張可+齊遵利

摘要：通過(guò)在養(yǎng)殖羅非魚的水體里添加不同濃度的枯草芽孢桿菌，分別測(cè)定羅非魚酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、溶菌酶五種免疫酶活性指標(biāo)及生長(zhǎng)性能指標(biāo)，探討在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚的免疫酶活性及生長(zhǎng)性能的影響，目的為評(píng)價(jià)枯草芽孢桿菌在羅非魚養(yǎng)殖過(guò)程中使用效果的生物學(xué)指標(biāo)，以及為了推廣枯草芽孢桿菌在羅非魚養(yǎng)殖過(guò)程中提高羅非魚免疫功能提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：枯草芽孢桿菌；羅非魚；免疫酶活性；生長(zhǎng)性能

1材料及方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)以羅非魚為試驗(yàn)對(duì)象，挑選體質(zhì)健壯、體表無(wú)傷的羅非魚，平均每條羅非魚的重量為15 g左右。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)渤海校區(qū)實(shí)驗(yàn)育苗室內(nèi)進(jìn)行，水族箱規(guī)格為100 cm×60 cm×50 cm，試驗(yàn)前將水族箱和實(shí)驗(yàn)所用器具用高錳酸鉀浸泡消毒24 h。水體體積為100 cm×60 cm×35 cm，并充分曝氣24 h后將魚放入水族箱中。共16個(gè)水族箱，每個(gè)水族箱里放25尾魚。待魚適應(yīng)環(huán)境以后開(kāi)始投喂飼料并正式試驗(yàn)。

試驗(yàn)分為5個(gè)處理組，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)3個(gè)平行，分別添加濃度為102、103、104、105、106 cfu/mL的枯草芽孢桿菌，對(duì)照組不添加枯草芽孢桿菌。每個(gè)水族箱中飼養(yǎng)25尾羅非魚。

1.3日常管理

每天投食兩次，上午8：30、下午2：30各投喂一次，投喂量以多數(shù)魚不攝食為準(zhǔn)。試驗(yàn)期間不換水，每天上午清洗過(guò)濾棉。試驗(yàn)期間定時(shí)觀察羅非魚的生長(zhǎng)及健康狀況，定期往水體里添加菌粉以保持水體菌的濃度。

1.4試驗(yàn)處理

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，在實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)的第30 d采樣，采樣時(shí)取其血液，用肝素鈉潤(rùn)洗注射器后抽取2～3 mL的血液，放置冰箱冷凍條件下12 h，然后在離心機(jī)里離心，3 500 r/min離心15 min，取上清液待測(cè)。

生長(zhǎng)性能的測(cè)定為羅非魚的特定生長(zhǎng)率及成活率，特定生長(zhǎng)率的計(jì)算公式為SGR=100×（lnW末-lnW初）/t（養(yǎng)殖天數(shù)），成活率的計(jì)算公式為成活率=成活的數(shù)量÷總數(shù)量×100%。

免疫指標(biāo)的測(cè)定為酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM），均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，具體操作按其說(shuō)明書進(jìn)行。采用SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，運(yùn)用ANOVA單因素進(jìn)行方差分析及Duncans多重比較對(duì)實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，顯著水平為P<0.05。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚血清中酸性磷酸酶（ACP）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

2.2水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚血清中堿性磷酸酶（AKP）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

2.3水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

2.4水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

2.5水體添加枯草芽孢桿菌對(duì)羅非魚血清中溶菌酶（LZM）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

2.6對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能的影響

添加枯草芽孢桿菌濃度分別為102cfu/mL、103cfu/mL、104cfu/mL、105cfu/mL、106cfu/mL及對(duì)照組的特定生長(zhǎng)率分別為2.628、2.918、3877、3.510、3.587、2.197，成活率分別為88%、92%、96%、92%、80%、80%。添加組的特定生長(zhǎng)率顯著高于空白組，添加濃度為104cfu/mL的生長(zhǎng)性能表現(xiàn)最好。

3結(jié)論

酸性磷酸酶（ACP）是動(dòng)物體內(nèi)重要的調(diào)控酶，它可以直接參與血細(xì)胞的包囊作用和吞噬作用，并能幫助殺死及吞噬病原體。

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，104cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加組明顯高于對(duì)照組，因此ACP可以作為評(píng)價(jià)動(dòng)物免疫功能的指標(biāo)。

堿性磷酸酶（AKP）普遍存在于動(dòng)植物體內(nèi)，是重要的調(diào)控酶，可直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移與磷酸脂的代謝，可為ADP磷酸轉(zhuǎn)化形成ATP提供更多的必需無(wú)機(jī)磷酸，也是動(dòng)物體內(nèi)重要的解毒體系，可作為評(píng)價(jià)羅非魚免疫功能的指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，104cfu/mL添加組中AKP的活性最高，且添加效果最為明顯，因此AKP可以作為評(píng)價(jià)羅非魚的免疫功能指標(biāo)。

谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）是一種重要的氨基轉(zhuǎn)移酶，廣泛存在于動(dòng)物組織細(xì)胞中。當(dāng)血清中AST的活性升高或組織內(nèi)AST的活性降低時(shí)，即表明動(dòng)物機(jī)體的肝臟、心臟等內(nèi)臟器官發(fā)生損傷。AST 活性變化也是反映肝細(xì)胞受到損傷的主要敏感指標(biāo)。

在本試驗(yàn)階段，104cfu/mL添加組的羅非魚血清中AST活性最高，顯著高于其他組（P<005），且試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉(zhuǎn)氨作用，在肝臟內(nèi)的活力最大的一種酶。存在于很多器官中，對(duì)肝臟的蛋白質(zhì)代謝起到樞紐的作用，攝入的糖類、脂肪及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)經(jīng)由轉(zhuǎn)氨基作用轉(zhuǎn)變?yōu)樗璧鞍踪|(zhì)，而轉(zhuǎn)氨基作用最重要的就是需要谷丙轉(zhuǎn)氨酶的催化作用。

在本試驗(yàn)階段，104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<005），這兩個(gè)添加組無(wú)明顯差異（P>0.05），試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。

溶菌酶（LZM）是一種堿性蛋白酶，廣泛存在于動(dòng)物體內(nèi)的某些淋巴組織和體液中。LZM活性的高低，可作為衡量水產(chǎn)動(dòng)物免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)之一，在一定程度上也能反映出動(dòng)物機(jī)體的非特異性體液免疫的狀態(tài)。當(dāng)血清中LZM活性提高時(shí)，機(jī)體的免疫能力也會(huì)相應(yīng)提高。

在本試驗(yàn)中，104cfu/mL添加組魚血清的LZM活性最高，且試驗(yàn)組的溶菌酶活性顯著高于對(duì)照組。

特定生長(zhǎng)率是指生長(zhǎng)率與生長(zhǎng)天數(shù)的比，是衡量生長(zhǎng)狀況的一個(gè)常用指標(biāo)，特定生長(zhǎng)率越大，代表每天體重增長(zhǎng)越快。成活率表示成活的數(shù)量占總量的百分比，成活率越高，反映枯草芽孢桿菌對(duì)魚的生長(zhǎng)性能的影響越高。本試驗(yàn)中，104cfu/mL添加組羅非魚的特定生長(zhǎng)率和成活率都是最高的，且試驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組。

在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對(duì)養(yǎng)殖羅非魚的免疫酶活性及生長(zhǎng)性能都能起到一定的作用，且明顯高于空白對(duì)照組，其中添加濃度為104cfu/mL的所起到的作用最為明顯。