郭利華+陳亞娟+郭利群+石穎+孫雨詩+章淼

摘要：目的 觀察菲寧膠囊對人肺癌A549裸小鼠移植瘤生長的影響。方法 取處于生長旺盛期的人肺癌A549瘤組織，剪切成約1.5 mm3大小的組織塊，無菌條件下接種于裸小鼠右側腋窩皮下。分4組：① 陰性對照組；② 陽性對照組；③ 聯(lián)合給藥組；④ 中藥組。結果 1.陰性對照組的腫瘤處于持續(xù)生長狀態(tài)；2.陽性對照組的腫瘤相對增殖率為50.04%，動物體重在實驗過程中出現(xiàn)明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異；3.聯(lián)合給藥組腫瘤相對增殖率為50.09%，但是脾臟指數(shù)明顯高于陽性對照組的脾臟指數(shù)；4.中藥組的腫瘤相對增殖率為70.6%。結論 中藥菲寧膠囊可考慮成為一種與腫瘤化療藥環(huán)磷酰胺聯(lián)用長期給藥從而達到增高抑瘤效果和提高生存質(zhì)量的藥物。

關鍵詞：菲寧膠囊；肺癌A549裸小鼠；實驗研究

中圖分類號：R285 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2014）12-0066-02

1 材料與方法

1.1 受試物與配制

1.1.1 環(huán)磷酰胺粉針劑（CTX） 200mg/支，山西普德藥業(yè)股份有限公司 。生產(chǎn)批號：04130202。 給藥前用生理鹽水稀釋至所需濃度。

1.1.2 菲寧膠囊藥液： “菲寧膠囊”中藥復方：人參15 g，沙參20 g，白術20 g，茯苓15 g，生苡仁30 g，虎杖15 g，石見穿15 g等16味。藥材由云南省中醫(yī)院中藥房提供。給藥前用生理鹽水配制成所需濃度。

1.2 動物 BALB/c-nu裸小鼠，SPF級，4～5w齡，雌性。由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2012-0001。

1.3 瘤種 A549，引自中科院上海藥物研究所。

1.4 實驗方案

1.4.1 分組

1.4.1.1 陰性對照組 與受試組同步給予N.S.；

1.4.1.2 陽性對照組 環(huán)磷酰胺（CTX），119.57 mg/kg（據(jù)成人每日用藥量：600 mg/m2）；

1.4.1.3 聯(lián)合給藥組 環(huán)磷酰胺+中藥菲寧膠囊藥液；

1.4.1.4 中藥組 中藥菲寧膠囊藥液，每味藥1袋/80 mL（據(jù)成人每日用藥量：每味藥2 袋/200 mL）。

1.4.2 給藥體積及給藥途徑 每周連續(xù)給藥5天后停藥2天，共3周。生理鹽水和中藥菲寧膠囊藥液按0.2 mL/10 g的給藥體積灌胃給藥（ig）；環(huán)磷酰胺按0.1 mL/10 g的給藥體積腹腔注射給藥（ip）。

1.4.3 實驗方法[1] 取處于生長旺盛期的人肺癌A549瘤組織，剪切成約1.5 mm3大小的組織塊，無菌條件下接種于裸小鼠右側腋窩皮下。在接種后8天，去除移植瘤未生長或生長過緩、過速的裸小鼠，選擇已形成100～300 mm3大小體積瘤組織的裸小鼠，按上述實驗方案隨機分組及給藥。實驗期間每周測量瘤徑和體重3次，3周后取材、測量瘤徑和稱量體重。每次測量后按以下公式計算腫瘤體積（TV）、相對腫瘤體積（RTV）和相對腫瘤增殖率（T/C %）：① TV（tumor volume）= 1/2×a×b2，其中a、b分別表示腫瘤的長和寬；② RTV（relative tumor volume）= Vt/V0，其中V0為分組給藥時（即d0）所測得的腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積；③ T/C（%）= TRTV/ CRTV×100%，其中TRTV為治療組的RTV，CRTV為陰性對照組的RTV。

1.4.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.0軟件包數(shù)據(jù)以（x±s）表示、組內(nèi)均數(shù)用配對t檢驗，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析；組間均數(shù)兩兩比較采用q檢驗。

國內(nèi)評價參考標準：T/C（%）>60%為無效，T/C（%）60%，并經(jīng)統(tǒng)計學分析P<0.05可判為有效。

2 結果

中藥菲寧膠囊對人肺癌A549裸小鼠移植瘤生長的影響見表1。由表1可知：實驗過程中陰性對照組的腫瘤處于持續(xù)生長狀態(tài)。陽性對照組，環(huán)磷酰胺在119.57mg/kg給藥劑量下，腫瘤相對增殖率（T/C %）為50.04%，有一定的抑瘤作用；與實驗開始時相比，動物體重在實驗過程中出現(xiàn)明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異（P<0.01）。聯(lián)合給藥組（腹腔注射環(huán)磷酰胺+口服菲寧膠囊中藥液），腫瘤相對增殖率（T/C %）為50.09%，與陽性對照基本無差異；給藥過程中，聯(lián)合組體重減輕程度與陽性組基本一致，但是脾臟指數(shù)明顯高于陽性對照組的脾臟指數(shù)（P<0.01）。中藥組，腫瘤相對增殖率（T/C %）為70.6%，未達到參考標準的抑瘤效果；但是其脾臟指數(shù)與陰性對照差異最?。≒<0.01）。

由以上表可知：實驗過程中陰性對照組的腫瘤處于持續(xù)生長狀態(tài)。陽性對照組，環(huán)磷酰胺在119.57mg/kg給藥劑量下，腫瘤相對增殖率（T/C%）為50.04%，有一定的抑瘤作用；與實驗開始時相比，動物體重在實驗過程中出現(xiàn)明顯的減輕，取材時脾臟明顯與陰性對照組有很大差異（P<0.01）。聯(lián)合給藥組（腹腔注射環(huán)磷酰胺+口服菲寧膠囊中藥液），腫瘤相對增殖率（T/C%）為50.09%，與陽性對照基本無差異；給藥過程中，聯(lián)合組體重減輕程度與陽性組基本一致，但是脾臟指數(shù)明顯高于陽性對照組的脾臟指數(shù)（P<0.01）。中藥組，腫瘤相對增殖率（T/C%）為70.6%，未達到參考標準的抑瘤效果；但是其脾臟指數(shù)與陰性對照差異最?。≒<0.01）。

3 急性毒性實驗研究

菲寧膠囊方中藥水煎濃縮液一次灌胃測不出LD50，故測其灌胃給藥的最大給藥量為387.2 g生藥/kg，相當于臨床成人（體重按60kg計）擬用量的108倍，觀察14天，未見動物行為表現(xiàn)、飲食、活動等有明顯異常，未見死亡。結果顯示本品短期服用比較安全。

課題組對中藥的水煎濃縮液（3.14 g生藥/g浸膏）進行了小鼠急性毒性試驗，小鼠未見死亡，但未測出LD50值，故試驗用3.14 g生藥/g水煎濃縮液.配制為4.30 g生藥/mL試品，結果表明小鼠的最大給藥量量為387.2 g生藥/kg，相當于臨床成人（體重按60 kg計）擬用量的108倍。表明本品在387.2g生藥/kg濃度以下時，對小鼠的急性毒性作用較低。

4 討論

菲寧膠囊是云南省名中醫(yī)李斯文教授治療肺癌三十余年豐富的臨床經(jīng)驗積累的結晶，在臨床應用中取得了良好的療效。該方主要由以益氣、養(yǎng)陰、健脾等扶正中藥為主，佐以清熱解毒、軟堅散結中藥為輔而成。設立人參、沙參、白術、茯苓等16味中藥為治療肺癌的基本方。方中人參、白術、茯苓、生苡仁、砂仁具有益氣健脾之功效，南北沙參具有滋陰生津之作用，浙貝、虎杖、石見穿則有清熱解毒，抗癌抑瘤作用；該方將攻補融為一體，使補而不助邪，攻而不傷正。全方共奏益氣健脾、消腫散結之功；主治中晚期肺癌（氣陰兩虛型）。

中醫(yī)藥治療肺癌的研究大多是臨床療效觀察，其獲效依據(jù)及其作用機理，以及如何增強用藥目的性與安全性等內(nèi)容尚不能闡明。而實驗研究大多以單味藥研究為主，復方的很少。本課題探討菲寧膠囊對人肺癌A549荷瘤裸小鼠移植瘤生長的影響，驗證其在臨床應用中的有效性，為進一步開發(fā)利用提供可靠的數(shù)據(jù)。

本實驗證實中藥菲寧膠囊服用比較安全，菲寧膠囊有抑制腫瘤生長的作用，可考慮成為一種與腫瘤化療藥環(huán)磷酰胺聯(lián)用長期給藥從而達到增高抑瘤效果和提高生存質(zhì)量的藥物，進一步證實中醫(yī)藥聯(lián)合西藥有減毒增效的作用。

參考文獻：

[1]孫均田.現(xiàn)代藥理實驗方法[M].北京：北京醫(yī)科大學.中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，2008.endprint