高登　肖輝

【摘要】 目的 探討結核桿菌聚合酶鏈反應（PCR）在肺外結核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對結核桿菌進行檢測比較。結果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本PCR法100%陽性， 對照組PCR法100%陰性。結論 PCR法對結核桿菌的檢測具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷中具有很好的診斷參考價值。

【關鍵詞】 結核桿菌聚合酶鏈反應；肺外結核；早期；快速；診斷價值

肺外結核是指結核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結核病。常見的如結核性腦膜炎、結核性胸（腹）膜炎、淋巴結核、腎結核、骨結核等。肺結核的診斷通過流行病學、影像學、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結核由于發(fā)病范圍廣、檢測所需標本如腦脊液、胸腹水等獲取相對困難、特殊， 與肺結核相比有其特殊性。因而在肺外結核中應用結核桿菌PCR（聚合酶鏈反應）技術能夠準確、快速的進行診斷?，F(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結核桿菌PCR檢測的134例標本的檢測， 現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結核桿菌PCR檢測均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結核， 為實驗組；57例確診為非肺外結核， 為對照組。

1. 2 標本 134例標本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標本均由護士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴增儀， 試劑由中山大學達安基因股份有限公司生產(chǎn)的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標準操作規(guī)程， 以-～++++報告結果。

1. 3. 3 結核桿菌培養(yǎng)法 標本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

肺外結核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計學處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在送檢標本中， 有46例做結核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性結果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對照組非肺外結核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結核菌素試驗， 其陽性僅表示受結核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實驗陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會漏檢。培養(yǎng)法雖然對結核病的診斷比較可靠， 但結核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導致細胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準確度、靈敏度雖可取， 本次實驗培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點是：培養(yǎng)法由于耗時長， 對臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應體系中通過樣本中結核桿菌DNA， 對其進行體外快速、高保真的復制增殖， 使標本中極微量的結核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號而被檢測到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點。本次實驗結果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準確度和高靈敏度。此特點已有報道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因對擴增產(chǎn)物要進行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題。可因污染而出現(xiàn)假陽性。但本次實驗是定量分析， 整個反應體系是邊擴增邊檢測， 反應體系是一個密閉的反應體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測結核桿菌， 其靈敏度和準確度明顯高于其他檢測方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷和治療中具有重要的應用價值， 應成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻

[1] 金建東.熒光定量PCR檢測痰結核桿菌 DNA 及其臨床應用.齊齊哈爾醫(yī)學院學報， 2010， 31（22）：3565-3566.

[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結核桿菌DNA檢測結果分析.醫(yī)學信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

[3] 丁娟娟， 陳卓昌.熒光定量PCR檢測胸腔積液中結核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥， 2012， 52（20）：71-72.

[收稿日期：2014-07-16]endprint

【摘要】 目的 探討結核桿菌聚合酶鏈反應（PCR）在肺外結核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對結核桿菌進行檢測比較。結果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本PCR法100%陽性， 對照組PCR法100%陰性。結論 PCR法對結核桿菌的檢測具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷中具有很好的診斷參考價值。

【關鍵詞】 結核桿菌聚合酶鏈反應；肺外結核；早期；快速；診斷價值

肺外結核是指結核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結核病。常見的如結核性腦膜炎、結核性胸（腹）膜炎、淋巴結核、腎結核、骨結核等。肺結核的診斷通過流行病學、影像學、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結核由于發(fā)病范圍廣、檢測所需標本如腦脊液、胸腹水等獲取相對困難、特殊， 與肺結核相比有其特殊性。因而在肺外結核中應用結核桿菌PCR（聚合酶鏈反應）技術能夠準確、快速的進行診斷。現(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結核桿菌PCR檢測的134例標本的檢測， 現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結核桿菌PCR檢測均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結核， 為實驗組；57例確診為非肺外結核， 為對照組。

1. 2 標本 134例標本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標本均由護士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴增儀， 試劑由中山大學達安基因股份有限公司生產(chǎn)的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標準操作規(guī)程， 以-～++++報告結果。

1. 3. 3 結核桿菌培養(yǎng)法 標本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

肺外結核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計學處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在送檢標本中， 有46例做結核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性結果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對照組非肺外結核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結核菌素試驗， 其陽性僅表示受結核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實驗陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會漏檢。培養(yǎng)法雖然對結核病的診斷比較可靠， 但結核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導致細胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準確度、靈敏度雖可取， 本次實驗培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點是：培養(yǎng)法由于耗時長， 對臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應體系中通過樣本中結核桿菌DNA， 對其進行體外快速、高保真的復制增殖， 使標本中極微量的結核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號而被檢測到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點。本次實驗結果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準確度和高靈敏度。此特點已有報道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因對擴增產(chǎn)物要進行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題?？梢蛭廴径霈F(xiàn)假陽性。但本次實驗是定量分析， 整個反應體系是邊擴增邊檢測， 反應體系是一個密閉的反應體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測結核桿菌， 其靈敏度和準確度明顯高于其他檢測方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷和治療中具有重要的應用價值， 應成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻

[1] 金建東.熒光定量PCR檢測痰結核桿菌 DNA 及其臨床應用.齊齊哈爾醫(yī)學院學報， 2010， 31（22）：3565-3566.

[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結核桿菌DNA檢測結果分析.醫(yī)學信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

[3] 丁娟娟， 陳卓昌.熒光定量PCR檢測胸腔積液中結核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥， 2012， 52（20）：71-72.

[收稿日期：2014-07-16]endprint

【摘要】 目的 探討結核桿菌聚合酶鏈反應（PCR）在肺外結核病中早期診斷的臨床意義。方法 收集134例標本， 分別用抗酸染色法、培養(yǎng)法、PCR法對結核桿菌進行檢測比較。結果 抗酸染色法與PCR法比較陽性率分別為23.4%、53.2%；培養(yǎng)法與PCR法比較陽性率分別為28.3%、47.8%， 兩組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性率比抗酸染色法、培養(yǎng)法分別高出了29.8%、19.5%；并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本PCR法100%陽性， 對照組PCR法100%陰性。結論 PCR法對結核桿菌的檢測具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷中具有很好的診斷參考價值。

【關鍵詞】 結核桿菌聚合酶鏈反應；肺外結核；早期；快速；診斷價值

肺外結核是指結核桿菌感染肺部以外的組織、器官等引起的結核病。常見的如結核性腦膜炎、結核性胸（腹）膜炎、淋巴結核、腎結核、骨結核等。肺結核的診斷通過流行病學、影像學、痰檢等方法診斷已經(jīng)很成熟[1]。肺外結核由于發(fā)病范圍廣、檢測所需標本如腦脊液、胸腹水等獲取相對困難、特殊， 與肺結核相比有其特殊性。因而在肺外結核中應用結核桿菌PCR（聚合酶鏈反應）技術能夠準確、快速的進行診斷。現(xiàn)就本院2009年1月～2014年3月結核桿菌PCR檢測的134例標本的檢測， 現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 134例結核桿菌PCR檢測均為本院的住院患者。其中男83例， 年齡3～78歲， 平均年齡36.3歲；女51例， 年齡5～82歲， 平均年齡30.4歲。134例患者中， 77例被臨床確診為肺外結核， 為實驗組；57例確診為非肺外結核， 為對照組。

1. 2 標本 134例標本中有胸腹水81例， 腦脊液24例， 尿液13例， 血液8例， 穿刺液8例。以上標本均由護士采集于加蓋的滅菌容器中（血液標本用EDTA-K2抗凝血）立即送檢。

1. 3 儀器及方法

1. 3. 1 PCR法 儀器用ABI GeneAmp 5700型基因擴增儀， 試劑由中山大學達安基因股份有限公司生產(chǎn)的結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒（PCR-熒光法）。操作和陰陽性判斷均按照試劑說明書進行。

1. 3. 2 抗酸染色法 用萋尼氏抗酸染色法做濃集涂片染色， 按標準操作規(guī)程， 以-～++++報告結果。

1. 3. 3 結核桿菌培養(yǎng)法 標本離心取沉淀物接種到改良羅氏培養(yǎng)基斜面上， 置37℃培養(yǎng)8周。有不透明淡黃色、粗糙、干燥、凸起于培養(yǎng)基或成菜花樣菌落生長并做抗酸染色。符合以上條件者為培養(yǎng)陽性， 否則陰性。

1. 4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

肺外結核77例中， PCR法陽性41例， 陽性率53.2% （41/77）；抗酸染色法陽性18例， 陽性率23.4%（18/77）， 并且18例抗酸染色陽性標本PCR呈陽性。經(jīng)統(tǒng)計學處理， 兩種方法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在送檢標本中， 有46例做結核桿菌培養(yǎng)， 陽性13例， 陽性率28.3%（13/46）， 在培養(yǎng)的46例標本中PCR法陽性22例， 陽性率47.8%（22/46）， 并且13例培養(yǎng)陽性標本PCR法全部陽性。兩法比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。PCR法陽性結果數(shù)值5.88×102～3.29×105 copy/ml。涂片陽性在±～+++之間。在對照組非肺外結核的57例中， PCR法、抗酸染色法及培養(yǎng)法均為陰性。見表1， 表2。

3 討論

肺外結核在身體除毛發(fā)、指甲外多器官組織都可發(fā)病， 感染途徑、表現(xiàn)癥狀不盡相同， 診斷方法、檢測手段也各有不同。多數(shù)患者的病情都被其他病癥所掩蓋。因而早期診斷顯得尤其重要。通常所用的檢查方法中， 結核菌素試驗， 其陽性僅表示受結核桿菌感染， 并不一定發(fā)病?？顾崛旧芷渌种U菌等的影響， 準確度、靈敏度都受到一定程度的限制。本次實驗陽性率僅23.4%。大量的病例僅憑這種方法會漏檢。培養(yǎng)法雖然對結核病的診斷比較可靠， 但結核桿菌生長緩慢， 通常需要2～4周才有菌落生長。另外， 有些病例經(jīng)抗癆藥物治療后， 結核桿菌受抑制， 需要6～8周甚至20周才出現(xiàn)菌落。更甚者由于抗癆藥物的影響導致細胞壁缺陷而使培養(yǎng)失敗。也就是說， 培養(yǎng)法準確度、靈敏度雖可取， 本次實驗培養(yǎng)法陽性率28.3%， 但重要的一點是：培養(yǎng)法由于耗時長， 對臨床的早期診斷和治療基本上是沒有意義的。而PCR法是在特定的反應體系中通過樣本中結核桿菌DNA， 對其進行體外快速、高保真的復制增殖， 使標本中極微量的結核桿菌DNA被迅速放大到巨大的信號而被檢測到， 具有高特異性、高靈敏度、快速簡便等特點。本次實驗結果其拷貝數(shù)5.88×102～3.29×105 copy/ml足以說明這一點。其陽性率與抗酸染色法、培養(yǎng)法比較， 分別高出了29.8%、19.5%。并且抗酸染色法和培養(yǎng)法陽性的標本在PCR法中100%陽性。突顯了PCR法的高準確度和高靈敏度。此特點已有報道[2， 3]。PCR法在定性分析中， 因對擴增產(chǎn)物要進行瓊脂電泳， 存在PCR污染問題?？梢蛭廴径霈F(xiàn)假陽性。但本次實驗是定量分析， 整個反應體系是邊擴增邊檢測， 反應體系是一個密閉的反應體系。很少存在污染而呈現(xiàn)假陽性。因而在57例非肺外結核病例中， PCR法均為陰性。這也從另一方面說明了PCR法的高特異性和高靈敏性。

綜上所述， PCR法檢測結核桿菌， 其靈敏度和準確度明顯高于其他檢測方法。具有高特異、高敏感、快速、簡便等特點， 在肺外結核的早期診斷和治療中具有重要的應用價值， 應成為一種成熟的常規(guī)方法而大力推廣。使其在結核病的診治中發(fā)揮重要的作用。

參考文獻

[1] 金建東.熒光定量PCR檢測痰結核桿菌 DNA 及其臨床應用.齊齊哈爾醫(yī)學院學報， 2010， 31（22）：3565-3566.

[2] 羅振元， 黃盛文， 吳嫻，等.1624例不同類型樣本結核桿菌DNA檢測結果分析.醫(yī)學信息（上旬刊）， 2010， 23（9）：3376-3378.

[3] 丁娟娟， 陳卓昌.熒光定量PCR檢測胸腔積液中結核分支桿菌DNA的臨床研究.山東醫(yī)藥， 2012， 52（20）：71-72.

[收稿日期：2014-07-16]endprint