清球蛋白數(shù)量增加，引起總蛋白含量上升[18]。本實(shí)驗(yàn)中，肉雞生長前期，血清中球蛋白含量隨著脫氫醋酸鈉添加量的增加有所降低，證實(shí)脫氫醋酸鈉的添加會對體液免疫造成不良影響。肌酐是肌酸和磷酸肌酸代謝的終產(chǎn)物，它主要由肌肉中磷酸肌酸通過非酶促反應(yīng)生成，若肌酐含量高于正常范圍時，則通過腎小球?yàn)V過，隨尿液排出體外[19]，不被腎小球重吸收，腎小管也分泌少量的肌酐。若腎臟機(jī)能受損，肌酐的正常排泄受到阻礙，致使血清中肌酐含量增加，意味著腎功能受到損害，當(dāng)發(fā)生腎功能障礙，無法排除過多肌酐時會在體內(nèi)沉積并導(dǎo)致水代謝失調(diào)、代謝性酸中毒、腎性骨病、內(nèi)分泌失調(diào)、鈉鉀代謝失調(diào)等癥狀[20]，是判斷腎臟功能的重要指標(biāo)[21]。本實(shí)驗(yàn)中，AA肉雞生長后期TES3組血清肌酐含量顯著提高，說明當(dāng)脫氫醋酸鈉的添加量為2 000 mg/kg時會對腎功能造成一定損傷。國內(nèi)研究高劑量脫氫醋酸鈉對機(jī)體損傷的報(bào)道較少，在本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步細(xì)化其添加劑量，探討其造成機(jī)體損傷的機(jī)理，對指導(dǎo)該食品添加劑的科學(xué)應(yīng)用有重要意義。

4　結(jié) 論

在本實(shí)驗(yàn)條件下，基礎(chǔ)日糧中添加0～2 000 mg/kg脫氫醋酸鈉，隨著劑量的增加，AA肉雞的生長性能逐漸降低，死淘率升高并造成免疫應(yīng)激，影響腎臟的正常代謝。結(jié)果表明：在食品中添加高劑量的脫氫醋酸鈉會對機(jī)體代謝產(chǎn)生不良影響，應(yīng)用時應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定控制劑量。

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Tolerance of Broilers to Dietary Sodium Dehydroacetate as an Antimildew Agent

SUN Defa, YANG Zhibin, QU Changbo, ZHANG Lili, WANG Tian*
(College of Animal Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

Abstract:The tolerance of broilers to dietary sodium dehydroacetate as an antimildew agent was studied in order to provide valuable references establishing its maximum safe dose in food and feed and evaluating its safety. Totally 240 Arbor Acres (AA) broilers were randomly divided into 4 groups with 6 replicates in each group, fed with basal diet (CON), and basal diet supplemented with 200 mg/kg (TES1), 1 000 mg/kg (TES2) and 2 000 mg/kg (TES3) sodium Dehydroacetate, respectively. The growth performance and serum biochemical indicators of broilers were measured. Results showed: 1) during the early growth stage, average daily feed intake (ADFI), average daily gain (ADG), average body weight (ABW), and feed efficiency (FE) of TES3 group were significantly or highly significantly lower than those of other groups (P < 0.05 or 0.01), and TES2 group presented significantly lower ADG and ABW than CON and TES1 groups (P < 0.05); during the later growth stage, ADFI and ADG of TES3 group were significantly reduced when compared with other groups (P < 0.05); 2) the number of white blood cells (WBCs) in TES2 and TES3 groups were significantly higher than in CON and TES1 groups (P < 0.05) during the later growth stage; 3) compared with CON group, the level of serum albumin in TES2 group was significantly decreased at the later growth stage, and TES2 group exhibited a significant reduction in serum aspartic aminotransferase concentration and a significant increase in serum creatinine concentration (P < 0.05) in comparison to TES1 group. These results suggest that 2 000 mg/kg sodium dehydroacetate may negatively influence the growth performance and metabolism of broilers and cause renal dysfunction.

Key words:sodium dehydroacetate; Arbor Acres (AA) broiler; growing performance; serum biochemical indicators

doi:10.7506/spkx1002-6630-201507035

中圖分類號：TS251

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2015）07-0189-05

*通信作者：王恬（1958—），男，教授，博士，研究方向?yàn)閯游锷L發(fā)育的營養(yǎng)調(diào)控。E-mail：twang18@163.com

作者簡介：孫得發(fā)（1989—），男，碩士研究生，研究方向?yàn)閯游餇I養(yǎng)與飼料科學(xué)。E-mail：sun859969@163.com

基金項(xiàng)目：江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目

收稿日期：2014-04-03