馮曉琴 王毅民 王懷秀 劉建榮 李 弘

山西省人民醫(yī)院，山西省太原市 030012

720例生殖異常患者的染色體核型分析

馮曉琴 王毅民 王懷秀 劉建榮 李 弘

山西省人民醫(yī)院，山西省太原市 030012

目的：探討男性少、弱、無(wú)精癥以及胎停育、畸胎、反復(fù)性流產(chǎn)等生殖異常患者的細(xì)胞遺傳學(xué)原因。方法：針對(duì)我院720例生殖異?；颊?，做常規(guī)技術(shù)的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，采用G顯帶法進(jìn)行染色體核型分析。結(jié)果：720例生殖異常患者中，檢出異常核型69例。其中，多態(tài)性核型為49例，包括9qh＋3例，inv（9）1例，Ds＋/Gs＋10例，Yqh＋35例。Turner綜合征3例，Klinefelter綜合征12例，平衡易位等5例。結(jié)論：染色體核型異常與生殖異常存在密切的關(guān)系，異常核型會(huì)導(dǎo)致男性少、弱、無(wú)精癥以及畸胎孕產(chǎn)史和妊娠的反復(fù)失敗，且染色體多態(tài)性與生殖異常關(guān)系尤為密切，建議臨床應(yīng)給予足夠重視。

染色體核型分析 生殖異常 染色體多態(tài)性

染色體核型分析是從遺傳學(xué)角度檢測(cè)人類(lèi)染色體的數(shù)目和結(jié)構(gòu)有無(wú)異常的一項(xiàng)診斷技術(shù)，作為輔助生殖技術(shù)中不可或缺的診斷技術(shù)，為輔助生殖、遺傳普查、產(chǎn)前診斷和遺傳咨詢(xún)提供可靠細(xì)胞遺傳學(xué)依據(jù)。染色體是組成細(xì)胞核的基本物質(zhì)，是基因的載體，控制著生物體各種生理和形態(tài)的遺傳性狀。染色體的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常會(huì)導(dǎo)致染色體疾病。如果夫妻雙方產(chǎn)生染色體數(shù)目異常的配子，會(huì)產(chǎn)生非整倍體的異常胚胎，進(jìn)而導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、畸胎等。如果染色體異常攜帶者自身染色體出現(xiàn)斷裂、重接和互換、易位、重復(fù)、倒位等異常染色體，同樣會(huì)導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、胎停育等不良妊娠[1］。我科室對(duì)就診的720例生殖異常患者做外周血染色體核型分析檢查，并結(jié)合理論確認(rèn)其臨床生殖異常表現(xiàn)與染色體核型異常的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 分析2013年2月－2015年6月前來(lái)我院就診的720例生殖異?；颊咧?，355例為其本人或其妻有反復(fù)流產(chǎn)史；211例為少、弱精癥，無(wú)精癥，單側(cè)或雙側(cè)隱睪及睪丸發(fā)育不良；73例為有畸形兒娩出史，剩余81例為原發(fā)性不孕，繼發(fā)性不孕及兩性畸形等。

1.2 方法 對(duì)上述患者作外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)和染色體核型分析，按照常規(guī)方法無(wú)菌采血0.3～0.5ml，37℃恒溫培養(yǎng)72h。收獲時(shí)，秋水仙堿1μg/μl終止，0.075%KCl低滲處理，甲醇∶冰醋酸（3∶1）固定，懸滴制片。采用G顯帶法進(jìn)行核型分析，根據(jù)人類(lèi)遺傳學(xué)國(guó)際命名體制（ISCN，2009）對(duì)染色體命名。每例計(jì)數(shù)20個(gè)中期分裂相，分析3～5個(gè)核型。

2 結(jié)果

2.1 染色體核型結(jié)果 720例生殖異?；颊咧校瑱z出異常核型69例。其中，多態(tài)性核型為49例，包括9qh＋3例，inv（9）1例，Ds＋/Gs＋10例，Yqh＋35例。特納氏綜合征3例，Klinefelter綜合征12例，平衡易位等5例。染色體多態(tài)核型如圖1所示，Klinefelter綜合征和易位核型如圖2所示。

圖1 染色體多態(tài)性核型

圖2 Klinefelter綜合征和易位核型

2.2 染色體異常核型與生殖異常的關(guān)聯(lián) 本研究中，染色體多態(tài)性核型為49例，包括9qh＋3例，inv（9）1例，分別表現(xiàn)為反復(fù)性流產(chǎn)和睪丸發(fā)育不良；Ds＋/Gs＋10例，D組6例，分別表現(xiàn)為無(wú)精癥、反復(fù)性流產(chǎn)等；G組4例，同樣臨床表現(xiàn)為反復(fù)性流產(chǎn)。Yqh＋35例，表現(xiàn)為少、弱精癥，無(wú)精癥，隱睪，睪丸發(fā)育不良以及其配偶反復(fù)性流產(chǎn)。Turner綜合征3例，表現(xiàn)為原發(fā)性閉經(jīng)、不孕、子宮發(fā)育不良，其中有1例超聲顯示腹腔有形似睪丸組織。Klinefelter綜合征12例，表現(xiàn)為無(wú)精癥或睪丸發(fā)育不良。平衡易位等5例，表現(xiàn)為無(wú)精癥、反復(fù)性流產(chǎn)、畸胎或胎停育。染色體異常核型與生殖異常臨床表現(xiàn)見(jiàn)表1，各類(lèi)核型占異常核型的比率及異常檢出率見(jiàn)表2。

3 討論

染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常直接導(dǎo)致人體表型的不同變異，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，染色體核型分析診斷對(duì)于臨床輔助生殖具有重要作用。染色體異常是導(dǎo)致男性少、弱、無(wú)精癥以及胎停育、不孕、畸形胎兒和反復(fù)性流產(chǎn)的一類(lèi)重要原因[2］。

3.1 染色體多態(tài)性與生殖異常 從表1中看出，反復(fù)性流產(chǎn)患者的染色體核型存在不同程度的變異，既有染色體的多態(tài)性類(lèi)型，也有平衡易位和羅伯遜易位的類(lèi)型，但是以多態(tài)類(lèi)型居多。染色體的多態(tài)性是指染色體結(jié)構(gòu)和帶紋強(qiáng)度存在恒定的但并非病理性的細(xì)微差異，通常存在于1、9、16號(hào)染色體和Y染色體的次縊痕以及D/G組的隨體區(qū)域，屬于結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，染色體的多態(tài)性缺乏遺傳活性，通常不引起表型的異常變化，不具有臨床意義[3］。然而，近年來(lái)研究表明，許多不良妊娠患者的核型分析在1、9、16號(hào)和Y染色體上大都存在一定的多態(tài)性改變，提示結(jié)構(gòu)性異染色質(zhì)產(chǎn)生的多態(tài)性可能會(huì)干擾著絲粒的功能，在細(xì)胞分裂時(shí)姐妹染色單體結(jié)合和分離出現(xiàn)紊亂，從而產(chǎn)生異常生殖細(xì)胞，造成不良妊娠[4］。端著絲粒染色體短臂上核仁組織區(qū)含有rRNA基因，在個(gè)體中差異性表達(dá)，核糖體rRNA可引起隨體區(qū)聯(lián)合，增加染色體在減數(shù)分裂時(shí)不分離的幾率[5，6］。本研究檢出的49例反復(fù)性流產(chǎn)患者，其中，9號(hào)多態(tài)性4例，D/G組多態(tài)性10例，提示9號(hào)次縊痕多態(tài)性和隨體多態(tài)性可能會(huì)增加減數(shù)分裂形成異常配子的不穩(wěn)定性以及胚胎的不穩(wěn)定性，是影響正常妊娠的干擾因素。另外35例反復(fù)性流產(chǎn)不良妊娠患者的核型大都是表現(xiàn)為其丈夫Y染色體多態(tài)性，這就提示Y染色體多態(tài)可能是引起流產(chǎn)的潛在原因。Y染色體長(zhǎng)臂有一段開(kāi)放閱讀框，其翻譯出的轉(zhuǎn)錄因子有助于正常精子的生成和發(fā)育。若Y染色體長(zhǎng)臂此區(qū)域缺失或異常增加，都會(huì)導(dǎo)致男性的少、弱、無(wú)精癥[4］。大Y染色體患者在臨床上表現(xiàn)為嚴(yán)重?zé)o精癥或反復(fù)性流產(chǎn)，在某種程度上增加了體外受精妊娠失敗的風(fēng)險(xiǎn)[7，8］。

表1 染色體異常核型與生殖異常表現(xiàn)

表2 異常核型比率和異常檢出率

3.2 其他平衡易位等與生殖異常 其他畸形胎兒孕產(chǎn)史和個(gè)別反復(fù)流產(chǎn)是由于平衡易位造成的，染色體之間容易發(fā)生易位的現(xiàn)象并非偶然，可能與各染色體核仁組織區(qū)重復(fù)DNA序列和結(jié)構(gòu)以及在間期中核仁的形成方式有關(guān)[1］。平衡易位攜帶者一般不會(huì)出現(xiàn)表型的改變，但其子代接受易位染色體后可能會(huì)形成異常胚胎，羅氏易位者，其子代容易產(chǎn)生單體型或三體型，引發(fā)流產(chǎn)[9］。

從表2可以看出，Yqh＋、Ds＋/Gs＋和Klinefelter綜合征占異常核型比例較高，且這三類(lèi)異常檢出率比其他異常核型較高一些。這就提示，在導(dǎo)致不孕不育的染色體異常核型因素中，Y染色體多態(tài)性、隨體組多態(tài)性和Klinefelter綜合征是更大的潛在異常因素。

綜上所述表明，第一，夫婦任何一方染色體核型異常，都會(huì)導(dǎo)致胎停育和反復(fù)性流產(chǎn)等生殖異常臨床癥狀。第二，反復(fù)性流產(chǎn)患者核型檢測(cè)大都表現(xiàn)為9號(hào)多態(tài)性、D/G組多態(tài)性和Y染色體多態(tài)性，由此可見(jiàn)，染色體多態(tài)性可能是導(dǎo)致反復(fù)性流產(chǎn)的潛在不穩(wěn)定因素。第三，在無(wú)精癥患者中，Klinefelter綜合征的異常檢出率較高，是導(dǎo)致不孕的重要原因。第四，平衡易位和羅氏易位者，也能引起流產(chǎn)和畸形胎兒孕產(chǎn)史。針對(duì)上述幾點(diǎn)，關(guān)于染色體異常導(dǎo)致的生殖異常，臨床應(yīng)給予足夠重視和深入思考，以便于染色體核型分析診斷技術(shù)可以為輔助生殖和遺傳學(xué)咨詢(xún)提供更客觀合理的指導(dǎo)，有助于育齡夫婦做出較佳的生育計(jì)劃。

[1]杜傳書(shū)，劉祖洞.醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，1983.

[2]Zhimulev IF，Beliaeva ES.Heterochromatin，gene position effect and gene silencing〔J〕.Genetica，2003，39（2）：187－201.

[3]李侃，熊焰，張靜.遺傳咨詢(xún)者染色體多態(tài)性與生殖異常關(guān)系的分析〔J〕.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2010，18（10）：40－41.

[4]Madon PF，Athalve AS，Parikh FR.Polymorphic variants on chromosomes probably play a significant role in infertility〔J〕.Reproductive Bio Medicine，2005，11（6）：726－732.

[5]Shen Y，Wang C，Hong D，et al.The relationship between polymorphisms in the promoter region of Tim－3and unexplained recurrent spontaneous abortion in Han Chinese women〔J〕.Reprod Biol Endocrinol，2013，11：104.

[6]昌業(yè)偉，楊蘇亞，楊迎桂.染色體多態(tài)性與疾病關(guān)系的探討〔J〕.中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志，2012，20（5）：65－66.

[7]王小榮，鄧劍霞，李津津.染色體多態(tài)性與臨床效應(yīng)及生殖關(guān)系的探究〔J〕.遺傳，2007，29（11）：1362－1366.

[8]李亞麗，高福祿，段相林.Y染色體多態(tài)性與臨床遺傳學(xué)效應(yīng)的研究〔J〕.中國(guó)婦幼保健，2013，28（25）：4192－4194.

[9]趙利娟，涂建成.170對(duì)習(xí)慣性流產(chǎn)夫婦染色體核型分析〔J〕.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，31（11）：1229－1233.

（編輯雅文）

Karyotype Analysis of 720 Patients with Abnormal Reproduction

FENG Xiaoqin，WANG Yimin，WANG Huaixiu，et al.Shanxi Provincial People’s Hospital，Taiyuan City，Shanxi Province 030012

Objective：To investigate the cytogenetic reason of patients under going reproductive abnormalities such as azoospermia，malformation fetus，recurrent spontaneous abortion.Methods：For examination of 720patients with reproductive abnormalities，as a conventional technique of peripheral blood lymphocyte culture，by using G banding karyotype analysis.Results：Of 720patients with abnormal reproductive，69cases of abnormal karyotypes was detected in this study.Among them，there were 49cases of the polymorphism karyotype，including 3cases in 9qh＋，1case in inv（9），10cases in Ds＋/Gs＋，35cases in Yqh＋，3cases in Turner syndrome，12cases in Klinefelter syndrome，5cases in balanced translocation.Conclusion：Abnormal chromosome karyotype and there is a close relationship between reproductive abnormalities and abnormal karyotype，leading azoospermia，malformation fetus，recurrent spontaneous abortion and so on.Further more，the relationship is closer between chromosome polymorphism and reproductive abnormalities，therefore，much more attention should be given to this point in clinical.

Karyotype analysis，Reproductive abnormalities，Chromosome polymorphism

R363.2＋5

A

1001－7585（2015）22－3040－03

2015－07－14