張錦霞??杜曉霞??曹鳳秋??李國(guó)峰??趙寧民

[摘要] 目的 建立HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸含量的方法。 方法 采用Kromasil -ODS（250mm×4.6mm，5?m）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：323nm。 結(jié)果 阿魏酸和咖啡酸的線性范圍分別為：13.62～257.4mg/mL （r=0.9996）和29.40～515.7mg/mL （r=0.9995）；平均回收率（n=6）分別為阿魏酸96.6%（RSD=0.8%）和咖啡酸95.6%（RSD=0.5%）。 結(jié)論 該法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，為全面評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地川芎藥材的質(zhì)量提供方法。

[關(guān)鍵詞] HPLC；阿魏酸；咖啡酸；川芎

[中圖分類號(hào)] R917 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）21-102-03

川芎（Rhizoma Chuanxiong）為傘形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort.）的干燥根莖，其所含主要有效成分有酚酸類、內(nèi)酯類、生物堿和揮發(fā)油等[1]，廣泛應(yīng)用于臨床治療。目前，對(duì)川芎中成分的含量測(cè)定多集中在阿魏酸、藁本內(nèi)酯和川芎嗪等的測(cè)定[2-4]。本研究將川芎藥材中阿魏酸和咖啡酸兩組分含量同時(shí)測(cè)定，并對(duì)不同產(chǎn)地的藥材進(jìn)行含量比較，以完善川芎的質(zhì)量控制。

1 試劑與方法

1.1 儀器

Agilent-1100型高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器（DAD）、四元梯度泵、在線真空脫氣機(jī)和柱溫箱。超聲波清洗器（DS3120 DC），RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試劑

甲醇為色譜級(jí)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

1.3 試驗(yàn)用藥

阿魏酸、咖啡酸對(duì)照品（自制，經(jīng)HPLC檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)均>99.0%）。川芎購(gòu)自四川等10產(chǎn)地，經(jīng)鑒定均為正品。

1.4 方法

1.4.1 溶液制備

1.4.1.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 分別取阿魏酸和咖啡酸對(duì)照品適量，用甲醇溶解，制成濃度分別為0.5008mg/mL和1.000mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.4.1.2 供試品溶液的制備 選取不同產(chǎn)地的川芎藥材，粉碎過篩后，分別精密稱定粉末約1.0g，置錐形瓶中，然后加入0.5mol/L NaOH溶液50mL，超聲提取20min，共提取3次，冷卻，靜置，離心，取上清液，用稀HCl調(diào)pH=2，然后用乙酸乙酯等量萃取3次，合并萃取液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干，用甲醇復(fù)溶并稀釋至25mL量瓶中，0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

1.4.2 色譜條件 色譜柱：Kromasil -ODS（250mm× 4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%醋酸水（35：65）；檢測(cè)波長(zhǎng)：320nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL；柱溫：30℃。

2 結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按照上述樣品處理方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，兩峰之間的分離度大于1.5；理論塔板數(shù)大于30 000；拖尾因子在0.95～1.05之間，均滿足定量要求。色譜圖見圖1。

（B）

1.咖啡酸；2.阿魏酸

2.2 線性關(guān)系的考察

分別精密量取阿魏酸和咖啡酸對(duì)照品溶液適量，配成混合對(duì)照品系列溶液，按照上述色譜條件，進(jìn)樣分析，以各自的濃度X（μg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到阿魏酸和咖啡酸回歸方程分別為：Y=5.339×104X+230.8，r=0.9996；Y=4.588×104X+470.2，r=0.9995。線性范圍分別為：13.62～57.40μg/mL和29.40～515.7μg/mL。

2.3 精密度試驗(yàn)

取阿魏酸和咖啡酸的中濃度混合對(duì)照品溶液，按照1.4.2色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次。分別測(cè)得阿魏酸和咖啡酸的峰面積，計(jì)算兩組分峰面積的RSD分別為0.3%和0.5%，精密度良好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取6份同一產(chǎn)地川芎藥材粉末，精密稱定，按照1.4.1項(xiàng)下處理，按1.4.2色譜條件，進(jìn)樣分析。阿魏酸和咖啡酸含量的RSD分別為0.2%和0.2%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12h，按照2.1項(xiàng)下處理，按2.2色譜條件，進(jìn)樣分析。阿魏酸和咖啡酸峰面積的RSD分別為0.7%和0.3%。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取同一產(chǎn)地已知含量的川芎藥材粉末6份，加入已知濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，再加入0.5mol/L NaOH溶液至50mL，按照按2.2色譜條件進(jìn)樣分析并計(jì)算其加樣回收率。阿魏酸和咖啡酸的平均回收率分別為96.6%和95.6%，RSD分別為0.9%和0.5%。見表1。

2.7 樣品測(cè)定

取不同產(chǎn)地的川芎藥材粉末精密稱定1.00g，按照2.1項(xiàng)下處理，按2.2色譜條件，進(jìn)行分析，分別計(jì)算阿魏酸和咖啡酸的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 提取條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)通過考察不同酚酸類成分的提取方法[5-8]，比較了甲醇、甲醇-水、甲醇-5%甲酸水、0.5mol/L NaOH溶液這4種不同的提取溶劑，氯仿、乙酸乙酯等2種不同的萃取溶液，對(duì)樣品進(jìn)行提取分析后進(jìn)樣分析，通過考察阿魏酸和咖啡酸的含量，從而選擇了最佳的提取條件。

3.2 色譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察了3根不同的色譜柱，分別為Waters-C18（150mm×3.9mm，4μm）；Venusil XBP C18（L）（250mm×4.6 mm，5μm）和Kromasil -ODS （250mm×4.6mm，5μm），綜合考慮選擇Kromasil色譜柱。參考藥典[9]選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm，此波長(zhǎng)可避免雜質(zhì)干擾且可較好的檢測(cè)該兩組分。endprint

川芎道地藥材的形成模式為道地產(chǎn)區(qū)獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境與先進(jìn)的栽培種植技術(shù)相結(jié)合的雙因素關(guān)聯(lián)決定型，川芎有效成分之間、土壤營(yíng)養(yǎng)值之間均存在一定的相關(guān)關(guān)系，不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究采用HPLC法分析不同產(chǎn)地的川芎樣品，結(jié)果表明各產(chǎn)地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻(xiàn)研究一致[12-13]。對(duì)不同產(chǎn)地的川芎進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，可以完善川芎的質(zhì)控體系，具有重要意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測(cè)定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國(guó)平.氣相色譜法測(cè)定川芎油中阿魏酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠(yuǎn)金.HPLC/MS測(cè)定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學(xué)通報(bào)，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學(xué)東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營(yíng)養(yǎng)值相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產(chǎn)地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級(jí)劃分內(nèi)涵研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產(chǎn)地川芎對(duì)家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint

川芎道地藥材的形成模式為道地產(chǎn)區(qū)獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境與先進(jìn)的栽培種植技術(shù)相結(jié)合的雙因素關(guān)聯(lián)決定型，川芎有效成分之間、土壤營(yíng)養(yǎng)值之間均存在一定的相關(guān)關(guān)系，不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究采用HPLC法分析不同產(chǎn)地的川芎樣品，結(jié)果表明各產(chǎn)地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻(xiàn)研究一致[12-13]。對(duì)不同產(chǎn)地的川芎進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，可以完善川芎的質(zhì)控體系，具有重要意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測(cè)定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國(guó)平.氣相色譜法測(cè)定川芎油中阿魏酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠(yuǎn)金.HPLC/MS測(cè)定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學(xué)通報(bào)，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學(xué)東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營(yíng)養(yǎng)值相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產(chǎn)地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級(jí)劃分內(nèi)涵研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產(chǎn)地川芎對(duì)家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint

川芎道地藥材的形成模式為道地產(chǎn)區(qū)獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境與先進(jìn)的栽培種植技術(shù)相結(jié)合的雙因素關(guān)聯(lián)決定型，川芎有效成分之間、土壤營(yíng)養(yǎng)值之間均存在一定的相關(guān)關(guān)系，不同產(chǎn)地藥材質(zhì)量差別巨大[10-11]。阿魏酸和咖啡酸是川芎的主要有效成分，可以作為川芎質(zhì)量的評(píng)價(jià)指標(biāo)。本研究采用HPLC法分析不同產(chǎn)地的川芎樣品，結(jié)果表明各產(chǎn)地藥材中所含的阿魏酸和咖啡酸的含量均有明顯差別，最大可相差2倍，與其他文獻(xiàn)研究一致[12-13]。對(duì)不同產(chǎn)地的川芎進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，可以完善川芎的質(zhì)控體系，具有重要意義。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 舒冰，周重建.中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（9）：1043-1047.

[2] 王漪檬，張暉芬.HPLC法同時(shí)測(cè)定川芎藥材中3種有效成分的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2109-2112.

[3] 張慧，裴志東.HPLC法測(cè)定川芎及制劑中阿魏酸的含量[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7（4）：394.

[4] 李秋怡，干國(guó)平.氣相色譜法測(cè)定川芎油中阿魏酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18（7）：1687-1688.

[5] 張囡，杜麗麗.中藥酚酸類的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2006，8（2）：25-28.

[6] 許海棠，徐遠(yuǎn)金.HPLC/MS測(cè)定蒲公英顆粒中綠原酸，咖啡酸和阿魏酸的含量[J].化學(xué)通報(bào)，2008，6：415-419.

[7] 晏媛，劉世霆.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定蒲公英中咖啡酸和阿魏酸的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23（3）：229-231.

[8] 劉江云，楊學(xué)東.天然酚酸類化合物的反相高效液相色譜分析[J].色譜，2002，20（3）：245-248.

[9] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：38.

[10] 陳林，彭成，劉友平，等.川芎道地藥材形成模式的探討[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（16）：2303-2305.

[11] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.川芎有效成分與土壤營(yíng)養(yǎng)值相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（24）：121-125.

[12] 銀玲，彭月，陳鴻平，等.新老產(chǎn)地川芎中酚酸類成分的含量比較及川芎等級(jí)劃分內(nèi)涵研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（11）：91-94.

[13] 梅超南，曾瑾，張了云，等.不同產(chǎn)地川芎對(duì)家兔血小板聚集、小鼠凝血功能及血瘀大鼠血液流變性的品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[J].中藥藥理與臨床，2014，30（2）：110-112.

（收稿日期：2014-08-06）endprint