王明珠 張華 葉震璇 楊必偉 何宇晴

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）是一種病因不明的慢性器官特異性肝臟疾病。常見于女性，以肝臟門脈周圍的淋巴細(xì)胞浸潤、膽管上皮細(xì)胞特異性損傷及血清中高滴度抗線粒體抗體（AMA）為主要特征［1］。目前PBC的診斷通過抗線粒體抗體或其M2亞型、堿性磷酸酶的檢測及肝臟病理活檢3個標(biāo)準(zhǔn)中的兩項(xiàng)來確立。因肝臟病理活檢存在創(chuàng)傷性及取樣誤差，自身抗體的檢測成為PBC診斷的重要手段，其對該病的發(fā)病機(jī)制、治療及預(yù)后均有重要意義。本研究通過分析31例確診PBC患者的自身抗體AMA、AMA－M2、抗核抗體（ANA）檢測結(jié)果，初步探討PBC患者自身抗體特點(diǎn)，以期為臨床診斷提供實(shí)驗(yàn)室參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年1月至2014年3月在貴州省人民醫(yī)院住院的PBC患者31例，男4例，女27例，年齡44～79歲，平均年齡（61.7±9.7）歲。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 參照2009年美國肝病學(xué)會（AASLD）修訂的PBC的臨床診斷指南［2］，符合以下兩項(xiàng)可入選：（1）膽汁淤積的生化證據(jù)，主要基于堿性磷酸酶（ALP）升高；（2）AMA 陽性或 AMAM2陽性；（3）非化膿性破壞性膽管炎及小葉間膽管破壞的組織學(xué)證據(jù)。

1.3 方法和試劑 采用間接免疫熒光法進(jìn)行AMA和ANA的檢測，以抗體滴度≥1∶100為陽性，判讀范圍為（1∶100）、（1∶320）、（1∶1000）、（1∶3200）；采用免疫印跡法進(jìn)行 AMA－M2的檢測，以半定量（＋）為陽性，判讀范圍為（＋）、（＋＋）、（＋＋＋）。DL1300－1601－3G抗肝抗原譜抗體IgG檢測試劑盒（免疫印跡法）及FA1800－1010－2自身抗體譜IgG檢測試劑盒（間接免疫熒光法），均為德國歐蒙醫(yī)學(xué)診斷股份公司生產(chǎn)。試劑在有效期內(nèi)使用，實(shí)驗(yàn)操作步驟及判斷均按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AMA檢出結(jié)果 31例患者AMA陽性29例，陽性率93.55%。滴度為1∶100的6例（20.69%），1∶320的16例（55.17%），1∶1000的7例（24.14%），79.31%患者 AMA滴度≥1∶320。

2.2 AMA－M2檢出結(jié)果 31例患者AMA－M2均為陽性，陽性率100%，半定量（＋）3例（9.68%），（＋＋）1例（3.22%），（＋＋＋）27例（87.10%），90.32%患者AMA－M2半定量≥（＋＋）?？梢姶蟛糠諴BC患者表達(dá)高水平的AMA和AMA－M2。見表1。

表1 AMA滴度與AMA－M2半定量表達(dá)情況 ［n（%）］

2.3 ANA檢出結(jié)果 （1）ANA陽性檢出結(jié)果：31例患者中ANA陽性22例，陽性率70.97%。提示多數(shù)PBC患者可伴隨有ANA的出現(xiàn)。22例ANA陽性患者中AMA－M2均為陽性，21例合并AMA陽性。（2）ANA的熒光模型檢出結(jié)果：22例ANA陽性的患者中，單一型熒光模型16例（72.72%），混合熒光模型6例（27.27%）。單一熒光模型為著絲點(diǎn)型6例（27.27%），核顆粒型6例（27.27%），核膜型3例（13.65%），核點(diǎn)型1例（4.54%）?；旌蠠晒饽Ｐ蜑楹祟w粒＋著絲點(diǎn)2例（9.11%），核顆粒＋核點(diǎn)1例（4.54%），核顆粒＋核膜1例（4.54%），核膜＋核點(diǎn)1例（4.54%），核膜＋著絲點(diǎn)1例（4.54%）。可見PBC患者以單一型熒光模型為主，單一型熒光模型中又以著絲點(diǎn)型、核顆粒型、核膜型為主要模型。（3）ANA的滴度檢出情況：16例單一型熒光模型患者中滴度為1∶100有4例（25.0%），1∶320有8例（50.0%），1∶1000有4例（25.0%），其中75%的患者滴度≥1∶320?？梢姲殡SANA出現(xiàn)的PBC患者主要表達(dá)高滴度的ANA。（4）ANA與AMA、AMA－M2的關(guān)系：ANA在AMA各滴度組的表達(dá)，AMA＜1∶100組中ANA陽性1例（4.54%），AMA＝1∶100組中 ANA 陽性6例（27.27%），AMA≥1∶320組中 ANA 陽性15例（68.19%）。AMA≥1∶320組中ANA的陽性率與AMA＜1∶100組、AMA 1∶100組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝33.48，P＜0.05）。ANA在 M2（＋）組中陽性3例（13.63%），在 M2（＋＋～＋＋＋）組中陽性19例（86.37%），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝142.22，P＜0.05）。說明表達(dá)高水平 AMA或AMA－M2的PBC患者ANA發(fā)生率明顯高于表達(dá)低水平患者。

3 討 論

PBC是最常見的一類自身免疫性肝病。近年來，隨著人們對疾病認(rèn)識的加深和診斷技術(shù)的提高，尤其是對自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體篩查的臨床應(yīng)用，PBC在我國肝病患者中檢出率逐年上升。自1965年人們首次發(fā)現(xiàn)PBC患者血清中存在AMA以來，該抗體已成為診斷PBC的標(biāo)志性抗體，AMA可分為9個亞型，其中以M2亞型對PBC的診斷最具特異性［3］，AMA－M2的靶抗原是丙酮酸脫氫酶（PDC）的E2成分，主要存在于PBC患者膽管上皮細(xì)胞，有研究［4－5］報(bào)道，AMA 和 AMA－M2在 PBC患者的陽性率為92.5%和95%，本研究結(jié)果分別為93.5%和100%，較報(bào)道略高，可能與地區(qū)差異性及樣本例數(shù)過少有關(guān)。本資料中AMA及AMA－M2均呈較高水平表達(dá)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。但出現(xiàn)AMA與AMA－M2的不一致性，提示聯(lián)合間接免疫熒光法和免疫印跡法檢測，可避免漏診和誤診。

除了AMA外，部分PBC患者中還存在ANA，其中核膜型和核點(diǎn)型ANA對PBC有較高的特異性，其針對的靶抗原主要為gp210和sp100，其敏感度為20%～35%，但特異性高達(dá)97%以上，可作為AMA陰性患者診斷PBC的血清學(xué)指標(biāo)［6－8］。本文有1例AMA陰性ANA呈核膜型患者，針對此類較典型的熒光模型，進(jìn)一步行靶抗原gp210的檢測可避免PBC漏診。本文結(jié)果顯示PBC患者ANA特征如下：（1）檢出率較高，達(dá)70.97%；（2）以單一型熒光模型為主，著絲點(diǎn)型、核顆粒型、核膜型是PBC患者ANA的主要熒光模式；（3）ANA主要出現(xiàn)在表達(dá)高水平AMA或AMA－M2的PBC患者中，且以高滴度為主。本資料中ANA的主要熒光模型中出現(xiàn)核顆粒型，與文獻(xiàn)［9］報(bào)道不一致，提示可能重疊其他自身免疫病，可進(jìn)一步行ANA譜檢測，尋找其相應(yīng)靶抗原，避免其他自身免疫病的漏診。

AMA和AMA－M2為PBC特征性抗體，而表現(xiàn)為核膜型和核點(diǎn)型的ANA在PBC患者中有很高的特異性。間接免疫熒光法檢測AMA、ANA和免疫印跡法檢測AMA－M2有很高的診斷價(jià)值，兩種方法檢測結(jié)果有不一致性，聯(lián)合兩種方法檢測，可提高PBC診斷的敏感性。

［1］ 王雪松，李永哲.原發(fā)性膽汁性肝硬化自身抗體譜研究進(jìn)展［J］.世界華人消化雜志，2006，14（3）：245－249.

［2］ Lindor KD，Gershwin ME，Poupon R.Primary biliary cirrhosis［J］.Hepatology，2009，50：291－308.

［3］ 張利方，鄭山根，閻有功，等.58例原發(fā)性膽汁性肝硬化患者自身抗體特征分析［J］.中國免疫學(xué)雜志，2007（5）：471－473.

［4］ 賈繼東，段維佳.原發(fā)性膽汁性肝硬化的研究進(jìn)展［J］.中華肝臟病雜志，2011，19（5）：321－322.

［5］ 張洋，李永哲，馮雪，等.原發(fā)性膽汁性肝硬化自身抗體檢測及臨床應(yīng)用［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，2（7）：760－763.

［6］ Kimagi T，Onji M.Presentation and diagnosis of primary biliary cirrhosis in the 21st century［J］.Clin Liver Dis，2008，12：243－259.

［7］ Bogdanos DP，Komorowaki L.Disease－specific auto－antibodies in primary biliary cirrhosis［J］.Clin Chim Acta，2011，412：502－512.

［8］ 翁厚光，曹維克，張迎梅，等.原發(fā)性膽汁性肝硬化患者自身抗體檢測分析［J］.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，17（3）：555－557.

［9］ 馮霞，閆惠萍，劉妍，等.58例原發(fā)性膽汁性肝硬化患者抗線粒體抗體和抗核抗體特征分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21（2）：106－109.