張西坤，牛洪欣，徐忠法(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，濟南250031)

D2-40在肝細(xì)胞癌組織中的表達及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用

張西坤，牛洪欣，徐忠法(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，濟南250031)

摘要：目的探討D2-40在肝細(xì)胞癌組織中的表達及其在淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。方法選擇35例肝細(xì)胞癌患者的手術(shù)標(biāo)本，其中伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例、無轉(zhuǎn)移24例。分別取癌組織(肝癌組)、癌邊緣組織(癌邊緣組)及癌以遠(距腫瘤邊緣10 cm以上)正常組織(對照組)，采用SP免疫組化兩步法檢測三組D2-40表達，計數(shù)微淋巴管密度。結(jié)果D2-40的陽性表達主要分布于癌邊緣組織內(nèi)淋巴管生長密集區(qū)。癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。肝癌組未見明顯微淋巴管，微淋巴管主要分布于癌邊緣組及對照組。癌邊緣組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者微淋巴管密度高于未轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。結(jié)論 D2-40可促進肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移，其機制為促進微淋巴管形成。D2-40表達可作為預(yù)測肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。

關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞癌；淋巴轉(zhuǎn)移；微淋巴管密度

肝細(xì)胞癌是原發(fā)性肝癌中最常見的一種類型，約占原發(fā)性肝癌的90%以上[1]。肝細(xì)胞癌容易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，研究淋巴轉(zhuǎn)移規(guī)律對于肝細(xì)胞癌的診斷及治療具有重要意義。D2-40是一種分子量為40 kD的唾液酸糖蛋白，可用于標(biāo)記腫瘤組織中的淋巴管內(nèi)皮，是新發(fā)現(xiàn)的判斷腫瘤組織是否發(fā)生轉(zhuǎn)移的特異性淋巴管標(biāo)志物[2]。2011年1月～2013年6月，我們檢測了35例肝細(xì)胞癌組織中D2-40的表達，探討D2-40在肝細(xì)胞肝癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用機制。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2011年1月～2013年1月在山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者手術(shù)標(biāo)本35例份，每例份標(biāo)本均包括癌組織(肝細(xì)胞癌組)、癌邊緣組織(癌邊緣組)及癌以遠(距腫瘤邊緣10 cm以上)正常組織(對照組)?；颊咧心?0例、女5例，年齡41～72歲、中位年齡68歲。均經(jīng)病理檢查確診。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例、無轉(zhuǎn)移24例。術(shù)前均未行任何抗腫瘤治療。所選病例均通過醫(yī)院倫理道德委員會的同意，并由患者或其家屬簽署知情同意書。

1.2相關(guān)指標(biāo)觀察

1.2.1D2-40表達將手術(shù)標(biāo)本放入10%中性甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度為4 μm，行SP免疫組織化學(xué)兩步法檢測三組標(biāo)本中D2-40的表達。由兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師采用雙盲法閱片，D2-40以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每例切片至少計數(shù)10個200倍視野，計數(shù)陽性細(xì)胞占所有細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，陽性細(xì)胞數(shù)﹥25%為陽性，以陽性細(xì)胞數(shù)所占比例分為：﹤10%(-)，11%～25%(+)，25%～50%(++)，﹥50%(+++)。

1.2.2微淋巴管密度(MLVD) 將D2-40陽性的淋巴管腔視為微淋巴管，其管腔為棕黃色細(xì)長管壁包繞的條索狀或塌陷狀不規(guī)則形，內(nèi)無紅細(xì)胞，由大且向腔內(nèi)突出的單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成。按照Choi等[3]方法由兩名診斷豐富的病理醫(yī)生按雙盲法先于低倍鏡(10×10)下全面觀察切片，確定淋巴管密度最高且染色清晰、背景對照良好的區(qū)域，再于高倍鏡(10×20)下計數(shù)微淋巴管數(shù)目。每例切片先后計數(shù)2次，記錄4個視野內(nèi)的微淋巴管數(shù)，取其平均數(shù)。

2結(jié)果

2.1D2-40表達D2-40的陽性表達主要分布于癌邊緣組織內(nèi)，淋巴管生長密集區(qū)。肝細(xì)胞癌組D2-40未見明顯陽性表達。癌邊緣組D2-40陽性表達率為77.14%，組內(nèi)轉(zhuǎn)移、無轉(zhuǎn)移者陽性表達率分別為88.89%、79.17%，癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。見表1。

表1　三組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移者D2-40表達率

注：與同組轉(zhuǎn)移者比較，﹡P<0.05。

2.2微淋巴管密度肝細(xì)胞癌組未見微淋巴管分布。癌邊緣組織微淋巴管分布較密集，且管腔擴張。癌邊緣組、對照組微淋巴管染色清晰，微淋巴管呈擴張狀態(tài)，管壁薄而不規(guī)則，無平滑肌，管腔內(nèi)未見紅細(xì)胞、偶見淋巴細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞無染色。癌邊緣組微淋巴管計數(shù)為10.21±1.45，組內(nèi)轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移組微淋巴管計數(shù)分別為14.67±3.44、6.17±2.93，組內(nèi)相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05。見表1。

3討論

目前，我國肝細(xì)胞肝癌發(fā)病率逐年升高，但目前缺乏針對肝細(xì)胞癌特異性的早期診斷方法，且癌細(xì)胞容易通過血管、淋巴管發(fā)生肝內(nèi)及淋巴轉(zhuǎn)移，因此深入研究肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的途徑、淋巴轉(zhuǎn)移的規(guī)律，對于提高肝細(xì)胞癌整體診治水平有著十分重要的意義。淋巴轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的主要途徑之一[4]，由于對肝細(xì)胞癌微淋巴管分布狀況及淋巴引流、腫瘤轉(zhuǎn)移途徑缺乏足夠的認(rèn)識，腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的機制目前仍不十分清楚，其中一個重要的問題是腫瘤組織中除了微血管外是否還存在微淋巴管，后者是否同微血管一樣，也為腫瘤提供了轉(zhuǎn)移通道，雖然淋巴管對腫瘤轉(zhuǎn)移的作用非常明顯，但由于缺乏適當(dāng)?shù)牧馨蛢?nèi)皮特異性標(biāo)記物和對淋巴管生成因子的認(rèn)識，使得對腫瘤淋巴管生成的研究相對滯后。

淋巴轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肝細(xì)胞癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計，肝細(xì)胞癌的淋巴轉(zhuǎn)移率為25.5 %～32.9 %[5，6]。由于缺乏鑒別淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，目前對腫瘤患者淋巴轉(zhuǎn)移的早期診斷尚較困難。D2-40 是一種新近被發(fā)現(xiàn)的分子量為40 kDa的淋巴管標(biāo)記物，具有高度的特異性和敏感性[7]，其主要定位于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜上，個別可呈現(xiàn)由幾個內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成的細(xì)胞簇或閉鎖的條索狀。D2-40在淋巴管瘤中陽性表達，在良性血管腫瘤中表達陰性，可用于微淋巴管及新生淋巴管的定位及定量觀察[8，9]。文獻報道[10～13]，D2-40在結(jié)直腸癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、口腔癌等腫瘤組織中的表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、臨床分期等呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，D2-40的陽性表達主要分布于肝細(xì)胞癌癌邊緣組織內(nèi)，癌組織內(nèi)無明顯表達，癌邊緣組織內(nèi)淋巴管密度增大，可促使大量癌細(xì)胞進入淋巴管，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，提示常規(guī)檢查癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管密度可預(yù)測術(shù)后淋巴轉(zhuǎn)移。

淋巴轉(zhuǎn)移是肝細(xì)胞癌主要的轉(zhuǎn)移途徑之一，肝細(xì)胞癌淋巴轉(zhuǎn)移最容易累及肝門淋巴結(jié)。淋巴系統(tǒng)往往成為癌細(xì)胞潛伏、隱藏的主要場所，易導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。目前有關(guān)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的假說較公認(rèn)的有兩種[14]，一種認(rèn)為腫瘤周邊原有的微淋巴管結(jié)構(gòu)不完整，可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞容易進入淋巴管，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。另一種認(rèn)為如同腫瘤微血管生成促進腫瘤生長的機制，腫瘤周圍同樣存在新生的微淋巴管，有助于腫瘤擴散至淋巴系統(tǒng)，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。Roma等[15]用D2-40標(biāo)記前列腺癌中的微淋巴管，認(rèn)為有淋巴轉(zhuǎn)移組癌旁組織的微淋巴管密度明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移組。Sedivy等[16]對口腔鱗狀細(xì)胞癌進行研究，表明微淋巴管密度與腫瘤的分級、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌組未見明顯微淋巴管，微淋巴管主要分布于癌邊緣組織及癌以遠正常組織，癌邊緣組微淋巴管密度明顯高于對照組及肝細(xì)胞癌組，考慮癌邊緣組微淋巴管密度增高，可能與以下因素有關(guān)：一方面不斷生長的癌細(xì)胞可能產(chǎn)生機械擴張力，導(dǎo)致癌組織內(nèi)部間隙壓力升高，使微淋巴管萎縮、喪失功能；腫瘤細(xì)胞向四周侵襲生長的同時可能刺激癌邊緣組織分泌淋巴管生長因子，侵襲破壞癌組織微淋巴管，促使癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管的生長[17,18]，提示肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中可伴隨著新生淋巴管的生成，D2-40可作為預(yù)測肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。本研究發(fā)現(xiàn)，癌邊緣組發(fā)生轉(zhuǎn)移者D2-40陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移者，淋巴轉(zhuǎn)移患者癌邊緣組的微淋巴管密度高于未轉(zhuǎn)移者，肝細(xì)胞癌組轉(zhuǎn)移與未轉(zhuǎn)移患者均未發(fā)現(xiàn)微淋巴管密度，提示肝細(xì)胞癌邊緣組織內(nèi)微淋巴管密度增高可促進癌細(xì)胞通過淋巴轉(zhuǎn)移。

綜上所述，D2-40可促進肝細(xì)胞癌微淋巴管形成及淋巴轉(zhuǎn)移。D2-40的檢測可作為預(yù)測肝細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。

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(收稿日期：2014-10-10)

中圖分類號：R735.7

文獻標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2015)10-0074-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.10.028