陳力 徐彭

（1.成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，四川 成都610500；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌330004）

竹子是禾本科竹亞科多年生常綠植物，目前對竹類資源的開發(fā)多限于對竹葉的利用。學(xué)者們通過多種方法分離純化，測定出了竹葉的多種化學(xué)成分。其中竹葉中的黃酮類成分也被許多學(xué)者廣泛報道。有實驗［1］表明，竹葉黃酮類具有明顯的抗氧化、降血脂、耐缺氧、抗血栓及多項改善心腦血管功能的作用。為此，在進(jìn)行“竹根的化學(xué)及其抗過敏活性物質(zhì)的研究”預(yù)試研究的同時，本文結(jié)合國內(nèi)外文獻(xiàn)報道和大量預(yù)實驗的基礎(chǔ)上，觀察竹根黃酮類成分對小鼠抗心肌缺血損傷的保護(hù)作用?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 藥品與試劑 青皮竹竹根采自江西中醫(yī)學(xué)院灣里校區(qū)周圍，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為禾本科箣竹屬植物青皮竹的干燥根。使用前將其切斷后用粉碎機(jī)粉碎，烘干后備用；竹根黃酮類成分1（1號樣品）、竹根黃酮類成分2（2號樣品），江西中醫(yī)藥大學(xué)現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室制備；垂體后葉素注射液：南京新百藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H32026638，1mL，6U；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（100t）：南京建成生物工程研究所，批號20080919；丙二醛（MDA）試劑盒（100t）：南京建成生物工程研究所，批號20080919；香丹注射液（陽性藥物組）：四川三精升和制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z51021609，產(chǎn)品批號071210，規(guī)格10mL×5支。

1.2 儀器 千分之一電子天平，METTER－TOLEDO，型號PL203；萬分之一電子天平，Sartorius，型號BS 124S；低溫離心機(jī)：常州國華電器有限公司，型號80－2；電動玻璃組織勻漿機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司，型號DY89－1；pH計：上海三信儀表廠；隔水式電器恒溫培養(yǎng)箱：浙江紹興柯橋醫(yī)療器械廠，代號 HY35－35×40，編號79－102。

1.3 實驗動物 清潔級昆明種小鼠，雌雄兼有，體質(zhì)量18～22g，江西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供（合格證號：SCXK贛2005－0001）。恒溫，恒濕，實驗期間自由飲水，飼常規(guī)固體飼料。

1.4 方法 （1）對小鼠常壓耐缺氧的保護(hù)實驗：昆明小鼠60只，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，按照隨機(jī)數(shù)字表分為6組，每組10只。分別為：1號樣品低劑量組（生藥6.94g／kg，下同）、1號樣品高劑量組（生藥13.88g／kg，下同）、2號樣品低劑量組（生藥12.05g／kg）、2 號 樣 品 高 劑 量 組 （生 藥24.10g／kg）、陽 性 對 照 組 （香 丹 注 射 液，15.60g／kg，下同）、NS空白對照組（20mL／kg）。各組按相應(yīng)劑量連續(xù)給藥6d，末次給藥1h后，將各組動物置入200mL的密封廣口瓶中（瓶底鋪放20g鈉石灰以吸收水分和二氧化碳），觀察小鼠存活時間（以小鼠最后一次喘息抽搐的時間為止；所有數(shù)據(jù)最后都折算為以s為單位進(jìn)行統(tǒng)計分析）［2］。（2）對夾閉氣管小鼠死亡的保護(hù)實驗：昆明種小鼠60只，體質(zhì)量20～22g，雌雄各半，按隨機(jī)數(shù)字表分為6組，分組方法與給藥劑量同（1）。各組按相應(yīng)劑量連續(xù)給藥6d，末次給藥20min后，用水合氯醛腹腔注射麻醉（763.70mg／kg），暴露氣管并用動脈夾夾閉氣管，立即觀察并記錄喘息時間（以小鼠最后一次喘息抽搐的時間為止；所有數(shù)據(jù)最后都折算為以s為單位進(jìn)行統(tǒng)計分析）［3］。（3）對小鼠心肌缺血線粒體膜SOD、MDA的影響實驗：昆明種小鼠70只，體質(zhì)量18～22g，雌雄各半，按隨機(jī)數(shù)字表分為7組，每組10只。分別為：1號樣品低劑量組（生藥6.94g／kg）、1號樣品高劑量組（生藥13.88g／kg）、2號樣品低劑量組（生藥12.05g／kg）、2號樣品高劑 量 組 （生 藥 24.10g／kg）、陽 性 對 照 組（15.60g／kg）、NS空白對照組（20mL／kg）、NS模型對照組（20mL／kg）。各組按相應(yīng)劑量連續(xù)給藥6d，末次給藥1h后，NS模型組和各受試組、陽性組均腹腔注射垂體后葉素（PIT），劑量為30U／kg；NS對照組腹腔注射等容積的NS溶液。注射PIT 15min后將動物處死立即摘取心臟，在冰冷（4℃）磷酸緩沖液（0.05mol／L pH 7.8含0.1mmol／L EDTA）中洗去血液，濾紙拭干，稱重；取心臟用眼科剪盡快剪碎，倒入玻璃勻漿管中，加入9倍于心臟重量的冰冷勻漿介質(zhì)，將玻璃勻漿管插入盛有冰水混合物的容器中勻漿；將制備好的勻漿移入2mL離心管，用低溫離心機(jī)以2 000 r／min，4℃條件下離心10min，棄去沉淀；取上清液用低溫高速離心機(jī)以10 000 r／min，4 ℃條件下離心 15min，棄去上清液，沉淀物即為線粒體。將分離的線粒體用20倍的冰冷勻漿介質(zhì)制備成混懸液，在0～4℃儲存，測定SOD 與 MDA 含量［4］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，所有實驗均采用單因素方差分析，結(jié)果以（±s）表示。

2 結(jié) 果

2.1 對小鼠常壓耐缺氧的保護(hù)實驗結(jié)果 對小鼠常壓耐缺氧的保護(hù)實驗結(jié)果見表1。

表1 小鼠常壓耐缺氧存活時間±s）

表1 小鼠常壓耐缺氧存活時間±s）

注：與空白組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組 別 動物數(shù) 存活時間／s 10 14.50±0.81 1號樣品低劑量組 10 16.05±2.29 1號樣品高劑量組 10 16.50±2.20＊2號樣品低劑量組 10 15.80±1.66 2號樣品高劑量組 10 17.05±2.29＊＊陽性對照組 10 17.70±2.33 NS空白對照組＊＊

2.2 對夾閉氣管小鼠死亡的保護(hù)實驗結(jié)果 對夾閉氣管小鼠死亡的保護(hù)實驗結(jié)果見表2。

表2 夾閉氣管小鼠喘息時間 （±s）

表2 夾閉氣管小鼠喘息時間 （±s）

注：與空白組比較，＊P＜0.01。

組 別 動物數(shù) 喘息時間／s 10 78.00±7.86 1號樣品低劑量組 10 90.40±4.13＊1號樣品高劑量組 10 96.02±6.21＊2號樣品低劑量組 10 92.80±4.81＊2號樣品高劑量組 10 99.31±11.75＊陽性對照組 10 103.06±9.39 NS空白對照組＊

2.3 對小鼠心肌缺血線粒體膜SOD、MDA的影響實驗結(jié)果 對小鼠心肌缺血線粒體膜SOD、MDA的影響實驗結(jié)果見表3。

表3 小鼠心肌線粒體膜SOD、MDA含量比較（ˉx±s）

3 討 論

由于心肌在缺血時血流量減少，不能獲得足夠的氧氣，會導(dǎo)致其代謝過程紊亂，尤其是能量物質(zhì)的生成劇減，正常心功能難以維持；因此，心肌缺血的最根本防治措施是改善血供，降低氧耗，通過清除或?qū)褂泻ξ镔|(zhì)對心肌的不良影響以保護(hù)心肌。

目前，心肌缺血的傳統(tǒng)藥物治療方案主要是以活血化瘀、理氣通脈的香丹注射液、復(fù)方丹參滴丸、地奧心血康和脈絡(luò)寧等復(fù)方制劑為主。我們選用經(jīng)現(xiàn)代研究證實的具有降低全血黏度和紅細(xì)胞壓積，降低由葡聚糖和膠原－腎上腺素引起的血小板聚集、提高心肌組織中SOD活力，降低MDA含量，提高Na＋－K＋－ATP酶和Ca2＋－ATP酶的活性、對急性心肌缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用的香丹注射液為陽性藥物來復(fù)制相關(guān)的動物模型［5］。

從我們首先進(jìn)行的小鼠常壓耐缺氧的保護(hù)實驗與對夾閉氣管小鼠死亡的保護(hù)實驗結(jié)果來看：竹根黃酮類成分均可以延長小鼠常壓耐缺氧的存活時間（1號樣品高劑量組和2號樣品高劑量組）、也能夠明顯延長夾閉小鼠氣管的存活時間（1號樣品各劑量組和2號樣品各劑量組）。這從整體動物實驗的角度，證實了禾本科箣竹屬植物青皮竹的干燥根中的黃酮類成分［6］，可以通過降低心肌耗氧量或改善心臟能量供應(yīng)，對模型小鼠缺血心肌起到一定的保護(hù)作用。

心肌缺血時，打破了正常情況下氧自由基產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡，加上此時自由基清除酶的活性降低，導(dǎo)致體內(nèi)大量自由基堆積［7］。氧自由基還可以與生物膜上的脂類物質(zhì)反應(yīng)形成多種脂質(zhì)過氧化物，引起膜的流動性和通透性發(fā)生改變，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能受損，加劇心肌損傷和功能障礙［8－9］。

在缺血小鼠心肌細(xì)胞線粒體活性檢測的實驗中，我們發(fā)現(xiàn)，在相對比較極端的情況下（在實驗檢測之前，我們給小鼠注射垂體后葉素，加重小鼠心肌缺血狀態(tài)），1號樣品高劑量組和2號樣品組動物的心肌線粒體中MDA值均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明竹根黃酮類成分可以對抗垂體后葉素所導(dǎo)致的心肌線粒體的細(xì)胞膜損傷。但是給藥各組的SOD值高低，并不表現(xiàn)出顯著差異，這與文獻(xiàn)［10］的結(jié)果相一致，與文獻(xiàn)［11］不一致。說明竹根黃酮類成分是否是通過提高SOD活性來降低MDA，防止氧自由基對心肌線粒體的破壞的途徑，還有待于進(jìn)一步的研究。

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